标题:
【求助】关于Realtime的溶解曲线
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作者:
tuuu2
时间:
2016-4-8 08:43
标题:
【求助】关于Realtime的溶解曲线
各位,昨天做Realtime时,出现奇怪的溶解曲线,想请教一下大家,这是什么原因,谢谢!跑胶的条带还是比较特异的,Realtime的结果重复两个孔之间的误差还是可以接受的,我怀疑是模板的退火温度太高,导致没有完全溶解,请大家看下溶解曲线,帮忙分析下,先谢了!
第1张是一个基因PCR的Raw的溶解曲线,第2张是其Derivative的溶解曲线,第3张是另一个基因PCR的Raw的溶解曲线,第4张是其Derivative的溶解曲线,第5张是Realtime的条件。
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作者:
tuuu2
时间:
2016-4-8 08:44
第2张
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作者:
tuuu2
时间:
2016-4-8 08:44
第3张
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作者:
tuuu2
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2016-4-8 08:45
第4张
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作者:
tuuu2
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2016-4-8 08:46
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作者:
ququer787
时间:
2016-4-8 08:46
真的好奇怪啊,我刚刚开始做realtimePCR,不是很理解为什么会出现这种溶解曲线,特别是前三张,按理说应该是有一个Tm值处的高峰来表示大量解链过程的,第四张倒是可以通过Tm值过高来解释。请问wclbdyxb现在找到原因了吗,期待回复哦
作者:
tuuu2
时间:
2016-4-8 08:47
嗯,原因应该就是PCR产物的Tm过高,出现这个的原因和机器默认的条件有关,可以把溶解曲线的最后1个温度改到98度,就能出现那个峰了
作者:
coolcool
时间:
2016-4-8 08:47
我也遇到了这个问题。我们的仪器是专门的一个老师操作的,出现了像心电图样的溶解曲线,我觉得是那个老师不会设置才出现的这种情况,我的96个样本都白费了
作者:
u76mp
时间:
2016-4-8 08:47
求助,我的溶解曲线也是象心电图样,有的连CT值都没有。各位高手,请给点意见或建议,好吗?谢谢了。
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