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标题: 【求助】lipo2000转染问题 [打印本页]

作者: iii_ii 时间: 2015-12-12 20:52 标题: 【求助】lipo2000转染问题

相关疾病：
乳腺癌
lipo2000转染乳腺癌细胞系（MCF－7ADR），转染四次了，转染效率很低，且转染完第四天细胞大部分都死了。急切得到大家的帮助，谢谢！

作者: iii_ii 时间: 2015-12-12 20:52

补充一下，转染时没用invitrigen推荐的条件培养基，用的是无血清无抗生素的1640培养液。

作者: ero11 时间: 2015-12-12 20:53

你按lipo2000说明书操作就ok了，mcf/adr比较好转染的

作者: 555444 时间: 2015-12-12 20:53

Lipofectamine 2000具有较强的细胞毒性。
如果是细胞系转染，建议在加入Lipofectamine 2000后2-4小时换液，往往能取得不错的结果。
另外厂家推荐的转染试剂使用量似乎偏高，建议少用。

作者: gogo 时间: 2015-12-12 20:54

转染时用无血清无抗生素的1640培养液是正确的，关键是你转染的时间太长了，一般情况在转染后4到6小时，应去掉转染试剂，加入含有血清的1640继续培养24 小时，这样才能继续后面的实验，Lipofectamine 2000还是很好用的。你可同时做个对照组，转染一个荧光蛋白进去，观察转染的效率！

作者: iii_ii 时间: 2015-12-12 20:54

我是转染了一个绿色荧光蛋白，转染效率特别低，且四五天后细胞都死了。谢谢！

作者: gogo 时间: 2015-12-12 20:55

你具体是怎么做的实验，还是把实验经过写详细点，很难帮你做出判断，在你没转染前你的细胞状态怎么样？？

作者: yayya 时间: 2015-12-12 20:55

请问一下：
转染4-6小时后一定要换液吗？说明书上好象说可以不换的。另外，转染过程中好象有血清也可以的。是不是呀？

作者: 8s5g 时间: 2015-12-12 20:55

MCF－7很好转，转个5，6K的质粒效率都很高
1 ）用lipo2000转,转染前细胞状态一定要好，lipo2000也不是一定只转增殖细胞，但是在转染前几个小时换个液刺激一下是个不错的主意。
2）我用lipo2000转染大多数细胞的经验是有血清比无血清要好，你可以自己去试。
3）关于换液的问题，像MCF－7之类的细胞系对质粒带的内毒素都不太敏感，lipo确实有那么点毒性，减半不会显著降低效率。而我对这类细胞从来都不换液，因为没差别。
4）效率低可能的原因很多。就质粒而言，质量一般问题不大，主要是量的问题，不知你定量准不准，如果加大质粒量能提高效率，那么有可能你的质粒纯度不行，影响读数，这里就不多说了。

作者: toy 时间: 2015-12-12 20:56

我做蛋白表达的检测，我想问问lip2000转染48小时就可以检测了吗？

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