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标题: 【求助】我现在想做下湖水样品细菌计数 [打印本页]

作者: 青青草 时间: 2016-1-20 13:29 标题: 【求助】我现在想做下湖水样品细菌计数

大家好！我现在想做下湖水样品细菌计数，有做过细菌计数的大神们想向你们请教一下，细菌计数最简单有效的方法是什么：荧光显微镜计数（DAPI染色），流式细胞仪还是平板计数，或者是其他什么方法。关键是想简单，比较省事而且方法可靠性高以后发文章不会质疑。求教！

作者: 双子座 时间: 2016-1-20 13:30 标题: 【回复】

要是方便的话，感觉平板计数较好些，应为计数器来没那么多麻烦，要是条件允许的话，其他方法也可以！

作者: zouyou 时间: 2016-1-20 13:30 标题: 【回复】

湖水样品，最好是DAPI 和 FC。平板太不靠谱，很多unculturable的

作者: 今生如此 时间: 2016-1-20 13:31 标题: 【回复】

我用了dapi在400倍下计数，细菌是不是特别小，一个小点？

作者: yuanyuan 时间: 2016-1-20 13:31 标题: 【回复】

40倍吧， 40倍下差不多就是一粒沙那么大那么大

作者: QQ爱 时间: 2016-1-20 13:31 标题: 【回复】

物镜40倍，目镜10倍。嗯，我计数的是沙粒大小的。，谢了啊

作者: qinqinai 时间: 2016-1-20 13:32 标题: 【回复】

看了个文献说显微镜计数比较好。流式细胞仪也不错，其他方法不推荐。

作者: wawa11 时间: 2016-1-20 13:32 标题: 【回复】

但是细胞和细菌一起，怎么计数好呢？好纠结。。。

作者: 886爱 时间: 2016-1-20 13:32 标题: 【回复】

你有DAPI具体的方法吗？能给我一下吗？

作者: QQ爱 时间: 2016-1-20 13:33 标题: 【回复】

细菌显微镜计数方法
1、       取1 ml样品，超声40 s，低功率，0.2 cycle/second。
2、       加200 微升，100 微克/ml DAPI，暗处染色5 min。
3、       用0.22 微米，黑色聚碳酸酯膜过滤收集，然后用无菌水冲洗两次。
4、       加一滴荧光显微镜油于载玻片上，贴上载菌体的滤膜，再向滤膜加一滴油，盖上盖玻片（滤膜两面均不能有气泡）。
5、       在荧光显微镜365 nm处观察，DNA为亮蓝色，非DNA为黄色。
6、       数10个视野，每个视野约20个。
N=X*Na*S/(St*V)
N：样品含菌数，个/ml
Na：各视野平均菌数，个
X：样品稀释倍数
S：滤膜滤水面积，cm2
St：视野面积，cm2
V：过滤样品量，ml

作者: 哈密瓜 时间: 2016-1-20 13:33 标题: 【回复】

根据文献的参考标准计数，一般是高倍镜下（x400）或（x200）随机选取几个视野，计数一定量的细胞，争取做到能反映切片的全貌；也有专门的计数软件，需要先选取视野摄像，然后通过软件处理。
视野面积==显微镜目镜的视场数 / 物镜的放大倍数，
例如OLYMPUS的目镜的视场数为22，那么10X物镜下的视野面积为直径为
2.2mm。
而20X的视野面积为1.1mm

作者: wawa11 时间: 2016-1-20 13:33 标题: 【回复】

样品要怎么处理啊？直接用采的水吗？我的水样有其他的藻类会干扰吗？

作者: wawa11 时间: 2016-1-20 13:34 标题: 【回复】

平板计数是最有效的方法，操作简单，就是会花点时间。其他两种方法会存在很大的误差，而且要求比较高

作者: zouyou 时间: 2016-1-20 13:34 标题: 【回复】

藻类有多大？大的没关系吧，超微型我不太清楚.不知道有没有人做过类似的验证实验

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