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标题: 【分享】细菌数量的测定方法 [打印本页]

作者: malong 时间: 2016-4-21 12:18 标题: 【分享】细菌数量的测定方法

1、计数器测定法：
　　即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。
　　本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
　　2、电子计数器计数法:
　　电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
　　该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
　　3、活细胞计数法
　　常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
　　广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。　
　　4、比浊法
　　比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
　　此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
　　5、测定细胞重量法
　　此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
　　此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
　　6、测定细胞总氮量或总碳量
　　氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）
这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作：
（1）.取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
（2）.在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管
（3）.于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
　　测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。
细菌数量

作者: PP熊 时间: 2016-4-21 12:18 标题: 【回复】

我现在有个实验，要求测混悬液中颗粒的浓度，颗粒粒径范围在0.2～150um，想从两方面测定，一方面：测每毫升中含颗粒数；二方面，每毫升中含颗粒质量。请问大侠能用那些方法测定，希望能详细介绍下，菜鸟在这里谢过了。

作者: jishiben 时间: 2016-4-21 12:19 标题: 【回复】

测质量用过滤法啊，测数目在显微镜下数一数.

作者: malong 时间: 2016-4-21 12:19 标题: 【回复】

谢谢，1um以下的颗粒怎么计数了？

作者: 美人鱼 时间: 2016-4-21 12:19 标题: 【回复】

在显微镜下计数，请问是否有计数板之类的工具，能否详细介绍下？或介绍下什么资料里有这方面内容？
颗粒计数器的范围一般在1um以上，请问什么地方有1um以下的颗粒计数器？哪方面专业会有使用，谢谢！！！

作者: efp 时间: 2016-4-21 12:20 标题: 【回复】

取一定体积（如0.01ml)放在显微镜下面看看里面有多少颗粒是不是可以啊？小的颗粒可以用的大一点的物镜啊，放大不就可以说了啊。

作者: 钻石 时间: 2016-4-21 12:20 标题: 【回复】

这个我试了,理论上可以,但在1000倍时计数难度很大,准确性也不高,我还使用了image pro plus,对于1um以下的很差
再请教下测光密度是什么?谢谢哈,有什么用,原理

作者: xiaoxiaoai 时间: 2016-4-21 12:21 标题: 【回复】

这个我试了,理论上可以,但在1000倍时计数难度很大,准确性也不高,我还使用了image pro plus,对于1um以下的很差
你用的是什么显微镜啊，连在电脑上面的我觉得竖起来容易一点！

作者: 跳跳哈里 时间: 2016-4-21 12:21 标题: 【回复】

我用的是LEICA的带光源显微镜，带数码相机，1000倍用的是油镜，可以和外界隔离，防止外界干扰。用的图像分析软件是image pro plus6.0

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