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标题: 【求助】峰形越来越差，柱压正常，请问原因 [打印本页]

作者: 1221 时间: 2016-1-28 14:46 标题: 【求助】峰形越来越差，柱压正常，请问原因

色谱条件为：
紫外吸收比较弱，
进样量比较大，为80ul.
色谱柱为月旭东xdb,c18,4.6*100um ,3.5um的色谱柱（PH范围为2-10），
流动相为甲醇：20mol磷酸缓冲盐（PH6.5)=5:95,
柱温30
做了10多批溶出曲线后峰形就逐渐变差，反冲色谱柱，压力比正着用压力要大些，
我的怀疑有三点
1.流动相PH高
2.流动相含水量少（不成立，应为同样材质的长色谱柱也用过，流动相中甲醇含量为15%，也出现这种情况）
3.胶囊壳进入色谱柱

现在正在用含有三氟乙酸的乙腈水反冲过夜

各位也给个意见，希望大家讨论讨论

作者: moonlight 时间: 2016-1-28 14:46

您分析什么样品，样品具体如何处理的？

作者: seagate 时间: 2016-1-28 14:47

你流动相的PH在柱子耐受范围之内，应该没关系的
甲醇为5%，含水也不少啊，柱子用完之后，怎么冲洗的？
你样品处理的怎么样？胶囊壳在处理样品时没有去掉吗？

作者: 1221 时间: 2016-1-28 14:47

谢谢各位啊，这个是做溶出实验的，胶囊壳溶解了，过滤后直接进样的，用完后先用10%甲醇冲洗40-60min ,然后保存在乙腈里

作者: 1221 时间: 2016-1-28 14:47

看到老外一片文章，说进的样品量太大，加上溶出实验中的介质PH在1-6.8之间，可能造成色谱柱内流动相PH波动？

作者: redbutterfly 时间: 2016-1-28 14:48

流动相比例的问题，PH值应该没问题，柱子流失的问题，逐一排查。

作者: 1221 时间: 2016-1-28 14:49

之前用同样型号长的色谱柱做过，那时候甲醇的含量为15%，也出现了这样的问题，现在采用5um 的色谱柱加保护柱，暂时还好

作者: misswu61 时间: 2016-1-28 14:49

峰形差，是怎样的？基线不稳？拖尾了？前沿了？不规则？

基线不稳：多平衡一下；
拖尾：冲洗，正冲不行反冲，低流速。
前沿：流动相的问题

作者: summerxx 时间: 2016-1-28 17:00

PH、流动相比例和冲洗条件应该问题不大。

怀疑你胶囊的溶出调价和流动相的条件不匹配。

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