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标题: 【求助】关于样品处理挥干后复溶的问题 [打印本页]

作者: ladyhuahua 时间: 2016-3-24 15:55 标题: 【求助】关于样品处理挥干后复溶的问题

文献中在样品处理时，经过萃取或spe后，会进行挥干－复溶，经常会见到使用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶。
但是在我们的实验中发现使用100uL进行复溶并不容易，我们的样品基本是血液、尿液、器官等。
前处理后，使用100uL进行复溶后，不太容易转移到样品瓶中进样，特别是有时还要复溶后进行离心或过膜进行净化。
想问一下，使用少量溶剂或洗脱液进行复溶怎么操作？是不是有特殊的仪器？还是有什么技巧？
谢谢！！！

作者: 如影随形 时间: 2016-3-24 15:55

样品蒸干后复溶操作的难易这个要根据您的复溶体积来判断，也就是说比如是用旋蒸蒸干的，因为旋蒸瓶的内表面积比较大，要想用1ml以下的溶剂体积复溶且要完全（也就是保证数据的准确性）这个比较困难，但是如果用氮吹浓缩的，因为氮吹浓缩时是渐渐集中于底部那一小点上，这样小体积定容相对容易些。不过用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶，感觉要想完全可能也不是太好操作，我们复溶时用超声波助溶效果不错，您可以试试。

作者: iii_ii 时间: 2016-3-24 15:56

100ul确实有点少

作者: wiwi 时间: 2016-3-24 15:56

为什么不用1毫升呢？呵呵

作者: cj_mondy 时间: 2016-3-24 15:56

用内插管啊

作者: 大海啊故乡 时间: 2016-3-24 15:57

我们用的标准都是1mL复溶的

作者: 911 时间: 2016-3-24 15:58

生物样品由于来源有限，样品量非常小，所以前处理的样品使用量也很小（我们多用10~50uL，蛋白沉淀），如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL，所以不能大体积复溶，否则样品被稀释，降低了检测灵敏度。
因此我们用到复溶时，会根据待测化合物的性质，配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶，并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度，偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶，一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应（尤其是乙腈）及溶剂挥发引发的浓度改变（数百个样品长时间序列进样，通常要有内标）；实在溶解效果不佳，会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、

作者: 9900 时间: 2016-3-24 16:00

生物样品前处理后一般用EP管在氮吹仪吹干，100-200ul复溶，然后高速离心取上清到内插管再放进进样瓶。

作者: queen 时间: 2016-3-24 16:01

生物样品由于来源有限，样品量非常小，所以前处理的样品使用量也很小（我们多用10~50uL，蛋白沉淀），如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL，所以不能大体积复溶，否则样品被稀释，降低了检测灵敏度。
因此我们用到复溶时，会根据待测化合物的性质，配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶，并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度，偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶，一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应（尤其是乙腈）及溶剂挥发引发的浓度改变（数百个样品长时间序列进样，通常要有内标）；实在溶解效果不佳，会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、
谢谢！

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就像您回复里说的：“样品被稀释，降低了检测灵敏度。

作者: yjf1026 时间: 2016-3-24 16:01

生物样品由于来源有限，样品量非常小，所以前处理的样品使用量也很小（我们多用10~50uL，蛋白沉淀），如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL，所以不能大体积复溶，否则样品被稀释，降低了检测灵敏度。
因此我们用到复溶时，会根据待测化合物的性质，配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶，并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度，偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶，一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应（尤其是乙腈）及溶剂挥发引发的浓度改变（数百个样品长时间序列进样，通常要有内标）；实在溶解效果不佳，会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。

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你说的很详细，我们的也差不多也是这样的处理的。
加入1mL的溶剂去复溶的情况比较少用！如果遇到加入小体积不溶解的情况，我们的办法一般是做个预实验，尝试下你所说的不同复溶剂，然后超声，如果不还是不溶解，最后一步可以离心把不溶物处理掉，然后分析。内标的在沉淀的时候加入。

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