分析测试百科

标题: 【讨论帖】用HILIC柱子做了下氨基糖苷类，发现有... [打印本页]

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:35 标题: 【讨论帖】用HILIC柱子做了下氨基糖苷类，发现有...

氨基糖苷类药物我们要做庆大霉素，安普霉素，丁胺卡那霉素，链霉素，新霉素！用HILIC柱子做了下氨基糖苷类，发现有其丑无比的峰！

作者: feima+ 时间: 2016-3-24 11:35

出峰时间有点后吧。。。

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:35

QUOTE:

原帖由 feima+ 于 2016-3-24 11:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
出峰时间有点后吧。。。

是有点后了，现在在重新摸索方法！

作者: remonte 时间: 2016-3-24 11:36

样品配制的溶剂可能有影响，而且影响还不小；洗针液是否要更换；重新设置梯度；换Amide柱试试

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:36

QUOTE:

原帖由 remonte 于 2016-3-24 11:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
样品配制的溶剂可能有影响，而且影响还不小；洗针液是否要更换；重新设置梯度；换Amide柱试试

样品是用初始流动相来定容的，洗针液每天都会更换，梯度都设置过好多遍了，还是走这样，很费解，不过氨基糖苷类药物真的是不好做！

作者: remenb 时间: 2016-3-24 11:37

回溶液加1%FA试试看
另外这几个你去看paper 峰都不会太完美

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:37

QUOTE:

原帖由 remenb 于 2016-3-24 11:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
回溶液加1%FA试试看
另外这几个你去看paper 峰都不会太完美

1%FA的ph那是很低的了，柱子的ph承受能力好像没那么低！谢谢你的建议！
回去测测ph看看，不过这柱子比c18的好多了，最起码不会一次性一个峰就出完！

作者: kewanqi2011 时间: 2016-3-24 11:37

从图来看,象是梯度走的快了点.
有两种可能, 1)是梯度在8分钟后升的太快了.2)是在洗柱后,平衡时间不够.
而后一种情况的可能性比较高.

作者: queen 时间: 2016-3-24 11:38

你的这些霉素相应重现性好么？

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:38

QUOTE:

原帖由 kewanqi2011 于 2016-3-24 11:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
从图来看,象是梯度走的快了点.
有两种可能, 1)是梯度在8分钟后升的太快了.2)是在洗柱后,平衡时间不够.
而后一种情况的可能性比较高.

谢谢专家指点！
我们平衡时间为了保险起见用了6min。我再试着调下条件先！

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:39

QUOTE:

原帖由 queen 于 2016-3-24 11:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的这些霉素相应重现性好么？

因为这些霉素刚做没多久，重现性暂时来看还是可以的！

作者: one 时间: 2016-3-24 11:44

看图明显是色谱柱问题，换个柱子试试吧。

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:44

QUOTE:

原帖由 one 于 2016-3-24 11:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
看图明显是色谱柱问题，换个柱子试试吧。

- -！这根柱子是新的哦！还冲了一个晚上的！

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:56

1%FA的ph那是很低的了，柱子的ph承受能力好像没那么低！谢谢你的建议！
回去测测ph看看，不过这柱子比c18的好多了，最起码不会一次性一个峰就出完！

=================================

还好啦 FA没强到那样
不过回溶液可能严重影响峰型，，
最近follow一篇paper试了一下
大概了解了。。。
他们主要用 mixed mode column
而且主要靠的并不是hilic而是WCX
所以这类用的条件都很tricky
gradient到90%的水相～～
这在一般HILIC很少见

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:57

看图明显是色谱柱问题，换个柱子试试吧。

========================================

No
这类化合物很难搞
以往都用C18搭ion pairing buffer
现在接质朴有些人开始改用HILIC的column
只是还是不好搞
有retent但是峰型不保证能看。。。。。

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:58

试过加了5ml的FA，PH大概在2点多。90%的水相对hilic好像不怎么好！不过到现在有几个物质还没完全分开！

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:58

氨基糖苷类药物我们要做庆大霉素，安普霉素，丁胺卡那霉素，链霉素，新霉素！
丁胺卡那霉素和链霉素的峰都出得不错，而且还分得很开，但是庆大霉素的峰就很奇怪了~~~~
流动相a是10mm乙酸胺+0.1%甲酸，b相是0.1%甲酸乙腈
先来张mrm图

图片附件: 2013052718011020.png (2016-3-24 11:58, 55.55 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=42962

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:58

下面是庆大霉素的提取离子图

图片附件: 2013052718011329.png (2016-3-24 11:58, 58.1 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=42963

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:59

还有安普霉素的峰也是十分诡异的

图片附件: 2013052718011976.png (2016-3-24 11:59, 56.87 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=42964

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 11:59

- -！请问各位大侠到时是哪里出错的呢？就是有几种药做不出啊，我也很郁闷啊！

作者: iii_ii 时间: 2016-3-24 12:00

尝试不同的PH的流动相，不同的色谱柱，多尝试下，有时候对梯度也很敏感……

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 12:00

QUOTE:

原帖由 iii_ii 于 2016-3-24 12:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
尝试不同的PH的流动相，不同的色谱柱，多尝试下，有时候对梯度也很敏感……

如果用c18的柱子做氨基糖苷类会不保留，需要加入七氟丁酸！
除了这柱子还真想不到用哪种了！

作者: viviwang1987 时间: 2016-3-24 12:01

现在有人改用更长链碳的ion pairing
不过我还没试过

作者: 00无名指00 时间: 2016-3-24 12:01

HILIC 柱也有好多种，就Waters 来说就有：HILIC ,HILIC-Amide，HILIC BEH，他们的多少是有点差异的。
你流速可以调大点，温度调高点，至于PH，酸性和碱性都试一试。
你是用的哪一款HILIC的，给个型号，我看能不能给你些建议……

作者: 00无名指00 时间: 2016-3-24 14:42

另外，提供下你的梯度？还有是否有在此条件下走得比较好的化合物？

作者: 831226 时间: 2016-3-24 14:47

我是购买安家的HILIC的柱子，没记错的话我是走等度的，a相是40的0.1%甲酸+水，b相是0.1%甲酸+乙腈

作者: zzzz 时间: 2016-3-24 14:49

QUOTE:

原帖由 831226 于 2016-3-24 14:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我是购买安家的HILIC的柱子，没记错的话我是走等度的，a相是40的0.1%甲酸+水，b相是0.1%甲酸+乙腈

传说HILIC柱最好用0.2%FA，如果PH允许的话，也可以用0.2%NH3，
另外我的化合物（主要是氨基酸类和糖类）在等度条件下也不是很好，但梯度下峰会漂亮些，这些条件你可以试一试，毕竟开发方法没什么是绝对的，需要不断尝试……

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 14:49

QUOTE:

原帖由 zzzz 于 2016-3-24 14:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

传说HILIC柱最好用0.2%FA，如果PH允许的话，也可以用0.2%NH3，
另外我的化合物（主要是氨基酸类和糖类）在等度条件下也不是很好，但梯度下峰会漂亮些，这些条件你可以试一试，毕竟开发方法没什么是绝对的，需要不断尝试…… ...

我也试过用0.3%的甲酸，峰型也没怎么改善！
谢谢您了，等明天有时间我要试一下！

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2016-3-24 14:50

哥们，现在这个糖苷类做得怎样了？有问题请教一下你

作者: 8princess8 时间: 2016-3-24 14:52

QUOTE:

原帖由 鹅鹅鹅 于 2016-3-24 14:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
哥们，现在这个糖苷类做得怎样了？有问题请教一下你

5种药分开三个峰，比以前好多了，最近应付期间核查在优化这方法！

作者: am10 时间: 2016-3-24 14:53

还是用的Hilic吗？流动相是什么啊？

作者: idea2011 时间: 2016-3-24 14:53

zic-hilic这款色谱柱不错。

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)