标题:
【求助】关于DEPC水的配制
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作者:
moonlight45
时间:
2015-10-9 11:00
标题:
【求助】关于DEPC水的配制
小弟近来做RT-PCR的试验,需要处理一批枪头和离心管。但是有几个问题:
1、文章说以上耗材需要经DECP水浸泡再烤干,高温压灭菌后备用。那么DEPC水如何配置呢?多少浓度合适呢?另外可以重复使用吗?
2、有些病人RNA提取液后加氯仿后上清很粘稠,不大好吸。有什么好办法处理呢?
3、因抗凝剂没有混匀导致的凝血,这样的标本能不能使用呢?
4、抗凝剂只能用EDTA吗?使用橘园酸钠可以吗?最长可以保存多就呢?
谢谢了!
作者:
idea2011
时间:
2015-10-9 11:01
DEPC水一般是千分之一的浓度,即1mlDEPC原液+999ml二蒸水即可,但是配置过程中一定带口罩和手套,有条件的话在通风厨里进行,因为DEPC有致癌性。我做RT_PCR时耗材没有用这个泡,一般高压消毒即可,别人这样做也没有事情。至于其他的问题我没有接触到,不好回答,好像抗凝剂不止这个还可以用肝素吧。
作者:
xevin
时间:
2015-10-9 11:01
1.DEPC水可以重复使用,最好用DEPC水处理,因为这样的话万一提不出来,可考虑的原因就少了.
2. 可以多加点氯仿,多离心一次,这样可以提高RNA的纯度,或将上清移到另一EP管里,再离心几分钟.
3. 这样的标本可以用的,因为你不是测离子,蛋白的浓度,RNA本身就要使细胞裂解吗.
4.这个问题不太清楚,不过没听说用橘园酸钠,最好查查看它是否对RNA有影响,因为试剂的离子浓度,PH值都对RNA有影响的.
作者:
moonlight45
时间:
2015-10-9 11:02
不用DEPC水泡也可以吗?我一定要试试了。
另外你说做mRNA的提取,抗凝剂可以用肝素吗?我怎么听说是除了肝素,其他抗凝剂都可以使用呢?盼赐教!谢谢
作者:
misswu61
时间:
2015-10-9 11:05
2、有些病人RNA提取液后加氯仿后上清很粘稠,不大好吸。有什么好办法处理呢?
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很简单啊,把抢头的尖头剪掉一点就可以了
作者:
moonlight45
时间:
2015-10-9 11:05
谢谢大家的回答!以上各位的意见是可用用肝素抗凝吗?-4度低温最多能保存多就呢?
还有,楼上的方法太有创意了!佩服佩服!回头一定试验下。
作者:
131415
时间:
2015-10-9 11:07
DEPC水可以重复使用两三次,我们做实验时耗材是用两次高压湿热灭菌的,效果还不错的,需要用的试剂是要用DEPC水新配制的!DEPC水一般都是用0.1%的。
作者:
seagate
时间:
2015-10-9 11:07
那么能用肝素抗凝吗?
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