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标题: 【求助】荧光光谱分析及仪器操作中遇到的问题 [打印本页]

作者: aaby 时间: 2016-4-17 11:29 标题: 【求助】荧光光谱分析及仪器操作中遇到的问题

在做化合物小分子与蛋白质的相互作用的研究，有以下问题请教高手：

1、我做了三个温度下，化合物对该蛋白质的荧光淬灭作用分析，荧光强度F0/F与化合物浓度的线性都挺好，但是计算的结果发现三个温度下的结合常数的线性非常差，只有一个9，主要是中间那个温度的结合常数值偏离很厉害，我想请问，是不是结合常数一定与温度呈线性关系？不呈线性说明一个什么机理？

2、做同步荧光光谱时，随后则药物浓度的增加，△λ=15nm的酪氨酸的在290nm处荧光峰逐渐减弱，同时在313nm处出现新的峰，并且随浓度增加而增强，这说明了什么呢？之前在做荧光淬灭时，只记录发射光谱图时并未出现新的峰，只是荧光强度随药物浓度的增加而下降。

3、在做三维图谱时，激发和发射波长起止，设置只能设成一样的，比如我设的都是是200-500nm, Em=350，Ex=282nm, Exslit=10nm, Em slit=4nm, scan speed=700, number of scans=20, Emission increment=10nm,但扫出来的三维图的坐标却不是我设置的数值，在调图软件中的设置做了波长范围的更改还是这样，可以看到我的三维图的峰像被斧劈了样的，剩了半拉了。这又是什么原因呢？

说明一下，我们买的是PE公司的仪器，实话说，这家公司的售后技术支持水平太差劲了，打电话问了几个工程师，都不知道三维荧光图怎么做，荧光偏振就更没做过了，可是我们买的仪器都带这些功能的，连他们自己都说是标配。

所以，真诚请教丁香园里的高人给予解答，本人不胜感激！

图片附件: 14068778.snap.jpg (2016-4-17 11:29, 43.42 KB) / 该附件被下载次数 18
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=43655

作者: mimima 时间: 2016-4-17 11:30 标题: 【回复】

感谢斑竹把图附上了，三维荧光图的问题已解决，现在做出来的就像第一个图一样，但是数据格式是SP3格式的，无法打开，更无法导入绘图软件，进行编辑，今天打了PE公司好几个工程师的电话，都说没办法对他们的三维图进行编辑，数据无法转换，没有任何数据那我做三维图有什么意义啊？！郁闷死了。

有买荧光分光光度计的千万别买PE的了。

作者: wwwh 时间: 2016-4-17 11:30 标题: 【回复】

好像这里做荧光光谱分析的同仁比较少啊

作者: yazi 时间: 2016-4-17 11:31 标题: 【回复】

是不是说其他公司的可以进行转换？

作者: efp 时间: 2016-4-17 11:31 标题: 【回复】

应该能的吧，如果不能的话，别人发论文里编辑好的三维图怎么来的呢？

让人很生气的是，我查到两篇文献，都是用PE的荧光分光光度计做的三维图，都是编辑好的。PE的工程师竟然还是说不知道怎么弄。

求万能的丁香园帮帮我吧，如何把我做的SP3格式的三维图做编辑。

本人万分感谢！！！

作者: 小妖精@ 时间: 2016-4-17 11:31 标题: 【回复】

不能主观猜测

最好是问问，其他厂家都是怎么弄的，由于没弄过这些个东西，不甚了解

个人觉得，工程师有能力强弱之分吧

而且文献中的三维图或许是使用其他什么专业软件做出来的，文献嘛，参考而已，不可过分依赖

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