标题:
急问 : PCR结果目的条代弥散的原因
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作者:
白白的
时间:
2011-10-4 14:55
标题:
急问 : PCR结果目的条代弥散的原因
急问 : PCR结果目的条代弥散的原因 [转载]
请问PCR结果目的条代弥散的常见原因是什么?该怎么优化?
作者:
快乐的大脚
时间:
2011-10-4 14:55
PCR结果目的条代弥散可能的原因有以下几点:
1)PCR反应特异性不强,非特异性条带多呈弥散现象,如果是这样的话,你可以调整PCR条件,采用热启动和TOUCH-DOWN PCR来减少非特异性产物。
2)配胶的时候要让胶充分融化,如果融化不好的话也会出现条带弥散的现象。
3)配制胶的缓冲液要和电泳缓冲液相一致。
4)其它可能就是上样缓冲液的问题。
作者:
白白的
时间:
2011-10-4 14:56
我的情况是这样,同一管模板,昨天做B-ACTIN PCR后电泳,目的条带清晰高亮,无任何杂带;冻于-20度,可是今天又用它做一次B-ACTIN PCR后电泳,目的条带却有些弥散,亮度弱了,实在找不到原因,请JINKUI960战友帮忙分析一下,谢谢啦
作者:
8黑眼圈8
时间:
2011-10-4 15:00
模板最好不要反复冻溶,有可能降解
作者:
菠萝菠萝蜜
时间:
2011-10-4 15:00
建议做一个阳性对照,就是空跑你的模板看模板是否弥散或模板降解,这样可以有助于你下一步实验
作者:
白白的
时间:
2011-10-4 15:01
摸板是POLYA CDNA的集合,,那跑出来肯定是很多带吧?能看出什么来呢?
作者:
白白的
时间:
2011-10-4 15:01
摸板是POLYA CDNA的集合,,那跑出来肯定是很多带吧?能看出什么来呢?
作者:
长发piaopiao
时间:
2011-10-4 15:02
我碰到过一种情况,刚跑出来的胶,条带本来很清晰,可是10分钟后就眼睁睁的在眼前散掉了,后来更换电泳液再跑一次就好了。后来也多次发现,电泳液使用时间过长会导致条带变暗。
作者:
饭团团
时间:
2011-10-4 15:03
"刚跑出来的胶,条带本来很清晰,可是10分钟后就眼睁睁的在眼前散掉了,后来更换电泳液再跑一次就好了。后来也多次发现,电泳液使用时间过长会导致条带变暗。"
电泳液用的时间长了,效果会变差.但是,你说的凝胶放置10分钟后条带变得弥散并不一定完全是由于电泳液用久的原因导致的,因为,即使新更换的电泳液,断掉电源之后,凝胶只要稍稍放置,条带就会变得模糊, 我觉得,这主要是由于没有电场的作用下,条带中的DNA做非定向运动所致.
作者:
糊涂虫
时间:
2011-10-4 15:03
条带在空气中比在缓冲液中更容易扩散,所以做完电泳如果想让条待继续保存一小段时间,最好依然放在缓冲液中,个人感觉比冻在冰箱里都好
作者:
晶晶亮
时间:
2011-10-4 15:04
我遇到过winson 所说的那种情况,但后来发现是紫外灯老化了,呵呵
不管怎么说作出电泳来还是尽快处理好,照相或是回收
作者:
晶晶亮
时间:
2011-10-4 15:04
我遇到过winson 所说的那种情况,但后来发现是紫外灯老化了,呵呵
不管怎么说作出电泳来还是尽快处理好,照相或是回收
作者:
晶晶亮
时间:
2011-10-4 15:06
另外电泳电压过高或者中间有过断电过程也会引起目的条代弥散
但我遇到这种情况更多是PCR本身的问题
作者:
晶晶亮
时间:
2011-10-4 15:06
另外电泳电压过高或者中间有过断电过程也会引起目的条代弥散
但我遇到这种情况更多是PCR本身的问题
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