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标题: 【讨论帖】cDNA文库构建 SOS [打印本页]

作者: PCR 时间: 2016-4-9 09:50 标题: 【讨论帖】cDNA文库构建 SOS

我使用clontech 的smart试剂盒构建文库，预实验时在合成了ds cDNA后酶切过柱，电泳时什么也见不到，真是郁闷，试剂有限，尤其是柱子，一个试剂盒就5根，我试了两根，什么没做出来，我要用它建两个库。有没有大虾知道可以用什么其他柱替代（便宜的）用于摸索条件？这样下去试剂用完了，没建出来不知如何向老板交差。大家救救我

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作者: 9900 时间: 2016-4-9 09:51

我也想做文库，目前准备用CloneMiner cDNA Library Construction Kit。多多交流噢。。。

作者: PCR 时间: 2016-4-9 09:51

QUOTE:

原帖由 9900 于 2016-4-9 09:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我也想做文库，目前准备用CloneMiner cDNA Library Construction Kit。多多交流噢。。。

太好了，找到同志了，可惜试剂盒有些不同，目前实验没有什么进展，暂时在歇气，等细胞长好后重整旗鼓，直到弹尽粮决

作者: 9900 时间: 2016-4-9 09:52

太好了。又有这么多同志，以后多多交流。我也用这个试剂盒。我的emails是rufengleng@yahoo.com.cn各位的呢？

作者: 9900 时间: 2016-4-9 09:52

大家看看推荐一下内容中的试剂盒：
cuturl('http://www.biocompare.com/molbio.asp?catid=123')

作者: PCR 时间: 2016-4-9 09:53

SMART cDNA Library Construction Kit
List Price Inquire
Catalog Number K1051-1
Size 1 Kit
我用的这个，但不知道结果会如何

作者: daod 时间: 2016-4-9 09:53

我是从组织中提取mRNA的。以上几位是提取细胞的吧？

作者: PCR 时间: 2016-4-9 09:53

我就是用的总RNA，来自细胞

作者: 椰子叶子 时间: 2016-4-9 09:53

我也是用总RNA，从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗？我做的一直都不是很好，smear长度还可以，只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢。

作者: PCR 时间: 2016-4-9 09:54

QUOTE:

原帖由 椰子叶子 于 2016-4-9 09:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也是用总RNA，从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗？我做的一直都不是很好，smear长度还可以，只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢。

和你的问题一样，所以过柱后就看不到了，准备重做。等有满意的结果再传吧。

作者: 椰子叶子 时间: 2016-4-9 09:54

好的。谢谢。看来我还是不要急着过柱的好。因为我们三个人用一个试剂盒。你问道有别的柱子可替代的了吗？

作者: wiwi 时间: 2016-4-9 09:54

我也是用总RNA，从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗？我做的一直都不是很好，smear长度还可以，只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢
smear长度还可以，只是亮度不够,如果这样的话
应该增加LDPCR的循环次数，可以增加2-3个循环
说明书上的TROUBSHOOTING上写的很清楚
应该根据你的RNA起始量来决定循环数

作者: PCR 时间: 2016-4-9 09:55

欢迎novelfunction加入讨论，我试过最大26循环，但是还是不太理想。请问你做到哪一步，过柱有什么技巧吗？谢谢！

作者: 椰子叶子 时间: 2016-4-9 09:55

我目前已经试到28个循环了，而且总RNA的量也加大了，但是结果还是很不理想。请教novelfunction，这样是否还要增加循环？还有就是和xib99一样的问题，谢谢。

作者: wanglaoshi 时间: 2016-4-9 09:55

别着急!仔细阅读说明书，能做出来的。我比你幸运，分级分离第一次就做出来了。仔细检查下自己的操作，反应条件，所加试剂。看看哪里出错了，柱子你可以在clontench的代理经销的地方买到。但是我觉得一个试剂盒做两个文库足够了。下次你一定成功的。

作者: INK 时间: 2016-4-9 09:56

请教一下，分级回收后连接载体，最后检测到的片段大小与你的分级回收到的大小一致吗？我碰到一个郁闷的问题，回收完后连接载体，最后检测到的都偏小，文库的质量不合格，正在郁闷之中，请各位大虾多多帮忙啊！谢谢谢谢

作者: yhtfyl 时间: 2023-2-24 07:32

感谢楼主分享，受教了

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