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标题: 【求助】酵母单双倍体的鉴定 [打印本页]

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:11 标题: 【求助】酵母单双倍体的鉴定

请问，除了通过生孢培养基验证单双倍体以外，是否有别的方法？比如流式细胞仪？比如提基因组后PCR观察目的条带？请详细说下方法，谢谢大家

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:12

做PCR 还是很快很准确的

三引物就可以搞定了，两条带是双倍体a-alpha型，一条带是单倍体a型或alpha型。

p1 5'-AGTCACATCAAGATCGTTT ATGG3'
p2 5'-GCACGGAATATGGGACTACTTCG3'
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作者: ladyhuahua 时间: 2016-3-7 11:12

QUOTE:

原帖由 ququer787 于 2016-3-7 11:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
做PCR 还是很快很准确的

三引物就可以搞定了，两条带是双倍体a-alpha型，一条带是单倍体a型或alpha型。

p1 5'-AGTCACATCAAGATCGTTT ATGG3'
p2 5'-GCACGGAATATGGGACTACTTCG3'
p35'-ACTCCACTTCAAGTAAGAGTTTG3' ...

请教这是什么原理啊！？？

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:13

QUOTE:

原帖由 ladyhuahua 于 2016-3-7 11:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教这是什么原理啊！？？

太谢谢你了，我就是想要这个方法，请问你有这个相关的资料吗？或者这个方法的原理是什么？

作者: 春雨 时间: 2016-3-7 11:14

严重疏忽了：

看你做产孢，以为是验证交配型呢

除非是你自己用杂交及拆孢子方法构建的菌株来验证单双倍体时可以用三引物法。

一般验证倍体性只能选用流式细胞术了吧

作者: 春雨 时间: 2016-3-7 11:15

因为对于二倍体来说可以有MATa/MATa型及MATalpha/MATalpha MATa/MATalpha三种交配型。

其他倍体时也有类似情形，不能用三引物法验证了。

流式细胞术还是通用办法。

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:15

QUOTE:

原帖由春雨于 2016-3-7 11:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
因为对于二倍体来说可以有MATa/MATa型及MATalpha/MATalpha MATa/MATalpha三种交配型。

其他倍体时也有类似情形，不能用三引物法验证了。

流式细胞术还是通用办法。 ...

我是对a和α两株单倍体分别进行基因敲除，然后再融合在一起，但是总是用生孢培养基总是筛不出来双倍体，有可能是双倍体的生孢能力下降造成的，所以我想验证我筛的菌到底是单倍体还是双倍体，这种情况可以用什么方法呢？
还有个问题，你说的流式细胞术是怎么回事，我百度了这个方法并不能鉴定单双倍体啊，你有相关的资料吗，十分感谢。

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:18

QUOTE:

还有个问题，二倍体应该就只有一种交配型吧，a和α，两个a型的单倍体不能杂交为双倍体吧？谢谢你

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:19

你说的情形就可以用三引物方法验证了。

另外，基因型为MATa/MATalpha 基因型双倍体可以通过杂交获得。

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:20

关于三引物方法的原理可以看这篇文献：
Jensen R, Sprague GF, Herskowitz JI. Control of cell type in yeast by the mating type locus. J Mol Biol, 1981, 147:357~372.

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:21

你的实验一般不会出现MATa/MATa型或MATalpha/MATalpha型

可以通过转HO质粒获得上述基因型的双倍体。

作者: ququer787 时间: 2016-3-7 11:22

关于三引物方法的原理可以看这篇文献：
Jensen R, Sprague GF, Herskowitz JI. Control of cell type in yeast by the mating type locus. J Mol Biol, 1981, 147:357~372.

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你有这篇文章吗？我下载不下来……如果有的话能发到我邮箱里下吗？

作者: HOT兔 时间: 2016-3-7 11:22

我对产孢培养得到的单倍体进行PCR鉴定，为什么结果中一半以上都有两条带，其余都是alpha型条带。也对已知的a型单倍体酵母做过对照验证，也是出现两条带，求助，做过这个实验的大哥帮帮忙，我QQ389452799

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请问你是用的什么方法做的产孢培养，能不能给我发份相关的资料什么的，我做了很久的产孢培养，但是一直是两条带。

作者: qqq111 时间: 2016-3-7 11:23

请问楼主，你那有HO质粒吗？最近我也在做酵母单倍体，二倍体转化的试验，急需HO质粒。请问你有吗？我买或者互换都可以。谢谢了，希望你能看到。

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