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标题: 【求助】PCR产物直接测序和克隆后测序的区别 [打印本页]

作者: H2O 时间: 2016-4-4 22:52 标题: 【求助】PCR产物直接测序和克隆后测序的区别

请问PCR产物直接测序和PCR产物克隆后测序有什么区别？两种方法分别在什么情况下应用？

作者: baidukk 时间: 2016-4-4 22:52

不好意思，楼上几位，最大的区别不是你们说的，前面的一些碱基，也可以测序获得，如果反向不够长的话，可以设计通用引物测序，可以得到完整的序列。
最主要的区别是：直接测序是测你总的PCR产物，是总的情况的反应，不能看出一些量少的东西。但是克隆测序，一个克隆只是你PCR产物中的一条连。就是你克隆进去并逃到的一种情况。不能反应你PCR的总情况。

作者: kulee 时间: 2016-4-4 22:53

其实最主要的区别就是看你是否需要完整、可信的序列了
PCR产物直接测序时前30～50bp和终止前的序列都是无法正确读取的
如果克隆到载体上用通用引物测序就可以测一段载体的序列避免这个问题从而获得完整的序列信息
仅供参考

作者: vcve 时间: 2016-4-4 22:53

载体克隆回新增一部分突变。

作者: cbou876 时间: 2016-4-4 22:53

不好意思，楼上几位，最大的区别不是你们说的，前面的一些碱基，也可以测序获得，如果反向不够长的话，可以设计通用引物测序，可以得到完整的序列。
最主要的区别是：直接测序是测你总的PCR产物，是总的情况的反应，不能看出一些量少的东西。但是克隆测序，一个克隆只是你PCR产物中的一条连。就是你克隆进去并逃到的一种情况。不能反应你PCR的总情况。

作者: H2O 时间: 2016-4-4 22:54

那么我要用PCR测序验证一种病毒，是否需要克隆呢？

作者: baidukk 时间: 2016-4-4 22:54

看你的病毒大小
如果不大的话不需要
sars就是直接用75对引物扩增的

作者: yhtfyl 时间: 2023-2-24 08:32

感谢楼主分享，受教了

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