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【求助】细菌计数最简单有效的方法是什么
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作者:
大花猫bb
时间:
2015-10-29 13:11
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【求助】细菌计数最简单有效的方法是什么
大家好!我现在想做下湖水样品细菌计数,有做过细菌计数的大神们想向你们请教一下,细菌计数最简单有效的方法是什么:荧光显微镜计数(DAPI染色),流式细胞仪还是平板计数,或者是其他什么方法。关键是想简单,比较省事而且方法可靠性高以后发文章不会质疑。求教!
作者:
钻石
时间:
2015-10-29 13:12
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要是方便的话,感觉平板计数较好些,应为计数器来没那么多麻烦,要是条件允许的话,其他方法也可以!
作者:
wawa11
时间:
2015-10-29 13:13
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湖水样品,最好是DAPI 和 FC。 平板太不靠谱,很多unculturable的
作者:
小妖精@
时间:
2015-10-29 13:13
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我用了dapi在400倍下计数,细菌是不是特别小,一个小点?
作者:
无怨无悔
时间:
2015-10-29 13:14
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40倍吧, 40倍下 差不多 就是一粒沙那么大那么大
作者:
8899
时间:
2015-10-29 13:14
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物镜40倍, 目镜10倍。嗯,我计数的是沙粒大小的。,谢了啊
作者:
美人鱼
时间:
2015-10-29 13:15
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看了个文献说显微镜计数比较好。流式细胞仪也不错,其他方法不推荐。
作者:
女儿情
时间:
2015-10-29 13:15
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但是 细胞和细菌一起,怎么计数好呢?好纠结。。。
作者:
xgy412
时间:
2015-10-29 13:16
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你有DAPI具体的方法吗?能给我一下吗?
作者:
wawa11
时间:
2015-10-29 13:17
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细菌显微镜计数方法
1、 取1 ml样品,超声40 s,低功率,0.2 cycle/second。
2、 加200 微升,100 微克/ml DAPI,暗处染色5 min。
3、 用0.22 微米,黑色聚碳酸酯膜过滤收集,然后用无菌水冲洗两次。
4、 加一滴荧光显微镜油于载玻片上,贴上载菌体的滤膜,再向滤膜加一滴油,盖上盖玻片(滤膜两面均不能有气泡)。
5、 在荧光显微镜365 nm处观察,DNA为亮蓝色,非DNA为黄色。
6、 数10个视野,每个视野约20个。
N=X*Na*S/(St*V)
N:样品含菌数,个/ml
Na:各视野平均菌数,个
X:样品稀释倍数
S:滤膜滤水面积,cm2
St:视野面积,cm2
V:过滤样品量,ml
作者:
无怨无悔
时间:
2015-10-29 13:17
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根据文献的参考标准计数,一般是高倍镜下(x400)或(x200)随机选取几个视野,计数一定量的细胞,争取做到能反映切片的全貌;也有专门的计数软件,需要先选取视野摄像,然后通过软件处理。
视野面积==显微镜目镜的视场数 / 物镜的放大倍数,
例如OLYMPUS的目镜的视场数为22,那么10X物镜下的视野面积为直径为
2.2mm。
而20X的视野面积为1.1mm
作者:
女儿情
时间:
2015-10-29 13:18
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样品要怎么处理啊?直接用采的水吗?我的水样有其他的藻类会干扰吗?
作者:
QQ爱
时间:
2015-10-29 13:19
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藻类有多大?大的没关系吧,超微型我不太清楚.不知道有没有人做过类似的验证实验
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