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标题: 【求助】最近有没有什么Crispr/cas9或者Talen？ [打印本页]

作者: standup 时间: 2015-12-12 17:21 标题: 【求助】最近有没有什么Crispr/cas9或者Talen？

请教各位师兄师姐，我们实验室最近建Crispr/cas9平台，感觉敲除效率比较低，特别是后面单克隆筛选，实验室
一开始是送测序，但是做的人多比较麻烦又费时间，后来用NEB的T7核酸内切酶，方便到是很方便，但是每次筛选出
来送测序，好多假阳性，累觉不爱啊，请教各位是怎样筛选单克隆的，有什么方便快速的方法不，有好的方法共享请
吃西瓜！

作者: hyuu 时间: 2015-12-12 17:21

这个很多都是T7E1，假阳性是很多，不过好像没有更好的选择。

作者: greenbee 时间: 2015-12-12 17:22

如果你们实验室有钱的话，可以用环球公司的celI，6600一个kit，我们实验室买过，不过不是做你说的这个方向，我用的时候都小心翼翼的。老外真是吸血，和八国联军没两样。。。，一个酶卖这么贵，完全抢钱。国内的公司能给给力不？

作者: greenbee 时间: 2015-12-12 17:22

QUOTE:

原帖由 hyuu 于 2015-12-12 17:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这个很多都是T7E1，假阳性是很多，不过好像没有更好的选择。

话说，你是clonetech的？

作者: ns5fan 时间: 2015-12-12 17:22

二楼扯什么犊子，谁说国内没有的，推荐一下Cruiser 正宗的国产货（cuturl('http://www.genloci.com/goods.php?id=1302')），和celI类似，发明人是“千人计划”专家，很多生物制药行业的人都认识。

作者: ending 时间: 2015-12-12 17:22

呵呵，国货真心好吗？你是来打广告的吧，小哥。我怎么就从来都没听说过Cruiser 。给哥哥介绍介绍。

作者: eve_49 时间: 2015-12-12 17:23

我有做Crispr/cas9的中文protocol 啊，有需要的啊？

作者: c86v 时间: 2015-12-12 17:23

这个试剂盒按照你的说法，岂不是吊炸天了。细菌？真菌？连植物都可以测。时间只要20MIN?太拽了点……不敢认同。问一下价格多少？一个试剂盒可以做几次？有什么单位在用吗？

作者: standup 时间: 2015-12-12 17:24

QUOTE:

原帖由 ns5fan 于 2015-12-12 17:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

二楼扯什么犊子，谁说国内没有的，推荐一下Cruiser 正宗的国产货（cuturl('http://www.genloci.com/goods.php?id=1302')），和celI类似，发明人是“千人计划”专家，很多生物制药行业的人都认识。 ...

你用过不，多少钱的？

作者: SO2 时间: 2015-12-12 17:24

楼上说的是这个人？http://www.***********.com/talk/venture/103753.html 2年前在我们学校做过讲座，那个技术很贵的说啊，还是Crispr/cas9方便。

作者: SO2 时间: 2015-12-12 17:24

楼上说的是这个人？ http://www.***********.com/talk/venture/103753.html

作者: bojitu 时间: 2015-12-12 17:24

问一下各位做测序，都是先做T克隆再测序的么？我的直接剪鱼尾巴PCR后测序，测出的结果效果总是不好，好多杂峰，都设计了5对引物了，还是测序不好。求教了

作者: sunnyB 时间: 2015-12-12 17:25

每次这种打鸡血的技术出来，我看着就后怕，多少学生又开始了大批量的筛
唉

作者: BUK 时间: 2015-12-12 17:25

一般的crispr/cas9敲除后筛选的方法是pcr，PCR扩增后没有野生型的条带就说明纯和敲除了，其他没有什么捷径可以走，或者可以问一下做基因敲除这方面实验的公司，了解一下，毕竟他们比较专业

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