用Primer设计的7个NONE的引物也不见得就是万能的,当然了,它至少考虑了引物设计的几个关键---fp和 rp长度最好控制在18-25个base,Tm值相差小与5,GC含量相差小与10%。但另一方面,引物的基因特异性却要靠自己来把握,注意3`端的5个碱基一定要保守,建议用BlockMaker服务器进行特异性验证。其实引物设计无非是解决两个矛盾,即PCR可行性与基因特异性之间的矛盾,二者很难兼顾,所以只要找到最佳平衡点就行了,没有完美的Primer pairs,只有现实可行的idea和protocol,Try U Best And U Will Make It
推荐Primer5,DNAStar,Oligo 6三个软件联用,再借助BlackMaker服务器验证。Good luck:)作者: finger 时间: 2016-4-6 17:00