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标题: 【求助】如何调整流动相梯度使氨基酸混标很好地分离？ [打印本页]

作者: 紫烟 时间: 2015-9-22 16:36 标题: 【求助】如何调整流动相梯度使氨基酸混标很好地分离？

相关检测项目：
氨基酸
在下现在在优化液相条件，用流动相为A：10mM甲酸铵水溶液，加0.1%甲酸；B：甲醇：水（95:5），加2mM甲酸铵和0.1%甲酸，测10种氨基酸的混标，试了很多种梯度都不能把样品很好地分开，而且峰形也很差，如图所示是其中一个梯度，实验室师姐之前用过的，我现在做也不行。求大神解答调整流动相梯度有没有什么规律可循，感激不尽！

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作者: 丁香@@ 时间: 2015-9-22 16:36

峰型不好很正常，我们氨基酸用液相做

作者: 紫烟 时间: 2015-9-22 16:38

这是自己胡乱试了一个梯度，效果更差。。。

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作者: taoshengyijiu 时间: 2015-9-22 16:38

你可以试试厂家氨基酸分析包里的流动相

作者: 紫烟 时间: 2015-9-22 16:39

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原帖由 taoshengyijiu 于 2015-9-22 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你可以试试厂家氨基酸分析包里的流动相

我们的机器是二手的，都不知道有没有这些，一般是附在说明书里的吧？回头找找，谢谢了

作者: DDD 时间: 2015-9-22 16:39

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原帖由紫烟于 2015-9-22 16:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我们的机器是二手的，都不知道有没有这些，一般是附在说明书里的吧？回头找找，谢谢了

= =！不知道楼主是什么仪器！
这个不在说明书里！
找有分析包的厂家要文献吧
一直都用这分析包来做氨基酸，效果挺不错，就是耗材贵了点

作者: 紫烟 时间: 2015-9-22 16:40

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原帖由 DDD 于 2015-9-22 16:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

= =！不知道楼主是什么仪器！
这个不在说明书里！
找有分析包的厂家要文献吧
一直都用这分析包来做氨基酸，效果挺不错，就是耗材贵了点

好吧见笑了，我们的仪器是waters最古老的那种，没听说有分析包呢

作者: DDD 时间: 2015-9-22 16:40

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原帖由紫烟于 2015-9-22 16:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

好吧见笑了，我们的仪器是waters最古老的那种，没听说有分析包呢

waters有氨基酸的分析包！
找他们销售要，之前想用waters的分析包，但是联系他们很久都不搭理，直接用第二个厂家的

作者: idea2011 时间: 2015-9-22 16:41

氨基酸用那个标准做呀？

作者: biabiade 时间: 2015-9-22 16:42

在下现在在优化液相条件，用流动相为A：10mM甲酸铵水溶液，加0.1%甲酸；B：甲醇：水（95:5），加2mM甲酸铵和0.1%甲酸，测10种氨基酸的混标，试了很多种梯度都不能把样品很好地分开，而且峰形也很差，如图所示是其中一个梯度，实验室师姐之前用过的，我现在做也不行。求大神解答调整流动相梯度有没有什么规律可循，感激不尽！

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楼主    针对氨基酸组分的检测：
         ①分离度一般用洗脱程序调节难度系数过大，但其分离度一般同流动相酸度、
            柱温箱温度关系较大；
         ②目前，氨基酸组分的检测主要采用的是HPLC柱前衍生法检测，效果不错，
            可同时检测多种(可达20多种)组分；
         ③看楼主给出的图谱，貌似使用液质检测吧，若使用液质，不衍生可直接检
            测氨基酸组分，即可定量、定性，其实不用太在乎分离度，关键是总离子
            谱图在选择离子谱图提取时，提取出的谱图能够分析，便于定量、定性即可。

作者: 紫烟 时间: 2015-9-22 16:42

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原帖由 biabiade 于 2015-9-22 16:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
在下现在在优化液相条件，用流动相为A：10mM甲酸铵水溶液，加0.1%甲酸；B：甲醇：水（95:5），加2mM甲酸铵和0.1%甲酸，测10种氨基酸的混标，试了很多种梯度都不能把样品很好地分开，而且峰形也很差，如图所示是其中一个梯度，实验室师姐之前用过 ...

我的确是使用的液质检测，原来可以不在乎分离度吗？我是打算先用标样把条件都优化好，后面就用这个条件去从实际样品中检测这些组分，这样如果保留时间都重叠在一起不会有影响吗？

作者: lorri 时间: 2015-9-22 16:43

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原帖由紫烟于 2015-9-22 16:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的确是使用的液质检测，原来可以不在乎分离度吗？我是打算先用标样把条件都优化好，后面就用这个条件去从实际样品中检测这些组分，这样如果保留时间都重叠在一起不会有影响吗？ ...

液质检测可以不在乎分离度。关键在于：从总离子谱图中提取选择离子谱图时，能够提取到你需要的谱图即可。
因为质谱的定性主要依靠离子碎片，即一个定量离子、一个或多个定性离子。

作者: xue258 时间: 2015-9-22 16:43

楼主的仪器是W家哪款

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