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标题: 【求助】pNPP法测脂肪酶活 [打印本页]

作者: 嗅嗅    时间: 2016-2-16 21:21     标题: 【求助】pNPP法测脂肪酶活

这几天用的pNPP法测定脂肪酶活时,借鉴的是华中科技大学舒正玉博士论文《黑曲霉脂肪酶的酶学性质、基因克隆与表达及结构预测》中的方法:溶液 A(比色法测定脂肪酶活力):准确称量 0.062 g pNPP 加到 10 ml 异丙醇中,室温下超声波处理 6 min,使 pNPP 完全分散到异丙醇中,整个溶液呈乳白色。 溶液 B(比色法测定脂肪酶活力):1.51 g Tris 完全溶解到 200 ml 蒸馏水中,依次加入 1 ml Triton-X100,0.25 g 阿拉伯胶,0.72 ml 浓盐酸,磁力搅拌器混匀,pH 计测量,用稀盐酸调节 pH 值到 7.5,定容至 250 ml。4  ℃保存。
然后问题出现了,在溶液A+B 混匀后始终是透光率很低的溶液,用分光光度计方法测定时,很难得出可靠的吸光值。

之前找过虫友问了,特别热情(我也不好意思多番打扰人家),他方法中加了脱氧胆酸盐,我的没有。他说在加入Triton-X100 后就变澄清了,但是我的加了也没变化。找了好多帖子看了,都没找到原因及解决方法。有的帖子也是类似问题,但是在各位一番评论指导后,帖主就不管了,看帖子的人无从得知解决措施。
so,希望有经验的虫友们指点指点,检测方法不准,试验开展不动啊。

作者: 嗅嗅    时间: 2016-2-16 21:21

有一个好心的虫友提示我把异丙醇的浓度降低在5%之内就好很多了。
作者: greenbee    时间: 2016-2-16 21:21



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原帖由 嗅嗅 于 2016-2-16 21:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有一个好心的虫友提示我把异丙醇的浓度降低在5%之内就好很多了。

缓冲溶液用多一些,是吗?这个体系里面Triton-X100和阿拉伯胶的作用是什么?
作者: 嗅嗅    时间: 2016-2-16 21:22



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原帖由 greenbee 于 2016-2-16 21:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

缓冲溶液用多一些,是吗?这个体系里面Triton-X100和阿拉伯胶的作用是什么?

相比之前加少一点异丙醇底物溶液时,就很快就澄清了。triton 和 arabic gum 就是表面活性剂,助溶的
作者: yyaxw84    时间: 2016-2-16 21:22



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原帖由 嗅嗅 于 2016-2-16 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相比之前加少一点异丙醇底物溶液时,就很快就澄清了。triton 和 arabic gum 就是表面活性剂,助溶的

您好 ,我想知道 triton 和 阿拉伯胶除了促进底物溶解 在反应体系中有没别的用途呢?为什么两个必须都要加,只加一个是不是可以呢?不知道有没有为什么加这两个试剂的相关文献呢?谢谢谢谢啦~~
作者: yyaxw84    时间: 2016-2-16 21:23

这个问题也纠结了我半年了都   浓度太高了吧,以及异丙醇浓度太高了   这俩 有一个高的都会浑浊
作者: 嗅嗅    时间: 2016-2-16 21:24

不好意思很久没上论坛了。试出来了啊,就是上面说的那样。也祝你顺利。
作者: mybioon    时间: 2016-2-16 21:25

您好,请问您还保留着pnpp法测脂肪酶的方法吗?





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