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标题: 【求助】用甘油溶解，但是甘油的拉曼峰太多 [打印本页]

作者: 冰激凌 时间: 2016-4-16 17:06 标题: 【求助】用甘油溶解，但是甘油的拉曼峰太多

请教各位大侠，应该选用什么缓冲液溶解胰岛素，才能使其溶解度大，比如在10mg/ml左右，而且溶剂的拉曼谱峰比较少？
还有，刚从Sigma公司买了EGFR，目录上说用甘油溶解，但是甘油的拉曼峰太多，对本人的实验有影响，还有其他的缓冲液吗？
万分感谢！

作者: yayayu 时间: 2016-4-16 17:07 标题: 【回复】

所知的拉曼光谱是用来分析结构的，不知在这里要求拉曼光谱峰低是什么意思，楼主可以说明一下吗？

一般溶解胰岛素，如果用于培养细胞，用细胞培养液溶解即可，不加血清。不知楼主所说的EGFR是不是表皮生长因子受体，是蛋白质粉末吗？

作者: 小熊妮妮 时间: 2016-4-16 17:07 标题: 【回复】

我的目的是能让胰岛素的最终浓度达到10mg/ml以上，我尝试过用pH=2.0的醋酸溶解，确实可以溶解，但是醋酸的拉曼峰很多，而且都在关键部位，如800，1200和1600左右，这都是研究蛋白结构的关键部位，所以不行。而且，这种单酸，可能会破坏蛋白的结构。所以，我想找一种缓冲液。我知道细胞培养液可以溶解胰岛素，但是溶解的浓度很低，是吗？
EGFR是表皮生长因子受体，买来的是蛋白粉末，用10%甘油可以溶解，但甘油的拉曼谱峰非常多，这样就不能用来研究EGFR的结构了！

作者: xiaoxiaoai 时间: 2016-4-16 17:08 标题: 【回复】

拉曼光谱没有做过，不敢妄言。但相信这方面应该有文献可查吧。顺便说一下，细胞培养液溶解的可达到5mg/ml，这个浓度够用吗？可我没试过溶解成为 10mg/ml 的。

作者: wawa11 时间: 2016-4-16 17:08 标题: 【回复】

这个浓度也许可以，我现在用Hepes液溶解，浓度连1.5mg/ml都溶解不了，都不知道该怎么办？谢谢你了，我先扫一个培养液的谱，再溶解看看。那么溶解时有温度和其他条件吗？保存是否应该在4度？你所指的培养基是哪种？RPMI？

作者: danzi 时间: 2016-4-16 17:08 标题: 【回复】

没有特殊条件，常温溶解。我用的是RPMI1640，我想DMEM也可以。朝养细胞的人要一点就行了，-20度分装保存。

作者: efp 时间: 2016-4-16 17:09 标题: 【回复】

胰岛素的等电点好象是5.3吧，可溶解于稀醇，酸，碱中，在ph2-4稳定，碱性中容易破坏，所以可以在pH2溶解，加点乙醇就可以增加溶解量了。EGFR能在甘油中，那也可以在乙醇水中溶解，这样干扰是不是小点，你也可以单独改变PH试试。

作者: 灵魂 时间: 2016-4-16 17:09 标题: 【回复】

好糊涂啊我听老师说蛋白质应该用缓冲液配制，如果单酸或单碱可能会破坏蛋白的结构，我也尝试过用ph2.0的醋酸溶解，但醋酸干扰太大，老师说可能会破坏结构。我还用过0.1M 的盐酸溶过，可以溶解，但也存在着变性的问题。chromatography 又说在ph2-4稳定，到底该溶于哪个ph下。我看到sigma的目录中有用ph8.2的HEPEs液配制的，那是碱性溶液。有机溶剂对于做拉曼光谱有影响，因为它们有许多拉曼峰，会影响光谱的获得以及数据分析。
请问还有什么其它的缓冲溶液吗？

作者: rrra6 时间: 2016-4-16 17:10 标题: 【回复】

我觉得还是看看专门光谱的书吧，看一般用什么溶液，其实很多事情没有现成的法子，书上是说：胰岛素的等电点好象是5.3吧，可溶解于稀醇，酸，碱中，在ph2-4稳定，碱性中容易破坏，所以我想这个不是我随便说的，此外很多溶剂你得试试才知道，蛋白质溶解其实很难说，不同的蛋白是不一样的，我看过的书说拉曼光谱的样品一般不用特殊处理，会不会是仪器的问题。

作者: daomei 时间: 2016-4-16 17:10 标题: 【回复】

是这样的，我现在要做的是溶液状的蛋白，现在处于摸条件阶段，为了得到光谱，现在要求溶解的浓度尽量大一点，而且要求溶剂的谱峰尽量少。但是，查了很多参考文献，它们的浓度都非常低；有文献用盐酸配，得到了100mg/ml的溶液，但是我按照他们的方法，发现盐酸会让蛋白变性，所以不能用它做溶剂了。尝试用过PBS，HEPES液以及三蒸水，溶解度都很低！

作者: wawa11 时间: 2016-4-16 17:10 标题: 【回复】

仪器应该没有问题，前面有同学做过牛血清白蛋白溶液，这蛋白易溶，浓度大概在mmol/l量级，测出了信号。所以，应该不是仪器的问题。

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