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标题: 【求助】拉曼图里的荧光是真正的荧光特征峰吗？ [打印本页]

作者: 大嘴猴 时间: 2016-3-13 10:29 标题: 【求助】拉曼图里的荧光是真正的荧光特征峰吗？

我们这里有做生物样品的拉曼光谱的，在获得的图里面有很强的荧光，有的说，如果拉曼得不到就用其荧光谱。可我想问一下，在拉曼谱里面得到的荧光背景，是真正的荧光特征谱吗？这和荧光光谱仪里面的荧光图有什么区别？望高手不吝赐教啊！

作者: rrra6 时间: 2016-3-13 10:31 标题: 【回复】

原则上说，拉曼谱中的荧光和荧光谱中的荧光是一样的，只要激发波长和功率密度相同。注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了。但有一点要注意，不同波长的激发光照射样品，得到的拉曼相近，但荧光可以有很大不同，甚至相同波长不同功率激发，荧光谱都大不一样。

作者: 大大 时间: 2016-3-13 10:31 标题: 【回复】

我的样品在同一波长激发下，用拉曼测得的荧光光谱与激光共聚焦荧光显微镜得到的发射谱就完全不同，我还不知道原因。

作者: 哈密瓜 时间: 2016-3-13 10:31 标题: 【回复】

Yes, the spectra will be different if you use fluoresence spectrometer. The excitation intensity can make difference as well. If you are dealing with bio sample, try to use NIR laser, which will minimize your fluorescence. If you can still see some peak with fluorescence background, there are modeling or mathematical methods you can try. There are publications in these topics.

作者: 今生如此 时间: 2016-3-13 10:32 标题: 【回复】

说得好。
我试过氧化物的荧光，有差别。
不过
“注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了”
为什么是这样的呢？？？
我这里的数据处理是10000000除以激光波长。

作者: hcy517 时间: 2016-3-13 10:32 标题: 【回复】

注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了”？
Raman测定的是散射光，得到的是Raman shift. Raman shift和绝对波长（荧光光谱）之间要一个转换的吧。

作者: p1900 时间: 2016-3-13 10:32 标题: 【回复】

生物样品一般荧光峰比较宽，用荧光光测试之前一般先会做仪器本身曲线校正也就是仪器本身的响应曲线，这样测出的荧光峰才比较准，特别是对于宽峰更要做这个较准。
而Raman光谱一般采集的区域比较窄（指的是波长区域），一般在窄的波长范围变化不大，因此一般不考虑仪器本身响应曲线误差，但是Raman光谱来测宽荧光峰，影响就比较大。

作者: QQ爱 时间: 2016-3-13 10:33 标题: 【回复】

说得好。
除了波峰的横坐标位置不同，拉曼测得的荧光和荧光光谱所得的荧光在走势（形状）上差别大么，谁有二者的图谱上传一下就好了。
Raman测定的是散射光，得到的是Raman shift. Raman shift和绝对波长（荧光光谱）之间要一个转换的吧。

作者: 今生如此 时间: 2016-3-13 10:33 标题: 【回复】

换算关系应该是:拉曼位移值=10000000除以激光波长-10000000除以散射波长。

作者: 8899 时间: 2016-3-13 10:33 标题: 【回复】

从两种仪器的结构及荧光与拉曼产生的原理来说,两者有相似的地方,在这种情况与是不是用傅立叶拉曼,理论上来说荧光会减弱甚至消失的.

作者: n111 时间: 2016-3-13 10:34 标题: 【回复】

拉曼和荧光都是激发散射光，所以不加处理的原始光谱是拉曼+荧光+斯托克，关注拉曼的话，荧光是干扰，都是要把荧光除之而后快。经过FT以后，很多荧光都被扣除了。
荧光有延时，而且具有时间分辨特征，如果关注荧光这种特点，拉曼光谱是不够用的。
在荧光分析中，拉曼峰通常被用来作标志。

作者: wolfchen 时间: 2017-3-1 11:41

从一张谱图上以波长/波数区分荧光信号和拉曼信号是不太可能的。可选择合适的拉曼激发波长减少荧光信号，但如果选择长波激发虽然荧光没了，但拉曼也太弱难检测了，就只能时域分离方法分离荧光和拉曼信号了

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