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标题: 【转帖】实验之美——DNA呈现 [打印本页]

作者: PCR 时间: 2016-4-6 16:24 标题: 【转帖】实验之美——DNA呈现

枯燥的实验中怎么会和美搭上边儿呢？你会觉得作者也许是做实验累得昏了头，也许……
那是从血凝块中提取基因组DNA的实验重复了大约100遍之后……
1毫升鲜红的血液凝固后离心析出血清，剩下的是小手指尖大小的血凝块，纤维蛋白网罗着血细胞，其中是大量的没有核的红细胞和少量的有核的白细胞，基因组DNA便藏在这些白细胞的细胞核中，表面上根本看不见摸不着。海量的书本和文章中都介绍了现在人们可以通过一系列的方法把它提取出来，呈现在眼前。我一直认为这是一件不可思议的事情，直到有一天我也能熟练地提取它。
整个提取过程大约要加12次试剂、水浴两次、离心7次，更不用说其中颠倒混匀的操作不计其数。任何一个步骤的小疏忽，都可能导致失败。在摸索方法的两个月里，我做事的态度发生了很大的变化。同样的操作，同样的试剂，结果可能时好时坏。开始的时候常常是折腾了一整天，最后一无所获，更郁闷的是步骤太多了，失败了很难找到问题出在哪里？我们只好一边不断地看Protocol、看文献，找原因，一边不断修正，尝试，坚持，一遍又一遍做下去。我叮嘱自己和学生们动作轻柔些再轻柔些，混匀些再混匀些，我甚至虔诚地凝视着那些离心管，祈祷着好运气降临。情况真的在一点点变好，变得可控。现在每次加过酚氯仿提取液后，使劲震荡，能看到离心管内如巧克力奶茶一样均匀细腻的状态；离心后，基本上都可见清晰的分层，或界面附近云雾样的蛋白膜；吸取上清时，不再有胶冻样的物质冲上来堵住枪头……
有一天，我在上清中加入冰冷的无水乙醇和浓的醋酸钠后，举起管子对着灯光看，一团乳白色的云雾出现了，这就是我们所期待的DNA吗？轻轻的颠倒几次后，云雾被无水乙醇吸干了水分，慢慢凝聚成丝丝缕缕悬浮着，指尖轻轻弹击管壁，那些调皮的精灵在管子里快活的跳起舞来，真的很漂亮很漂亮……

作者: gogo 时间: 2016-4-6 16:26

请问楼主是用NAI法提取DNA 嘛?我现在提DNA电泳后经常发现它降解了,好郁闷阿,楼主能支些招数吗~~~~

作者: PCR 时间: 2016-4-6 16:27

我是用最传统的酚氯仿的方法提取的，DNA没那么容易降解的。请再多实践几次。

作者: shenkunjie 时间: 2016-4-6 16:29

做实验就像天工造物，须谨慎为之，一步一期待，一步一境界，不知何时，尤物出世了、、、、、、、、、、

作者: 3.14 时间: 2016-4-6 16:30

看来LZ还是分子生物学实验的新手，血凝块中提取基因组DNA是一项常规工作，有不少现成的方法，当初我一次就从血块中成功提取出了质量很高的DNA，只要按部就班操作即可。如果偷懒点，现成的Kit更容易。LZ写得有点玄乎了。。这样也能被推荐上了首页

作者: any333 时间: 2016-4-6 16:30

我也提过DNA，不过我不如楼主那么乐观，我可是很怕提DNA啊，那个工作太麻烦、太累了

作者: ququer787 时间: 2016-4-6 16:32

提全血的DNA，又有试剂盒会简单的多。

作者: one 时间: 2016-4-6 16:33

我们用的是KI法后酚氯仿提取量不错。

作者: 9900 时间: 2016-4-6 16:33

我是刚刚进入免疫系实验室的新生，一切都是0啊，和楼主有同感。我也提取dna，但是是质粒。但是第一周的时间，我全部用以前师兄师姐们留下来的菌种，可惜都失败了。后来我要到了质粒，自己做感受态，转化，成功了，好兴奋啊。

作者: 9900 时间: 2016-4-6 16:37

不能从技术中体会到美的，终其一生，只能是一代匠师，试观各大科学家，他们为何能坚持在常人看来非常枯燥的试验研究，恐怕并不能以“吃苦耐劳”形容吧。
常人之苦乃是大师之乐，非关名利，仅为那种莫名的乐受。若不能有这种乐受，恐怕只是在行业里混衣食而已，仅仅将其视为一项工作而非事业。现代中国，久无大师，恐怕与此不无关系吧。

作者: xueyouzhang 时间: 2016-4-6 16:37

说实话，我也觉得提取这个不是什么很神奇的东西啊，LZ就想写的这么玄乎，不过LZ这种自娱自乐的精神还是很有趣的。

作者: PCR 时间: 2016-4-6 16:38

一直认为，工作不应是生活的全部。记得汤钊猷院士，一位著名的外科医生，业余时间喜欢素描风景写生，多年前，他的几幅以上医的古色古香的老房子为主题画的小画，还在橱窗中展览过。这些在百度百科的个人介绍中你找不到，却深深记在了我的脑海。

作者: milkdog 时间: 2016-4-6 16:39

我是刚刚进入免疫系实验室的新生，一切都是0啊，和楼主有同感。我也提取dna，但是是质粒。但是第一周的时间，我全部用以前师兄师姐们留下来的菌种，可惜都失败了。后来我要到了质粒，自己做感受态，转化，成功了，好兴奋啊。

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不要跟我说你当初是自己配的S1 S2 S3 异丙醇沉淀法提的,用试剂盒提SO EASY.

作者: rfv 时间: 2016-4-6 16:42

DNA提取用试剂盒比较方便，不容易降解，耗时也不长

作者: wiwi 时间: 2016-4-6 16:43

是啊，现在更是有新一代的核酸提取系统，全血、血清、拭子等样品30分钟内可以完成32个样品。植物叶片、花、种子、根、动物组织等样品也可以在45分钟内完成32个样品。

作者: wanglaoshi 时间: 2016-4-6 16:44

晒一下我们用磁珠法利用核酸自动提取仪提取的结果 (*^__^*) 嘻嘻…… 不错吧！

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作者: ilovegaga 时间: 2016-4-6 16:47

从血清中提取DNA的实验已经进行大半年了，酚氯仿法步骤繁多，刚开始时主要是加过酚氯仿异戊醇后震荡容易发生泄露，并且最后沉淀离心完，看到的沉淀量比较大，当然有时比较小或者压根看不到。我的血清样本取了200微升，加了400微升的提取液，20微升的蛋白酶K ，最后是400微升上清加1/10醋酸钠和2倍体积的冷乙醇，但是从没有像楼主说的那样看到絮状DNA精灵，一直没有特别理想的结果，一直在继续。。。

作者: yhtfyl 时间: 2023-2-24 09:01

感谢楼主分享，受教了

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