这几天用的pNPP法测定脂肪酶活时,借鉴的是华中科技大学舒正玉博士论文《黑曲霉脂肪酶的酶学性质、基因克隆与表达及结构预测》中的方法:溶液 A(比色法测定脂肪酶活力):准确称量 0.062 g pNPP 加到 10 ml 异丙醇中,室温下超声波处理 6 min,使 pNPP 完全分散到异丙醇中,整个溶液呈乳白色。 溶液 B(比色法测定脂肪酶活力):1.51 g Tris 完全溶解到 200 ml 蒸馏水中,依次加入 1 ml Triton-X100,0.25 g 阿拉伯胶,0.72 ml 浓盐酸,磁力搅拌器混匀,pH 计测量,用稀盐酸调节 pH 值到 7.5,定容至 250 ml。4 ℃保存。
然后问题出现了,在溶液A+B 混匀后始终是透光率很低的溶液,用分光光度计方法测定时,很难得出可靠的吸光值。