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标题: 【求助】HUVEC种类及上海细胞库EA.hy926 [打印本页]

作者: ending 时间: 2015-12-11 09:23 标题: 【求助】HUVEC种类及上海细胞库EA.hy926

需要用人脐静脉内皮细胞做心血管方面的实验，在选择细胞时纠结了好久，原代细胞普遍反映难养，而且只能传几代而已。买细胞株的话有三种，HUVEC-C,HUVEC-CS,EAHY926:HUVEC-C在培养时要添加生长因子，貌似不太好养，不过据北京中原公司讲是卖的最多的ATCC HUVEC类型；HUVEC-CS 不需要加生长因子，但是价格很高，而且在网上查到的用这个细胞的文献很少；EAHY926是永生细胞株，应该是最好养的，价格也还可以，但是是融合细胞株，虽然文献中都说可以很好的代表内皮细胞，反映其特性，用这个细胞的文献也不少，但是还是不确定是否国际公认。今天查到上海细胞所可以买这种细胞，不知道和ATCC的差别大不大。以上是个人对HUVEC的一些分析，欢迎大家讨论
另外请问有没有战友从上海细胞所买过EAHY926，质量如何，或者有没有看到SCI文章用到上海细胞所的HY926细胞，急盼指导

作者: seagate 时间: 2015-12-11 10:01

我在上海所买了一株926，一直都没有养起来！正在郁闷中！

作者: summerxx 时间: 2015-12-11 10:04

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我在上海所买了一株926，一直都没有养起来！正在郁闷中！

我也要养这个细胞系，请问现在你养的怎么样了，能分享一下具体的培养方法吗？不胜感激！！！

作者: okhaha 时间: 2015-12-11 10:11

楼上的能否传授这个细胞系的培养方法啊？

作者: ending 时间: 2015-12-11 10:11

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楼上的能否传授这个细胞系的培养方法啊？

就用GIBCO DMEM培养基加10%胎牛血清，就可以了，一传三

作者: 雪花子 时间: 2015-12-11 10:12

请问是自己配的培养基吗?GIBCO DMEM液体培养基的碳酸氢钠浓度都有3700mg/l，也没问题吗?

作者: greenbee 时间: 2015-12-11 10:13

就用GIBCO DMEM培养基加10%胎牛血清，就可以了，一传三

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不用加双抗吗？

作者: ending 时间: 2015-12-11 10:14

哦忘记讲了要加双抗的

作者: xiaoxiaoniao 时间: 2015-12-11 10:14

我也要养这个细胞系，请问现在你养的怎么样了，能分享一下具体的培养方法吗？不胜感激！！！

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细胞代号 EAhy926
细胞名称人脐静脉血管内皮细胞株，永生细胞。
形态特征多角形，梭形，卵圆形
生长特性贴壁
传代时间 2-3天传一次
传代比例一传3-5
培养条件完全型RPMI-1640 或M199+10 % FBS +双抗
37℃ 5% CO2
传代方法细胞80 % 融合时，倒掉旧液，加D-hanks’溶液3ml( T75瓶加5 ml)洗一洗倒掉，加1ml消化液（T75瓶加3 ml）消化，显微镜下观察待细胞分离成单个圆形后，弃酶液，加培养基吹打混匀，一瓶分成3-5瓶，直径100mm培养皿加培养基10ml，每T25瓶加培养基6 - 8 ml, T75瓶加培养基至20 ml， 37 ℃ 5% CO2孵箱培养。
冻存液无血清培养基 + 20 %FBS + 5 %DMSO
消化液 0.25 %胰蛋白酶 + 0.03 % EDTA ，用D-hanks’溶液配制。
冻存方法细胞80% 融合时，倒掉旧液，加D-hanks’溶液3ml( T75瓶加5 ml)洗一洗倒掉，加1ml消化液（T75瓶加3 ml）消化，显微镜下观察待细胞分离成单个圆形后，弃酶液，加培养液5ml吹打，收集消化细胞于离心管中，800 - 1000 rpm离心5 min。弃上清，加入冻存液，调整细胞密度为5 ×106 ~ 1 ×107 个/ml（直径100 mm培养皿细胞可冻存1 - 2管）。每个冻存管中加入细胞悬液1~1.3 ml，旋紧瓶盖，用封口膜封严，标明细胞的名称，冻存时间与冻存人名。将冻存管插入厚度2寸的泡沫塑料中，- 80 ℃ 2 4h →液氮。
计数方法取10μl EC悬液于计数板上，计数4角大格每个大格分16个小格细胞，计算公式：4角大格EC数× 104
4
复苏方法取出细胞冻存管立即放入40 ℃水中，不断摇动使冻存的细胞悬液尽快融化，用75 %酒精纱布擦拭冻存管，放入超净工作台中。方法一：开封后，将细胞悬液用吸管移入装有9ml hanks’溶液的离心管中，静置3 - 5 min，1000 rpm离心3 - 5 min，弃上清，加10倍体积的培养液吹打混匀，将细胞接种在培养皿/瓶中。方法二：不离心，将细胞冻存液用吸管移入装有10 ml培养液的培养皿，继续培养，4 – 24h后更换培养液去除DMSO。24 h后取出培养瓶，观察细胞生长状况。

作者: seagate 时间: 2015-12-11 10:16

我现在就养这个细胞，比原代细胞好养，要求不是很高，用DMEM+10%胎牛血清，传代就用普通的方法，一般是一传二，因为这个细胞对密度要求相对较高，密度小的话，会影响细胞的形态和性能。
目前，我的培养基中没有加双抗，感觉没什么问题。另外根据个人实验经验，发觉培养基多加一些，细胞长的会更好（呵呵，偶然发现的）。

作者: eor 时间: 2015-12-11 10:16

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我现在就养这个细胞，比原代细胞好养，要求不是很高，用DMEM+10%胎牛血清，传代就用普通的方法，一般是一传二，因为这个细胞对密度要求相对较高，密度小的话，会影响细胞的形态和性能。
目前，我的培养基中没有加双抗，感觉没什么问题。 ...

请问你在培养926细胞的过程中，有加细胞生长因子吗（比如EGF、VEGF等），还有你的细胞冻存之后是存放在液氮还是-80的呀？培养时，大概多久会贴壁呢

作者: jkobn 时间: 2015-12-11 10:18

没有加生长因子，加10%的胎牛，没有加双抗什么的，我是存在-80里面的，不过，后来发觉冻存后的细胞明显不如刚买的，建议还是用原来刚买的细胞进行传代实验。

作者: eor 时间: 2015-12-11 10:18

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原帖由 jkobn 于 2015-12-11 10:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

没有加生长因子，加10%的胎牛，没有加双抗什么的，我是存在-80里面的，不过，后来发觉冻存后的细胞明显不如刚买的，建议还是用原来刚买的细胞进行传代实验。 ...

哦我后来从液氮里拿了一管细胞，复苏后感觉不错再请教一个问题哈你用的胎牛血清有灭活吗？

作者: u234 时间: 2015-12-11 10:19

血清是进口的，买来后没有任何处理。

作者: 555444 时间: 2015-12-11 10:19

原代HUVEC美国allcells上海专业生产啊~~~021。

作者: yayya 时间: 2015-12-11 10:19

请问你的细胞胰酶消化多长时间呀？

作者: lorri 时间: 2015-12-11 10:20

我们都是消化1min。

作者: zhihui小新 时间: 2015-12-11 10:20

为什么我的细胞复苏了 4天了就是不怎么长呢是因为复苏后贴壁细胞少的原因吗？

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