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标题: 【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？ [打印本页]

作者: IAM007 时间: 2016-4-4 21:41 标题: 【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？

我这两天抽提的总RNA 凝胶电泳总是18s的亮度超过28s很多，28s跟5s的亮度一样甚至还要暗。
请教高手，这是不是降解啊？
我印象中的降解是5s条带变亮，但是28s不会明显比18s暗啊。这种情形第一次碰到。请高手帮忙指点！不甚感激！

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作者: ha111 时间: 2016-4-4 21:44

个人认为是加样量多了，还有溶解时间短了，跑胶时间短了些，不知道，你的上述时间是多少？

作者: IAM007 时间: 2016-4-4 21:44

谢谢LS！
这个样本的浓度是32，A260/A280为1.732，加样量1ul，100V，跑了30分钟。因为没有加Marker，可能不大好对比。
我以前跑胶的量多得多，电压时间也是这样，可是不是这样的结果。
下面我以前的结果，都是这样的。

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作者: dmg 时间: 2016-4-4 21:46

楼主，你以前的电泳时变性电泳，效果很好啊！怎么跑出的？

作者: hulu呼噜 时间: 2016-4-4 21:46

个人感觉应该是降解了吧，就像下边的那张电泳图，好的电泳图28s应该比18s要亮的多。

作者: ilovegaga 时间: 2016-4-4 21:46

可以肯定的说RNA 发生了降解.我开始提RNA 时也是这个样子.

作者: IAM007 时间: 2016-4-4 21:47

QUOTE:

原帖由 dmg 于 2016-4-4 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，你以前的电泳时变性电泳，效果很好啊！怎么跑出的？

我跑的不是变性胶，就是普通的凝胶，0.8％浓度的，100V跑二、三十分钟左右，呵呵！
以前都是抽提细胞株的总RNA，量多，降解了一部分还剩很多，不怕！
现在抽提的是临床骨髓标本的总RNA，细胞少了，问题也多了！

作者: IAM007 时间: 2016-4-4 21:47

QUOTE:

原帖由 ilovegaga 于 2016-4-4 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可以肯定的说RNA 发生了降解.我开始提RNA 时也是这个样子.

那你后来是怎么样改进的啊？请教哦！

作者: dog002 时间: 2016-4-4 21:48

我以前提取RNA的时候,Trizol试剂还没有很好的市场, 我们那个时候是用自己配制的试剂提取的, 浪费了很多很很的时间, 结果都不很理想.你要想得到好的结果,首先要弄清楚RNA 提取所要注意的事项, 另外还需要一定的经验. 总之我个人认为除了所用器具和试剂符合要求外,环境也是一个非常值得注意的地方.

作者: yhtfyl 时间: 2023-2-24 08:27

感谢楼主分享，受教了

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