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标题: 【求助】生物表面活性剂进行定性或定量 [打印本页]

作者: 小妖精@ 时间: 2016-4-9 12:44 标题: 【求助】生物表面活性剂进行定性或定量

用排油圈法对生物表面活性剂进行定性或定量时，看不到文献中提到的排油圈，可能观察的方法不对，请各位前辈给予指教

作者: danzi 时间: 2016-4-9 12:45 标题: 【回复】

终于找到一位同行,我也是做生物表面活性剂的,希望以后我们能多交流,我的QQ:289210614
EMAIL:boxin686@sina.com
排油圈我做过,效果不错,但我只能做到定性,由于形成的排油圈有时不太稳定,做定量我个人认为不够准确
不知道你用的什么油,说说我的方法吧,
在直径12厘米的表面皿里加入50ml蒸馏水(千万不能用自来水)然后滴入30微升液体石蜡,然后在中间滴入20微升的发酵液,如果立即下沉,形不成排油圈说明没有表面活性剂,如果发酵液能在油滴上形成一个小液滴,你一定要有耐心,要等一会儿才会形成排油圈,有时十几秒,有时要一两分钟,液体石蜡一下就被排开,形成排油圈,不过,有的排油圈比较规则,有的不太规则,这要看你的菌种和表面活性剂的含量的多少,

上述适用于生物表面活性剂含量不是很大时,一般在排油圈直径在0-6厘米时比较准确,如果你的生物表面活性剂含量很高时,可以适当增加液体石蜡,或减少发酵液,以上方法是我在做生产生物表面活性剂筛选时用的,

我目前筛选出一株铜绿假单胞杆菌,效果很好,发酵后用上述方法已经不能测生物表面活性剂的含量了,我用了100微升的液体石蜡和一滴发酵液,排油圈都有10厘米,所以我准备用其它方法做生物表面活性剂的定量分析.你如果有好的方法的话,还希望能多多交流!!!!!

作者: n111 时间: 2016-4-9 12:45 标题: 【回复】

你的菌种的初步筛选是怎么筛的?是富集培养后,用血平板和油平板筛的吗?

作者: jishiben 时间: 2016-4-9 12:45 标题: 【回复】

是的,我是富集后,用油平板筛的

作者: zouyou 时间: 2016-4-9 12:46 标题: 【回复】

我也用了油平板可有些问题:
我先把原油和滤纸分别灭了菌,然后把滤纸浸满了原油,倒好培养基后,等它凝固了后再在上面盖上滤纸,最后再将富集培养液划到油平板上.放到35度下保温保湿培养.可原油没有凝住,我把平板倒置培养后,油都留下来了.不知道有没有冲走我接的菌种.
是不是我浸的油太多了啊?可不浸多我又怕滤纸不能完全浸透.
你用的擦镜纸有没有这样啊?还有你培养了多久才长出菌来的?
还有你用一般的葡萄糖平板筛出的菌产表面活性剂吗?要是也可以的话,就不用用血或是油平板了,那样到时先用排油圈法筛一下,然后直接测一下表面张力不就可以了.

作者: huali 时间: 2016-4-9 12:46 标题: 【回复】

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6楼

加入的原油是不会凝的,不管你加多或加少,它都会流动,最好是培养基中不加原油,只用滤纸(滤纸一定要很薄的那种,如果没有的话,我也介意你用擦镜纸,)浸满原油就可以了,千万不能多,一多就会流动,而且平板一定要轻拿轻放,大概培养三到四天就可以看到菌,到六七天的时候就很明显了,不过菌落的形态不是普通平板上的那种,主要有两种情况,一种是形状不规则的连续的成片状的菌浇,另一种是分散的成点状分布的小菌落,然后就把这些菌划到普通平板筛单菌.
用一般的平板筛出的菌也有产表面活性剂的,这就跟你的取样有很大的关系,不能一概而论,我用的油平板筛出的菌都产表面活性剂,而且效果都不错,

作者: 跳跳哈里 时间: 2016-4-9 12:46 标题: 【回复】

我的油平板在35度下,三天就长出菌来了,我又培养了几天可没什么大的变化,并没有再长大.有的是连成片状的,有的分散成点状分布的小菌落.菌落很小啊!而且也看不到噬油斑,你的能看到吗?我是把富集培养液划线到油平板上的,后来我觉得涂布可能会更好些.
我的菌从外表上直观的看上去好象都是细菌.可我的富集培养液有两种,一种是富集细菌的,一种是富集霉菌和酵母菌的,富集培养液的配方主要是参照了"潘冰峰的生物表面活性剂的产生菌的筛选"的文章.不知为什么我总是筛不到霉菌和酵母菌?
现在没有噬油斑,那是不是就没有什么意义了?
或者既然这种菌能在以原油为碳源的培养基中生长,那就说明它能产表面活性剂呢?即使没有噬油斑也有用呢?
可我的原油培养基中原油不是唯一的碳源,酵母膏虽然含了很少的碳,可你就不能说原油是唯一的碳源了.
这些想法很矛盾,希望你能给我解答一下.

作者: dadaai 时间: 2016-4-9 12:47 标题: 【回复】

我油平板上长的菌和你描述的基本一致,也没看到噬油斑,其实我也不知道什么是噬油斑,我的富集培养液就是富集细菌的,没做霉菌和酵母的,油平板长出的菌还是很有研究价值的,我把油平板长的菌再划线划到普通平板上分离出单菌落后,进行发酵,然后测定了发酵液的表面活性,都不错,说明还是产了一定量的生物表面活性剂的,
一般认为细菌利用石油烃类作为碳源的话,那它应该是会产表面活性剂的,只不过有两种情型,一种是偶联在细胞壁上,另一种就是分泌到胞外,
如果你觉得酵母膏可能做为碳源的话,那你就不加酵母膏试试,应该也会长菌的,

作者: xgy412 时间: 2016-4-9 12:47 标题: 【回复】

不知你筛的菌的种类多不多?我目前只发现了两个种类,不过只是直观的从菌的外表上看过去,好象都是细菌.

作者: daomei 时间: 2016-4-9 12:48 标题: 【回复】

我的也不多,好像就三种类型的,有铜绿假单胞菌

作者: xiaoxiaojinglin 时间: 2016-4-9 12:48 标题: 【回复】

你的铜绿假单胞菌在斜面试管上培养是会产生色素吗?我筛到的一种菌,不知是什么菌,它会产紫色的色素,摇瓶发酵的时候,我的发酵培养基都会变成浅绿色.
你的铜绿假单胞菌有什么特点?

作者: xgy412 时间: 2016-4-9 12:48 标题: 【回复】

我的也产色素,而且很多,我的在斜面上是蓝色的,种子液是浅绿色的,发发酵的时候就不产色素了,产不产色素跟培养基有很大关系,

作者: mimima 时间: 2016-4-9 12:49 标题: 【回复】

不知道你是否做过有关亚Fe离子影响的，我遇到点问题，就是调节PH值，用磷酸盐缓冲液调节效果总是不理想，你遇到过这种问题没有

作者: wawa11 时间: 2016-4-9 12:49 标题: 【回复】

有亚Fe离子存在的话,就不产色素了,而且我的色素在酸性条件下会变成砖红色,

作者: 兔子 时间: 2016-4-9 12:50 标题: 【回复】

我测BS活性,是用9CM的培养皿,加40ML水,3ML液体石蜡,2ML发酵液.
我加了 3ML液体石蜡后,它在培养皿里形成了一个直径为4CM左右的油圈,当我滴家发酵液的时候,这个油圈的直径有的会变大,有的没有什么变化;有的增加到5CM左右,6CM,7CM,9CM左右.
不知道这样测准不准确,你的排油圈是这样的吗?
我是在发酵了5天后测的,我认为发酵培养4-5天是微生物的代谢产物积累最多的时候,你有过这方面的研究吗?发酵几天是最好的测BS的时候?

作者: daomei 时间: 2016-4-9 12:50 标题: 【回复】

顺便再问一下,你的排油圈直径的大小是怎么测的,是用尺子吗?要是那样的话很不准确啊!而且油和水的边界也看的不是很清楚.有没有简单又准确的方法啊!

作者: 灵魂 时间: 2016-4-9 12:50 标题: 【回复】

我参考了相关的文献,他们都加了0.2ML左右的液蜡,发酵液的量没有很明确的量,最后的排油圈大于3CM的就认为有用.如果是这样的话,那我加了比他们多很多量的液蜡和发酵液才产生了和他们一样的排油圈,是不是说明我的发酵液的表面活性不高啊?

可我的液蜡和发酵液的比值和他们的又是一样的,比如你加了0.03ML的液蜡,0.02ML的发酵液,液蜡和发酵液的比是3:2,(而我的也是3:2)产生和我的差不多的排油圈.
我也试了一下你加的量,刚开始没什么变化,过了一会油圈突然就破了,并且形成了好几个圈,或者是好久都没有反映,当我轻轻的一摇,也形成了好几个圈,我还没来的急看排油圈呢.不知道这是什么原因.

现在我不知道该如何定液体石蜡和发酵液的量,怎么才能让它产生>3CM的排油圈.
还有,当你加了液蜡的时候也会形成一个排油圈吧,它的直径是多少呢?你的0--6CM的排油圈是包括了它吧,还是你就把液蜡形成的圈视为一点呢?

作者: dadaai 时间: 2016-4-9 12:51 标题: 【回复】

你做的亚铁离子实验没有关于加NaOH调中性的情况吗？你有没有涉及到加缓冲溶液的情况？

作者: daomei 时间: 2016-4-9 12:51 标题: 【回复】

我现在做排油圈，结果不理想，排油圈只偶尔出现，而且形装不规则，直径很难测。我用的是60ml水+8ml液蜡+1ml菌液，参考文献上的方法。

作者: efp 时间: 2016-4-9 12:51 标题: 【回复】

你的排油圈是什么样?你加了8ML的液蜡后就会有一个油圈吧,它的直径有多少?当你加了菌液后,那个油圈的直径会增大.你的是这样吗?
如果按你的量8ml液蜡+1ml菌液,你筛选的时候,油圈要多大,才符合你的要求?

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