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标题: 戊二醛体积少吗？ [打印本页]

作者: 青青子衿 时间: 2016-4-25 21:18 标题: 戊二醛体积少吗？

0.08g蛋白加热形成凝胶后，过夜放置第二天加5ml浓度为2.5%的戊二醛溶液固定可以吗，戊二醛体积少吗？

作者: 兜兜 时间: 2016-4-25 21:19

不少，可以，足够。楼上的方法也很正确。但是有一点，如果你的凝胶性很强的话，你又是不同处理的样品就不要成胶那么久。要不然效果一样。

作者: mr.henry 时间: 2016-4-25 21:22

我是加热形成凝胶，然后放冰箱过夜，第二天做固定的，如果形成凝胶，直接做，两种方法差别应该不大吧，凝胶能力不是很强，样之间凝胶能力差别还是很明显的

作者: 娜爷~ 时间: 2016-4-25 21:26

向你请教三个问题：第一，为何固定要采用甲醛呢？单独戊二醛固定相比，哪个更好？第二，酒精梯度脱洗，为何前几个浓度要在低温下进行？室温会有什么影响吗?第三，有机溶剂如何除去的？是否含有点丙酮和乙醇冻干影响不是很大？谢谢。

作者: 小书虫 时间: 2016-4-25 21:29

自然放置使有机溶剂挥发，如果含较多的有机试剂会对真空泵不好！回答可能让你失望了。。。

作者: outeer 时间: 2016-4-25 21:32

请问一下，乙醇和丙酮的沸点那么低，如何保证真空冷冻干燥样品的效果？有SEM图片放上来看看效果吗？

作者: 冰@舟 时间: 2016-4-25 21:35

扫描电镜样品需要充分干燥；通过乙醇梯度脱水丙酮置换样品中水分后，冷冻干燥使乙醇丙酮从样品中升华就有一定难度，因为乙醇丙酮通过冷冻干燥的方式除去是很难的，不如水分子容易，（熔沸点不同）。所以，我的意思是你上述方法的干燥效果怎样？对样品扫描电镜的结果是否有影响？一般而言，乙醇是通过临界点干燥的方法除去。不知道表达清楚了没有。

作者: XXXX111 时间: 2016-4-25 21:37

我们主要看肉肠或蛋白凝胶切片表面的微结构，你说的那个问题对切片表面微结构基本没多大影响。可能要看你的试验对象吧。乙醇和丙酮不是靠升华（固体变气体）去除的，它就在在真空冷冻环境下慢慢挥发的。

作者: 差不多先生 时间: 2016-4-25 21:40

请问，你的样品固定冻干后很硬吗？我的凝胶快处理冻干后很疏松，哪儿的问题？

作者: 孤独的渔夫 时间: 2016-4-25 21:41

冻干后的试样是比较硬。加梯度浓度的乙醇就是为了脱去样品含有的水分，如果水分含量较大的话，样品就会疏松多孔（如同冻豆腐解冻后，挤掉其中的水分后就非常疏松多孔）；固定和冷冻干燥这一两步就是固定样品形状和冻干样品，使之变硬。我的理解，不一定正确，呵呵！

作者: 孤独的渔夫 时间: 2016-4-25 21:42

乙醇直接脱水干燥的话，凝胶结构会萎缩！最好用其他有机试剂置换乙醇，好像是叔丁醇？忘记了！有条件的话用临界点干燥，这样对凝胶结构影响不大

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