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【求助】测量蛋白质浓度的方法
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作者:
n111
时间:
2015-10-23 12:58
标题:
【求助】测量蛋白质浓度的方法
最近投了一篇稿子,审稿人置疑了我测量蛋白质浓度的方法。
我实验中用的是牛血清蛋白BSA,用磷酸盐配成的pH7.0缓冲溶液,用紫外吸光280nm测标准曲线,然后去测未知样浓度。
审稿人置疑这种方法和Bradford法或Lowry法,哪个更好?还指出我没有提供有根据的文献,说这种根据氨基酸测量蛋白浓度的方法不可靠。
本人化工的,对蛋白质这块了解不多,BSA只是作为一种模拟物系才用到的,希望高人指点!谢谢!
作者:
huali
时间:
2015-10-23 12:59
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这种直接测280nm吸光值的方法当然不如其他化学反应显色法,灵敏度一般低1-2个数量级。另外非常易受其他杂质的干扰
作者:
妮子@
时间:
2015-10-23 12:59
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我用的体系里面只有BSA和磷酸缓冲液两种组分,且磷酸盐组分在各个样品中浓度保持一致,这样相当于只有BSA单一组分,其他组分对测量的影响就几乎可以忽略了吧
作者:
p1900
时间:
2015-10-23 13:00
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你的目标蛋白也是BSA么?如果不是,不能用280nm来测量,每种蛋白的extinction coefficient不一样的
作者:
妮子@
时间:
2015-10-23 13:00
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我只用到1种蛋白,就是BSA,没有别的蛋白了,这样能测吗?
作者:
malong
时间:
2015-10-23 13:01
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我用的体系里面只有BSA和磷酸缓冲液两种组分,且磷酸盐组分在各个样品中浓度保持一致,这样相当于只有BSA单一组分,其他组分对测量的影响就几乎可以忽略了吧
作者:
8899
时间:
2015-10-23 13:02
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你用的这种方法太粗犷了,准确度比Bradford法低很多。其实如果有条件的话,买个蛋白质定量kit,一切都搞定了......
作者:
dadaai
时间:
2015-10-23 13:02
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能测,不过看你的标准曲线了
作者:
xgy412
时间:
2015-10-23 13:03
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我们实验室一般Bradford法测
买个5*的公司试剂,到时候直接加水加蛋白溶液五分钟搞定
作者:
efp
时间:
2015-10-23 13:03
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能详细的解释一下么?
灵敏度为什么低呢?
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