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标题: 【求助】各位高手帮我看看冬虫夏草中腺苷的图谱 [打印本页]

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:21 标题: 【求助】各位高手帮我看看冬虫夏草中腺苷的图谱

最近在做冬虫夏草的含量测定，因为是新手，好多东西都不清楚，恳请各位高手帮忙解决几个问题。药典的条件是这样的：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液（PH6.5)甲醇（85：15）为流动相，波长260nm。我做出来的峰是这样的：样品图，再还有是对照品图

想问一下，腺苷峰本来就是这样的吗？还有，含量的计算公式是怎样的呢？
对照：加90%甲醇制成每1ml含20ug的溶液。
样品：称0.5g,加90%甲醇10ml,称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用90%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液即得。
进样量为10ul.

作者: wanglaoshi 时间: 2016-3-29 21:22

峰形很差，调整下流动相试试
含量的计算公式：
W(%)=A样*C对*10*100%/A对

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:22

药典上规定的流动相是85:15，我准备调到87:13试试，不知道改变这么一点对峰的形状有没有显著的影响

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:23

QUOTE:

原帖由 wanglaoshi 于 2016-3-29 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
峰形很差，调整下流动相试试
含量的计算公式：
W(%)=A样*C对*10*100%/A对

请问这个10代表的是什么？我的实验步骤是这样的：对照0.0025g到100ml容量瓶中，用90%甲醇稀释至刻度；供试品0.5g加90%甲醇10ml加热回流.我的理解公式应该是S样/C样=S对/C样，所以
C样/10=S样*C对/S对=S样*（M/100)/S对=S样*M*0.1/S对，M为对照品的称量。
不知道这样计算对不对？刚接触这块，什么都不懂，请大虾们不要见笑！

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:24

换了流动相的比例，还是不理想！各位高手帮帮忙啊，给点意见！

作者: standbyme 时间: 2016-3-29 21:24

谱图这么差啊，再找找别的方法，活着看看你配的换重演有没有问题

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:25

缓冲液应该没有问题啊：0.01M/L的磷酸二氢钠和0.01M/L的磷酸氢二钠（68.5:31.5），流速1.0

作者: 耗子=== 时间: 2016-3-29 21:25

对照品都这样，先换根柱子再试试

一般来说，药典的方法都还可以，只要微调一下就可以了

5楼中的那个10，是单位之间的换算，按公式计算出来时mg/g，但是结果是按%计算，所以要单位换算统一

作者: wawa 时间: 2016-3-29 21:26

是不是你的系统有漏？或者色谱柱坏了？

作者: 911 时间: 2016-3-29 21:26

用90%甲醇进一针空白看看。

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:27

QUOTE:

原帖由 911 于 2016-3-29 21:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
用90%甲醇进一针空白看看。

进了，峰也是毛毛糙糙的，不知道是怎么回事

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:27

是不是你的系统有漏？或者色谱柱坏了？

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我做完以后，先用10%甲醇冲，再用纯甲醇冲，应该没问题的吧

作者: XYZQ 时间: 2016-3-29 21:28

1. 问题可能在你这个样品的配制上，换个厂家的甲醇试试

2. 样品溶剂过强，用流动相可以溶解样品吗？也有资料是50%甲醇溶解。

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:28

问题可能在你这个样品的配制上，样品溶剂过强，用流动相可以溶解样品吗？

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这个标准是药典规定的，我看到网上其他人写的论文也是用跟我同样的方法，但做出来的峰比我的好看多了。跟药典规定不一样可以吗？

作者: XYZQ 时间: 2016-3-29 21:29

腺苷在无水乙醇中溶解性较差，不能被完全溶解，一般用75％～50％的乙醇溶液配置腺苷较好。

作者: XYZQ 时间: 2016-3-29 21:30

对照品溶液和供试品溶液均不宜久贮。

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:30

QUOTE:

原帖由 XYZQ 于 2016-3-29 21:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
对照品溶液和供试品溶液均不宜久贮。

我的对照也是用90%甲醇配的，您的意思是用50%甲醇试试？

作者: TNT 时间: 2016-3-29 21:30

太丑了，你的图。

有标准就先按标准做，发现问题再分析改进，改进是为了配合你的检测条件。

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:31

QUOTE:

原帖由 TNT 于 2016-3-29 21:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
太丑了，你的图。

有标准就先按标准做，发现问题再分析改进，改进是为了配合你的检测条件。

我也知道我的图丑了！我就是按照标准做了然后还出这么丑的图才上来请教大家的呀

作者: birdfish 时间: 2016-3-29 21:31

腺苷在无水乙醇中溶解性较差，不能被完全溶解，一般用75％～50％的乙醇溶液配置腺苷较好。

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药典有规定的，不能改的
我们也在做发酵虫草中的腺苷，不过是用盐溶液提取的

作者: duchy 时间: 2016-3-29 21:32

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原帖由 birdfish 于 2016-3-29 21:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
腺苷在无水乙醇中溶解性较差，不能被完全溶解，一般用75％～50％的乙醇溶液配置腺苷较好。

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药典有规定的，不能改的
我们也在做发酵虫草中的腺苷，不过是用盐溶液提取的
...

请问你说的用盐溶液提取是把90%甲醇换成缓冲液的意思吗？对照和样品都用流动相溶解吗？

作者: 蛋白之安基 时间: 2016-3-29 21:32

请问这个10代表的是什么？我的实验步骤是这样的：对照0.0025g到100ml容量瓶中，用90%甲醇稀释至刻度；供试品0.5g加90%甲醇10ml加热回流.我的理解公式应该是S样/C样=S对/C样，所以
C样/10=S样*C对/S对=S样*（M/100)/S对=S样*M*0.1/S对，M为对照品的称量。
不知道这样计算对不对？刚接触这块，什么都不懂，请大虾们不要见笑！

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10是由你的样品从0.5g定量溶解到10ml来的。因为从色谱理论上计算出来的样品浓度是mg/ml，所以计算0.5g里面所含的百分含量就是10ml里面含的总量占的百分比。

作者: fei1226com 时间: 2016-3-29 21:33

峰形挺差的，一定要用药典的方法吗？换方法试试可以吗？我总觉得药典的方法，不一定就是最好的方法。

作者: 耗子=== 时间: 2016-3-29 21:34

请问你说的用盐溶液提取是把90%甲醇换成缓冲液的意思吗？对照和样品都用流动相溶解吗？

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不是。我们做的是发酵产品，方法时自己做的。你要是做药典上的东西，还是按照药典方法做吧
要是改了，人家检查下来，不好交代啊
药典上的方法，应该问题不大的
检查一下别的方面

作者: baidukk 时间: 2016-3-29 21:34

把有机相加大点试试！

作者: eor 时间: 2016-3-29 21:35

呵呵，08年我应一个保健品公司的要求做过，图谱和楼主的差不多，也确实折腾过一阵子。如果说提取有问题，那标准品总应该可以了吧？但事实和我们想的不一样，最后发现进样量有很大的影响因素。最后将进样量减少到5ul就好了。楼主不妨试试看。

作者: zhezhe 时间: 2016-3-29 21:35

之前我应一个用户的要求，替他们做过这个东东，确实折腾了好一阵子，刚开始做的图谱和楼主的差不多，把能想到改善的条件都改善了，但是效果还不是很好，最有尝试着改变一下进样量，我们将进样量减少到5ul，谱峰就好了。楼主不妨可以一试。

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