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标题: 【求助】如何处理冻存组织和保存它的冻存管 [打印本页]

作者: 北风那个吹 时间: 2016-4-9 10:45 标题: 【求助】如何处理冻存组织和保存它的冻存管

我是新手，要做RT-PCR，需冻存组织然后一起提RNA.现面临如何处理冻存组织和保存它的冻存管处理问题。看了园上关于这方面的一些讨论，仍有些疑问。请各位高手指点！！！
1。冻存组织迅速丢入液氮，时间是多少？几分钟？还是半小时以内？
2。取下的组织需不需要清洗？我们有些人是不洗的，但他们的组织量大，我的组织因为特殊，只能取约1～2克左右，我挺担心不够的
3。冻存管如不作DEPC处理，有什么要求？是否要求高压灭菌？还是新开包或不能过保质期？
4。提到锡纸包裹组织，以避免粘于管壁不好取，请问会不会影响结果？2ml的冻存管里加上锡纸，会不会太挤？
5.RNA 酶降解是越到后越关键，我的组织量少，冻存管如不作DEPC处理，影响可能性会否不同？
这些是我目前急需解决的，谢谢大家！

作者: join 时间: 2016-4-9 10:45

1,需要尽可能快的把组织放到液氮中速冻，否则会导致Rna的部分降解，时间当然是越短越好。
2，我不知道你取下的是什么组织，但一般情况下是不用清洗的。
3，冻存管不用任何的处理就可以。
4，你可以把冻存管先装入液氮，然后把取下的组织投入冻存管的液氮中，在管中的液氮未挥发尽前投入装有液氮的保温瓶中，然后放于－70c就可以。这样就不会粘到管壁上了。
5，在我看来，不作DEPC处理应该不会影响最后的结果，因为你的组织在接触冻存管的过程中都是在极低温度下，即使有Rnase，在这种温度下其也不会有活性。在提取Rna的过程中注意防止降解就可以了。

作者: 9900 时间: 2016-4-9 10:45

直接用镊子挟住去盖的冻存管然后伸进装有液氮的保温瓶中，待温度降低一定程度后，冻存管中即装满了液氮，然后在装入组织到冻存管中。

作者: 北风那个吹 时间: 2016-4-9 10:47

谢谢。我也觉得在冻存管中加液氮挺好的，可惜操作难了点，你有好方法吗？

作者: 66+77 时间: 2016-4-9 10:47

直接用镊子挟住去盖的冻存管然后伸进装有液氮的保温瓶中，待温度降低一定程度后，冻存管中即装满了液氮，然后在装入组织到冻存管中。

作者: idea2011 时间: 2016-4-9 10:48

冻存管高压灭菌后再用最放心了，我试过，提出的RNA很好。另外，可以将组织放入冻存管后，盖子不要拧太紧，保证不会开就行了，然后装入保存盒或布袋投入液氮，液氮会进入冻存管内，组织一样不会粘壁；而且，从液氮中取出后，管内存留的液氮有利于低温和RNA抽提。

作者: 00无名指00 时间: 2016-4-9 10:49

有一点必须强调：一次性使用的冻存管，EP管，TIP头等，只要是正规厂家生产，包装完整，无需进行灭RNA酶处理，它的原材料和生产过程决定了它不可能被RNA酶污染。
保存标本不用那麽复杂，直接放进去，把冻存管的密封圈压好旋紧就行。
处理标本时尽量快一点。

作者: 3.14 时间: 2016-4-9 10:50

为保险起见，最好还是买那种RNase free的管子。

作者: milkdog 时间: 2016-4-9 10:50

越来越发现老帖子更有价值和讨论热情。不知道一个冻存管是只装一个100mg大小的组织块好呢，还是说一个冻存管里面装很大一整块，用的时候再切下一小块，两者相比如何权衡利弊呢？单独分装一小管以后提取RNA或者蛋白的时候方便，且组织避免了反复冻融和污染的损害，缺点是太耗冻存管以及保存容量增大好多，还有就是切得越多会不会越容易导致自身降解之类的可能呢？如果一整大块一个冻存管保存，好处是取材时候方便快捷，缺点就是以后提取额RNA等操作时候麻烦以及可能的反复冻融。不知道具体操作如何选择，请多多指导！

作者: wanglaoshi 时间: 2016-4-9 10:51

QUOTE:

原帖由 milkdog 于 2016-4-9 10:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
越来越发现老帖子更有价值和讨论热情。不知道一个冻存管是只装一个100mg大小的组织块好呢，还是说一个冻存管里面装很大一整块，用的时候再切下一小块，两者相比如何权衡利弊呢？单独分装一小管以后提取RNA或者蛋白的时候方便 ...

你好，不知道你的问题后来是如何解决的？因为我现在液遇到同样的问题？望前辈不吝赐教，谢谢！

作者: yhtfyl 时间: 2023-2-24 07:33

感谢楼主分享，受教了

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