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标题: 【求助】梯度洗脱出现鬼峰 [打印本页]

作者: 药徒 时间: 2015-9-24 16:18 标题: 【求助】梯度洗脱出现鬼峰

大家好，我在用甲醇－水做梯度洗脱时，一直有一个平头的鬼峰出现，现在排查了很多原因，都找不出问题所在，请教大家是否遇到过此类问题，麻烦给予指教。

我用的梯度是：
               甲醇－水
0min    73    27
30min 73    27
40min 90    10
60min 90    10
流速：0.8ml/min       柱温：30度

在50min左右一直有一个峰高2～3mAu，面积100多的平头鬼峰

1.怀疑是试剂问题，将之前用的国产甲醇和实验室自制去离子水————换为：进口J.T.BAKER甲醇，娃哈哈纯净水，屈臣氏蒸馏水，鬼峰仍出现；
2.换一根柱子，鬼峰仍出现；
3.换机器（将Agilent换成waters），仍有鬼峰，只不过形状变成尖峰；
4.甲醇－水（90：10）等度洗脱，无鬼峰出现；
4.将柱子换为两通，梯度洗脱，无鬼峰出现；
5.将甲醇换为乙腈，同样的梯度同样的柱子，无鬼峰出现；
6.另外排除进样阀污染的原因，因为在以上实验过程中都没有进样，走的空白针。

PS:我现在做的样品只有用甲醇有比较好的分离效果，不能换用乙腈及其它试剂～

昨天打电话咨询了Agilent的工程师，工程师的意见是：猜测可能是水中杂质吸附在柱头，高比例甲醇时被冲洗出来；另外乙腈可能不能洗脱该杂质；而等度洗脱和用两通时，杂质不会被吸附；

今天和几个老师讨论了这个问题，有个老师的意见是有没有可能是梯度洗脱方法问题，从高比例的甲醇到更高比例的甲醇造成～请教有没有做梯度洗脱的朋友有类似的经验～感谢大家～

PS：现在做的是一个有关物质的方法，主峰在20多分钟出峰，用梯度洗脱的原因是大多数中间体是在主峰后面出峰，其中有一个中间体在该梯度方法中要到57min才出峰，也就是出峰是在鬼峰之后。

作者: eor 时间: 2015-9-24 16:18

打出了这么多字，真不容易。

根据你的情况，水和溶剂的可能性不大。可能是系统本身的，你是不是用了预柱？如果有去掉看看。

最好能找根新柱子，不用预柱试试，是不是鬼峰会消失。

作者: 药徒 时间: 2015-9-24 16:29

谢谢，没有用预柱，今天用了一根新柱试过，同样有这个鬼峰，真是阴魂不散啊。。。现在就是不知道是不是方法问题，有老师说我的甲醇比例太高，不知道有没有人用过这么高的甲醇梯度洗脱～

作者: xiaoxiaoniao 时间: 2015-9-24 16:29

用甲醇冲洗一段时间，不接柱子，用两通，高流速，清理一下系统。再上柱子看看。你用90:10的比例无鬼峰出现不能说明你的系统里没有污染，因为都成了背景了。

作者: 药徒 时间: 2015-9-24 16:30

好的，谢谢，马上试试，不过我之前有换过仪器，也是有鬼峰的。。。

作者: any333 时间: 2015-9-24 16:30

梯度洗脱我也遇到过这样的情况，换了柱子就好了

作者: iii_ii 时间: 2015-9-24 16:32

末端吸收检测的？
也许甲醇本身的问题。
实在不行你采用乙腈进行分析测试啊

作者: gogo 时间: 2015-9-24 16:32

最好还是换一下水，实验看看。

仪器系统用水-甲醇-异丙醇体系多清洗一下看看。

作者: yizhi 时间: 2015-9-24 16:32

您好! 最近我遇到了和您相同的问题,请问您解决了吗?如果解决了,是什么原因呢?谢谢!

作者: 131415 时间: 2015-9-24 16:32

建议先
不去柱子走空白
然后再
取下柱子走空白

作者: yhn 时间: 2015-9-24 16:33

我们前一天也开始出现这个问题。
情况差不多，也是梯度。
本来一直走梯度，这次换了个梯度方法、换了同一公司的另一批纯水（过柱成MILIQ水）。
流动相液配了好几次。甲醇、流动相等等也用了大流速冲洗
换柱子、二通阀、等梯度都用了，情况和楼主一样。
至今未解决
不知何故啊。还等着做实验呢

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