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标题: 【求助】同一瓶中样品包含三个峰，其中只有一个峰的RSD... [打印本页]

作者: DCS 时间: 2016-1-29 10:27 标题: 【求助】同一瓶中样品包含三个峰，其中只有一个峰的RSD...

峰#    保留时间面积高度分离度理论塔板# 拖尾因子
1 3.112 3328028 556365 -- 5894.906 1.632
2 4.228 30394 1274 2.771 690.894 1.018
3 8.216 435032 35474 8.275 10528.851 1.177
4 11.871 774720 41147 8.988 9280.595 1.113
1 3.115 3327790 554883 -- 5815.766 1.632
2 7.385 33987 1369 10.368 2000.917 0.998
3 8.221 431298 35519 1.705 10524.436 1.176
4 11.892 837697 42648 8.934 9007.198      1.124
1 3.113 3306971 553591    -- 5921.944 1.627
2 7.724 19212 970 13.392 3439.912 0.804
3 8.223 433950 34892 1.182 10743.624 1.17
4 11.908 739381 38883 9.091 9317.469 1.121
1 0.836 31336 661       -- 7.128 0.989
2 3.103 3356422 558930 3.203 5840.435 1.638
3 7.351 34798 1385 10.191 1919.064 0.954
4 8.215 436615 35547 1.741 10481.26 1.177
5 11.91 804900 42426 9.06 9272.67 1.119
1 0.371 14194 411 -- 2.527 1.442
2 3.105 3358006 556925 4.994 5847.91 1.64
3 6.92 36607 1430 9.042 1650.176 0.99
4 8.217 439512 35513 2.587 10444.783 1.181
5 11.92 830292 43692 9.061 9252.29 1.116

三个主成分峰的相对偏差分别为：0.65% 0.70% 5.10%
为什么第三个峰和变动会这么大，前两个峰变动确不大呢？

作者: xuuuu 时间: 2016-1-29 10:40

前几个组分没有问题，应该不是仪器硬件问题。

您做什么物质的分析，三个组分都是什么？

作者: finger 时间: 2016-1-29 10:40

首先声明。我对这个问题的回答只能作为一种现象“解释”，而不能一种答案。原因是楼主给出的数据比较少、对样品的理化性质不清楚，对实验条件不清楚。
如果楼主找出真正原因或者其他色有有过类似经历并知道原因，希望能到这里说明一下。

下面是我给出的“解释”。

我觉得楼主遇到的问题主要有两方面因素：

1、样品稳定性问题。从数据上分析，我认为2号峰和3号峰之间可能存在一种类似相互转化的问题。

2、可能存在进样残留的问题。

作者: finger 时间: 2016-1-29 10:42

对楼主给出的数据进行整理和计算得到：
保留时间面积
3.112 3328028
8.216 435032 0.130718
11.871 774720 0.232787 1.780835
3.115 3327790
8.221 431298 0.129605
11.892 837697 0.251728 1.94227
3.113 3306971
8.223 433950 0.131223
11.908 739381 0.223583 1.703839
3.103 3356422
8.215 436615 0.130083
11.91 804900 0.239809 1.843501
3.105 3358006
8.217 439512 0.130885
11.92 830292 0.247257 1.889122

作者: finger 时间: 2016-1-29 10:42

用2号峰面积除以1号峰面积得到以下数值：
0.130718、0.129605、0.131223、0.130083和0.130885，这5个数据不用做统计，差异性很小。（rsd=0.44%）
用3号峰面积除以1号峰面积得到以下数值：
0.232787、0.251728、0.223583、0.239809和0.247257，这5个数据的之间的相对标准偏差达到4.21%。

这个两个分析，相当于内标法的分析。把1号峰当作内标物看待，如果三种组分的不会发生相互转化那么，上述两组数据处理将会得到比较小的相对标准偏差，而且两组数据的RSD基本会处于同一水平。

但，从得到的数据看，此种假设是不成立的。说明三种组分中很可能存在相互转化或者类似情况。

作者: finger 时间: 2016-1-29 10:44

3号峰面积除以2号峰面积，得到以下数值：

1.780835、1.94227、1.703839、1.843501和1.889122，这5个数据之间的相对标准偏差为：rsd=4.54%。

5楼主分析到，可能存在3种组分的相互转化。共存在4种转化类型，即1和2之间，1和3之间，2和3之间和1、2、3之间。

最后一种情况比较复杂，只分析前3种情况。在前3种情况中，如果发生转化必定会出现“此消彼长”的现象，这是重要前提。

2号/1号数值变化小，3号/1号数值变化大，说明3号峰在变化，又由于3号/2号的rsd>3号/1号的rsd，说明组分的转化放生在2号峰物质和3号峰物质之间。

至此得到的我给出的解释的第一条：即样品组分可能不够稳定。

作者: finger 时间: 2016-1-29 10:45

验证第一条结论：

如果样品组分存在相互转化的情况，则必定会出现“此消彼长”的现象。可以把特定峰在5针中的峰面积大小做排序。但是在排序前先做除权处理，以消除不同进样之间的差异。数据如下：
时间面积 5针 4针
3.112 3328028 　　
8.216 435032 3 3
11.871 774720 2 2
　　　　
3.115 3328028 　　
8.221 431328.8 1 1
11.892 837756.9 5 4
　　　　
3.113 3328028 　　
8.223 436713.2 5 4
11.908 744089 1 1
　　　　
3.103 3328028 　　
8.215 432921.4 2 2
11.91 798090.9 3 3
　　　　
3.105 3328028 　　
8.217 435588.3 4 　
11.92 822879.7 4 　

经过除权处理，1号峰的面积都处理成和第一针1号峰面积相同的情况。把2号和3号峰的面积按着从小到大排列。

作者: finger 时间: 2016-1-29 10:51

通过对5针的排列。如果呈现“此消彼长”的态势，理论上每一针的2号峰序号和3号峰序号的和应该相等，即等于6。看7楼数据，只有第2针符合。偏离最大的是第5针，达到8。再仔细看一下第5针，1号峰，和2号峰均是这针最大（3号峰也较大，但是由于2、3号转化中3号峰变化幅度要大，所以不做分析），很可能说明在这针存在偶然因素，最有可能的就是进样口残留等因素，因为这样的偶然因素不会像进样量误差那样引起等比变化。

验证：去除第5针排列前4针。得到了和理论上一致的代数和为5的情况。

所以得出我在第三楼给出的解释。

再次说明，这只是一种解释。

作者: DCS 时间: 2016-1-29 10:52

这是10药典的方法,三个主成分分别为甲硝唑,克霉唑,盐酸氯已定,氯已定也就是不稳定的那个.波长为260.流动相:甲醇水三乙胺庚烷磺酸钠. 这是个老品种,不应存在相互影响的问题.我以做个N多次,仪器换个5台,都是这样

作者: 耗子=== 时间: 2016-1-29 10:52

样品是平行处理的，还是同一个样品连续进5针？
保留11分钟的峰面积间隔性的变化，变大后变小又变大
流动相是做单通道吗？考虑样品的稳定性
PS:寒版分析的真全面，佩服！~

作者: gogo 时间: 2016-1-29 10:52

进样间隔时间是均匀的还是随机的？也可以实验一下是否有影响。

作者: gogo 时间: 2016-1-29 10:53

工作站的积分参数也可以考虑一下。。。。

没有得到具体分析条件和色谱图（甚至原始数据文件）的情况下不好判断。

作者: gogo 时间: 2016-1-29 10:53

保留时间8.2的那个色谱峰前面的小峰保留时间不稳定，面积也不同。
最好考虑一下这个问题。会不会是故障的原因。
这个小峰那里来的，是否可能还存在类似的小峰？
如果小峰混入大峰结果会如何？
如果怀疑是以前的进样带来的，可以延长进样间隔实验。

作者: gogo 时间: 2016-1-29 10:53

从您的色谱图来看，色谱分析的死时间好像是2.5min左右。不应该存在保留时间低于死时间的色谱峰。

注意观察您的色谱图中是否有保留时间低于2.5min的色谱峰？显然是存在的。

可能您设定的分析时间不足。

好像是进样重叠造成的定量问题。

作者: gogo 时间: 2016-1-29 10:56

做数据比较的时候，除去目标峰以外的色谱峰也需要仔细考虑。

作者: ero11 时间: 2016-1-29 10:56

看过谱图就会知道，积分误差的可能性不大。

作者: any333 时间: 2016-1-29 10:57

当进样瓶的瓶盖旋的太紧或者样品溶液过多有可能导致负压，进样针吸不进足够的体积，而使进样量不准确或者仪器本身不稳定也有可能

作者: 3.14 时间: 2016-1-29 10:57

没有那么复杂，手动计算了RT=8min 5个峰面积RSD=0.7%, 很明显，应该是峰选错了，选的是第3个峰的峰面积，而5次数据第3个峰是不一样的，你应该删掉不需要的峰。

作者: 3.14 时间: 2016-1-29 10:58

不好意思，看错了，应该是RT=11min的峰。

作者: join 时间: 2016-1-29 10:58

应该是叠包的问题吧

作者: xuuuu 时间: 2016-1-29 10:59

可以排除叠包的问题。只单做这一个主份也是不稳定。但是我们换成自动进样都很稳定。一点问题没有。

作者: gogo 时间: 2016-1-29 10:59

再比较一下色谱图看看？

手工进样阀污染？进样针是否有问题？空白正常么？都排除一下。

作者: summerxx 时间: 2016-1-29 10:59

样品要水解么?

作者: qhyu 时间: 2016-1-29 11:00

由拖尾因子、理论塔板数，及峰高和峰面积的大小对应看，好像是进样绝对量的问题。毕竟保留时间偏差也不是很大。进样残留记忆可能性有，也有可能是供试液溶剂选择对11min主峰的溶解性不好，诸如温度等影响明显，如果供试液溶剂和流动相有比较大偏差时，也有可能。还有就是是否设定进样后洗针，洗针液对11min峰的溶解性是不是不是很好呢！

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