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标题: 【求助】病毒RNA的提取 [打印本页]

作者: 蒲公英 时间: 2015-11-7 11:28 标题: 【求助】病毒RNA的提取

哪位高人做过病毒RNA的提取？也可以用Trizol来提取吗？如果做提取后做病毒RNA的电泳，有什么要注意的吗？电泳后的图片应该是怎样的呢？

作者: 小鱼鱼 时间: 2015-11-7 11:29

应该是可以的，我提过病毒的RNA,不知道你是哪种病毒，建议你用浓缩的病毒液来做，这样RNA的浓度可以高些；但是电泳不一定能看得到条带，电泳之后条带的位置要看你病毒基因组的大小了，不知道我说又没有道理，仅供参考。

作者: 蒲公英 时间: 2015-11-7 11:29

怎样得到浓缩的病毒液啊？能把你提取过程的具体操作步骤告诉我吗？
我的RNA跑的电泳什么都没有显示．我的标本是病人的咽拭子，我该怎么处理得到病毒RNA呢？

作者: 二丫头466 时间: 2015-11-7 11:29

建议提取RNA后，有条件就先测一下ＲＮＡ的浓度．以微量核酸定量仪．如有，再跑ＰＡＧＥ胶电泳．

作者: 蒲公英 时间: 2015-11-7 11:30

我的标本量实在太少了，要测它的浓度恐怕不太可能．
请教：怎样得到浓缩的病毒液啊？能把你提取过程的具体操作步骤告诉我吗？
我的RNA跑的电泳什么都没有显示．我的标本是病人的咽拭子，我该怎么处理得到病毒RNA呢？

作者: 了了 时间: 2015-11-7 11:30

你的病毒RNA的是单链还是双链的
看要求而定
提总RNA
我也用过Trizol
效果不错
但我要的是双链RNA
采用浙大周雪平的方法

作者: orangecake 时间: 2015-11-7 11:30

我给你一个英文版的提取病毒的方案吧，是我的美国导师提供，自己认真看，认真琢磨每一步很重要。这个是在粪便悬液中提取病毒，病毒量也很少，和你的情况相似。

作者: 蒲公英 时间: 2015-11-7 11:31

它里面的BSA (1%)和P 289 H, I 分别是什么东西啊．
RT以后的PCR反应体系不需要再加dNTP了吗？
受益非浅啊，本来我都是把咽拭子的洗液离心,获取的细胞来用Trizol抽提RNA的，但细胞数实在太少，很不理想，我这两天就用你提供的方法来提一下病毒RNA试试，多谢了！

作者: Darcy 时间: 2015-11-7 11:31

TRIZOL可以，QIAGEN公司提病毒RNA的试剂盒也行。我曾经用TRIZOL和QIAGEN公司提病毒RNA的试剂盒直接从血清中提病毒RNA做RT-PCR扩增病毒基因，结果OK。

作者: 蒲公英 时间: 2015-11-7 11:31

我试着用Trizol提过，可结果测OD为０，RNA电泳一片空白，郁闷啊！

作者: ero11 时间: 2015-11-7 11:32

什么病毒啊，没有那种可以在细胞或者组织中繁殖扩增的吗？直接提不好提，就看你是不是什么样目的了，只要基因的话，我觉得这样可以．如果是必须在这么少的量下提取那只能再好好想其他的办法了，我用trizoo提副粘病毒，很好用的啊，不过在组织和泄殖腔拭子中提取微量病毒就不是那么顺利了，之后还是用细胞繁殖阔增再提

作者: 49888 时间: 2015-11-7 11:32

细胞毒，病变细胞悬液，上清都可以用TRIzol提，我提完就作一般的琼脂糖电泳，从细胞提取的出现三条带，18 s，28s，5s,病变细胞悬液前两种，上清没有条带，这是我做的结果，虽然上清没有条带，但我做pcr反而是这种效果最好

作者: 49888 时间: 2015-11-7 11:33

TRIzol法抽提总RNA
组织100mg
↓
加1mlTRIzol
↓
匀浆（要彻底，后转至EP管）
（组织匀浆量>100mg时分装1ml/每EP管）
↓
颠倒混匀10下，室温5分钟
↓
加氯仿1/5体积（0.2ml）（必须按总体积的1/5）
↓
颠倒混匀10下，室温5分钟
↓
4℃，离心12000g，15分钟
↓
转上层水相（约400μl）于另一1.5mlEP管中
↓
加等体积异丙醇（约400μl），混匀室温10分钟
↓
4℃，离心12000g，10分钟
↓
弃上清
↓
加冰预冷的75%乙醇（用DEPC水配）1ml
↓
4℃离心7500g，5分钟
↓
弃上清，空气干燥5-10分钟（不能完全干燥）
↓
溶于DEPC水中至20μl（10μl-20μl）
（可在55-60℃水中，<10分钟助溶）

作者: seagate 时间: 2015-11-7 11:34

谢谢各位的帮助！
我的标本就是咽喉拭子中要提取出病毒的RNA，由于取回来后冻存了，所以再要接种去繁殖是不大可能了，这么微量的情况下，谁有什么很好的提取方法吗？
实在是没辙了。Dead

作者: ztonyc 时间: 2015-11-7 11:34

我最经也在尝试用Trizol 法提取总RNA。

作者: 00无名指00 时间: 2015-11-7 11:34

同样遇到粪便RNA提取的难题了~~~

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