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标题: 【求助】合成多肽免疫动物，多肽难溶，欲加DMSO等溶解... [打印本页]

作者: 66小飞侠 时间: 2016-4-11 22:18 标题: 【求助】合成多肽免疫动物，多肽难溶，欲加DMSO等溶解...

如题所述，怎么办？:(

作者: jingling845 时间: 2016-4-11 22:18

1 溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的，其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性。
（备注:在多肽溶解之前，建议您先用少量肽来试验最适溶解方法，只有当多肽完全溶解后，才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度）
2. 一般情况下，多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中。如果这个肽是不溶于水的，且其是酸性的，加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反，对于碱性的肽，温和的酸如0.1%的醋酸或TFA（三氟乙酸）能够帮助多肽溶解。
3. 在一些情况下，某些肽具有很高的疏水性时，不易溶解，可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解，这时推荐将多肽溶解于高浓度，然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合，所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释。当您遇到这种情况时，请您注意以下几点说明：
（1）DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解，这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。
（2）这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰，请您在溶解考虑到这个问题。
（3）虽然DMSO有毒，但是适量浓度应该对实验结果影响不大，但最好预实验证实一下合适的溶解浓度，而且必须设置相应的溶剂对照组
4.对于一些在弱酸、弱碱及有机溶剂中均不能很好溶解的多肽，您可以尝试超声波处理，超声有助于打碎颗粒增加肽在水中的溶解度。但在使用超声处理请注意: 超声会引起溶液发热从而造成多肽降解，所以您必须在冰上操作！

作者: jingling845 时间: 2016-4-11 22:19

1 溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的，其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性。
（备注:在多肽溶解之前，建议您先用少量肽来试验最适溶解方法，只有当多肽完全溶解后，才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度）
2. 一般情况下，多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中。如果这个肽是不溶于水的，且其是酸性的，加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反，对于碱性的肽，温和的酸如0.1%的醋酸或TFA（三氟乙酸）能够帮助多肽溶解。
3. 在一些情况下，某些肽具有很高的疏水性时，不易溶解，可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解，这时推荐将多肽溶解于高浓度，然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合，所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释。当您遇到这种情况时，请您注意以下几点说明：
（1）DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解，这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。
（2）这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰，请您在溶解考虑到这个问题。
（3）虽然DMSO有毒，但是适量浓度应该对实验结果影响不大，但最好预实验证实一下合适的溶解浓度，而且必须设置相应的溶剂对照组
4.对于一些在弱酸、弱碱及有机溶剂中均不能很好溶解的多肽，您可以尝试超声波处理，超声有助于打碎颗粒增加肽在水中的溶解度。但在使用超声处理请注意: 超声会引起溶液发热从而造成多肽降解，所以您必须在冰上操作！

作者: 66小飞侠 时间: 2016-4-11 22:19

多谢多谢，真是很复杂。这些多肽是（12肽）是根据筛选噬菌体肽库获得的表位合成的，所以不知其酸碱性，多肽从DNASTAR等软件能预测吗？

作者: jingling845 时间: 2016-4-11 22:21

QUOTE:

原帖由 66小飞侠 于 2016-4-11 22:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
多谢多谢，真是很复杂。这些多肽是（12肽）是根据筛选噬菌体肽库获得的表位合成的，所以不知其酸碱性，多肽从DNASTAR等软件能预测吗？

可在线预测，详见
cuturl('http://www.expasy.org/tools/')

作者: 66小飞侠 时间: 2016-4-11 22:21

我预测了一下，大部分的肽是酸性的，用PBS或者PBS+超声可以溶解（不过还是呈现细小混悬状态，勉强可以分装）。用水基本都不溶解。现在就是不知道DMSO对免疫动物是否有影响（因为有的样本先用DMSO也没有完全溶解）？

作者: 11_hjx 时间: 2016-4-11 22:21

低浓度的DMSO是不会又毒性的，但是如小舟子说的，最好设立对照组比较观察。同时也要看你的多肽是做什么试验的，如果还需要进行载体的偶联，就不用太担心DMSO的影响。

作者: shanzhapia696 时间: 2016-4-11 22:22

多肽难溶可以用弱酸弱碱调一下PH值，实在不行，用DMSO溶也没什么问题，但最好能保证DMSO的体积不超过终体积的30%。我这边做了几千个多肽，你要是能把多肽系列说出来，我就能帮你分析一下

作者: 66小飞侠 时间: 2016-4-11 22:22

多谢大家的帮助！我的多肽是公司已经和KLH偶联好的。我设立了一个含有DMSO的对照试验组，昨天免疫了小鼠，今天观察了皮毛和精神状态与其它组没有太大的区别，比较活跃。特别感谢musewuling，现在我勉强将其溶解分装并冻干了，如果在试验过程中遇到新的问题再麻烦您！

作者: 8s5g 时间: 2016-4-11 22:23

我在公司就是做多肽KLH耦联的，其实耦联好的多肽溶解不掉是很正常的，你用双蒸水溶解后的液体直接免疫动物，其实效价会很好的，因为机体对固体颗粒的免疫效果比液体的更好。相反，你用DMSO溶解的时候，会破坏KLH的空间构象，相反会降低它的免疫原性！

作者: summerxx 时间: 2016-4-11 22:23

QUOTE:

原帖由 8s5g 于 2016-4-11 22:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我在公司就是做多肽KLH耦联的，其实耦联好的多肽溶解不掉是很正常的，你用双蒸水溶解后的液体直接免疫动物，其实效价会很好的，因为机体对固体颗粒的免疫效果比液体的更好。相反，你用DMSO溶解的时候，会破坏KLH的空间构象，相 ...

请问那个公司？

作者: 8s5g 时间: 2016-4-11 22:23

Genscript corporation

作者: 11_hjx 时间: 2016-4-11 22:24

第一，建议多肽合成偶联KLH后就不要再重新冻干了，可以直接用，因为再复溶就会碰到你遇到的问题；
第二，即使溶解得不是很完全关系也不大，可能效果更好；
第三，DMSO没有影响；
第四，预测跟实际使用情况会有很大不同，意义不大。

作者: xuuuu 时间: 2016-4-11 22:24

根据多肽链就可以知道是疏水还是亲水，氨基酸都有特性的
每个氨基酸虽说都有氨基和羧基
但是其支链上海有其它基团

作者: 101010 时间: 2016-4-11 22:24

至少，DMSO对炎症反应（主要是白细胞的迁移过程）是有显著抑制作用的，尽管文献都这么使用DMSO来溶解某些试剂。按照文献使用的剂量和腹腔注射途径，我做了许多对照，才得出这个结论的。所以，一定要谨慎。

作者: gmjghh 时间: 2016-4-11 22:25

根据多肽链就可以知道是疏水还是亲水，氨基酸都有特性的
每个氨基酸虽说都有氨基和羧基
但是其支链上海有其它基团

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实际意义不大，这跟成盐性质、冻干的物理性质等等相关。

作者: WHO? 时间: 2016-4-11 22:25

学习了，但我有个问题，想请教下各位高手，用什么免疫方法，效价比较高呢？

作者: toy 时间: 2016-4-11 22:26

最近也在看相关东西，分享一下
下列方法有助于您选择合适的溶剂：
(1)判定多肽的电荷特定，设定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1；碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。计算出将电荷数。
(2)如果净电荷数 >0，多肽为碱性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上)；如果多肽还不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0，多肽为酸性，用水溶解；如果不溶解或溶解性不大，加入氨水(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。
(4)如果净电荷数=0，多肽为中性，一般需要用有机溶剂如乙腈，甲醇或异丙醇，DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的多肽。

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