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标题: 【求助】标本保存 [打印本页]

作者: PCR 时间: 2015-12-4 09:57 标题: 【求助】标本保存

还有我准备做肺的RT-PCR,标本不可能同时收集好,所以得考虑标本保存方法及最多能保存多长时间.,大家有什么好的建议希望指点指点，我在这里先谢了。

作者: eor 时间: 2015-12-4 09:58

标本用铝铂纸包裹，－70度可长期保存。

作者: Darcy 时间: 2015-12-4 09:59

我也看了好多帖子，有的说用专用冷冻管，有的说最好马上提取，不然RNA会下降不少。我都不知该怎么做了，我们医院实验室条件不好，得到其他医院，这样更增加难度，所以希望开始实验前多了解一些。

作者: qhyu 时间: 2015-12-4 10:01

解决的办法是想办法找到液氮
把取到的保本现在液氮里速冻一下，再放到－70保存
这样可以预防RNA降解
用冻存管比较方便些，最好用

作者: ALALA 时间: 2015-12-4 10:01

1.只要取组织是在组织离体30min内完成的、并且立即放入－80或液氮中保存的就对实验结果不会有影响。建议取材时将组织置于灭菌的冻存管中保存在液氮罐，取材前可以设计好每管中存放的组织量，以便后来RNA抽提时取用方便。有条件的话最好先在液氮中速冻，再放到－70℃中保存．快速冷冻能有效地防止ＲＮＡ的降解．若直接放置于－80度，样品的冷冻过程还是有点慢．
２.冻存管也最好用ＤＥＰＣ处理．国产的很多塑料制品都比较脏，管内会有一些含ＲＮＡ酶的东西．一般我们采样用来包装样品的锡纸也要经过高温烘烤去除ＲＮＡ酶的．
３．ＲＮＡlater一般用于不方便用液氮冻存的样品，或在不方便带液氮罐的情况下使用．但它对保存的组织大小有一定的要求，要切成比较小的块状，进口的ＲＮＡlater也比较贵．目前有QIAGEN公司的RNeasy Protect Kits提供一种RNAlater RNA Stabilization Reagent，只要在采样后立即加入这种试剂，即可保护样品中的RNA完整而不被降解。在RNAlater中的样品RNA可以在37度下稳定保存1天，或者在18—25度保存7天，2—8度稳定4周，或者在-20度永久保存。这种技术为在不同温度下采样，运输和保存样品提供了极大的方便，特别适用于各种动物组织、培养细胞、细菌、白细胞，但必须说明的是它不适用于全血或体液中RNA的保存。
RNAlater的用法非常简单，只要在采样后立即将样品完全浸入适量（10ul/1mg组织）的RNAlater中即可。取样的动作要尽量快速利索，组织样品的大小以不超过0.5公分厚为宜，对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中，较大的则应切开为厚度小于0.5公分的小块，以确保RNAlater能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液，避免组织块挤在一起，同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。注意本试剂只适用于新鲜样品，对于冷藏和包埋的样品请选用RNeasy Kit。
保存后的样品可以直接用于RNA或者mRNA的抽提。RNAlater不会影响组织块的结构，可以在室温下切出适量的组织块用于称量和抽提RNA，剩下的部分可用于继续保存样品。-20度冻存的样品可以取出在室温下进行称量等操作而无需干冰。在-20度冻存的样品反复冻融20次RNA依然保持完好无损。RNAlater处理的样品比新鲜组织稍微硬一点，但对不会影响匀浆过程。
实际上，抽提组织总RNA时，如果发生降解，最可能的环节是组织从液氮或－80冰箱内取出后解冻时间过长或使用匀桨器匀浆时操作时间过长，导致组织内细胞破裂释放RNA酶，而RNA酶灭活物质异硫氰酸胍又不能及时于之接触并使其灭活，因而将RNA降解。因此，现在我们在抽提总RNA时一般是取一定量组织放入碾钵内，边碾磨边加入液氮直至成粉末，然后加入到Sol D中，这样很少有降解的。
当然，在抽提过程中DEPC处理tip及相关设备和带口罩、勤换手套防止RNA酶污染也是极为重要的。

作者: summerxx 时间: 2015-12-4 10:03

在液氮中冻多久再放到－70℃？从液氮放到－70℃，温度的升高不会导致RNA降解吗？

作者: seagate 时间: 2015-12-4 10:05

先在液氮中把组织冻透,好象在油锅里炸东西,时间短了冻不透,时间长了组织就回碎裂.然后在放到-70里.

作者: xuuuu 时间: 2015-12-4 10:07

我直接取组织后用锡箔纸包了放－８０度的，后来做的时候取出来剥开稀薄纸发现组织还是新鲜的居然！这样会对结果有影响吗？　
我用这样的组织提ＲＮＡ后，吸光度比值都在１.９５左右，但跑电泳后总发现条带不怎么好，而且ＤＮＡ污染都严重，哪位高手帮我解释一下啊，谢拉！

作者: zhenxin 时间: 2015-12-4 10:27

最好的办法其实是将组织泡经过液氮碾磨以后然后放入TRIZOl，保存在－70度中，可以保存一个星期左右，或是直接的放入液氮中

作者: duchy 时间: 2015-12-4 10:28

请问一下：用Trizol保存的细胞可不可以一直放液氮中呢？听说当中的异硫氢酸胍在超低温下会析出结晶破坏RNA分子？

作者: DDD 时间: 2015-12-4 10:28

直接提RNA不好嘛？
再放到－80，应该一年都没有问题的吧

作者: summerxx 时间: 2015-12-4 10:29

大家好！我想问问动物标本保存的具体方法。我想做一个PCR实验。

作者: misswu61 时间: 2015-12-4 10:39

各位学长，您们好。将取出的新鲜标本装入冻存管放进液氮，然后转移到超低温冰箱（-80或-70度）保存。我想请问：将装有标本的冻存管放在液氮灌中的时间一般为多久呢？因为我们实验分的组太多，老鼠不能一次杀完，必须在四个星期内完成。如果将取的标本放在液氮灌中保存3个星期左右后，再转移到超低温冰箱，行吗？会对以后的Western RT-PCR产生影响吗？谢谢！

作者: seagate 时间: 2015-12-4 10:39

"请问一下：用Trizol保存的细胞可不可以一直放液氮中呢？听说当中的异硫氢酸胍在超低温下会析出结晶破坏RNA分子？ "请高手指点……
我正打算这样做呢，不过我的标本是外周血单个核细胞，千万不要有事啊，不然辛辛苦苦收集的病例就……

作者: summerxx 时间: 2015-12-4 10:39

请问大鼠的胰腺组织可以直接用锡箔纸包裹后放到液氮罐中保存吗，可以放多长时间呢？

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