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标题: 溶液刚开始很清，可是后来又出现了细微沉淀 [打印本页]

作者: 冰@舟 时间: 2016-4-27 13:14 标题: 溶液刚开始很清，可是后来又出现了细微沉淀

这两天在做还原力测定的实验，可是加入氯化铁后，总是产生沉淀，我的氯化铁是0.1%的，我也把样品稀释了，稀释到25倍时，溶液刚开始很清，可是后来又出现了细微沉淀，而且在这个条件下测定的吸光度只比空白本底的高0.015左右。大家有相关的经验和建议吗？

作者: XXXX111 时间: 2016-4-27 13:15

楼主你好，我现在也在做抗氧化。
想请问你，1，可否告诉我：1%铁氰化钾的配制方法。因为我在网上看到一句话说“除三氯化铁和样品溶液外，其余均需要加磷酸缓冲液配制”。我是直接用蒸馏水配置的，还添加了少量的盐酸（用量不确定）。
2，我的溶液在离心之前没事没有沉淀产生，离心之后也没有。在加入三氯化铁溶液后，立即变成很深很深的墨绿色溶液，测700nm吸光度都是等于4，不知道为什么会这样。请问你遇到过这样的情况吗？你又是如何解决的呢？
——急需得到您有经验的回答。谢谢了。

作者: 差不多先生 时间: 2016-4-27 13:20

1ml样液+2.5ml,0.2mol/l,PBS,PH6.6+2.5ml 1% 铁氰化钾。
混匀 50摄氏度，20min
冷却，+2.5ml 10%三氯乙酸，离心10min
上清液2.5ml+2.5ml水+0.5ml 0.1%三氯化铁
混匀
700nm,蒸馏水调零

作者: 孤独的渔夫 时间: 2016-4-27 13:24

我是这样做的：2.5ml样品液（稀释5倍、10倍、25倍）+2.5ml PBS（0.2M pH6.6）+铁氰化钾（1%），混匀50℃水浴20min，冷却，加入10%三氯乙酸2.5ml，混匀（注意：到了这里，方法里一般说要离心，但是我的东西根本没有任何沉淀或浑浊，非常清澈，所以没有离心）然后，我取了2.5ml清夜，加入2.5ml水+1ml FeCl3（0.1%），混匀，稀释5倍的马上产生肉眼可见的絮状物，稀释10倍的和25倍的刚开始没有可见的絮状物，但静置一段时间后就产生了絮状物，稀释25倍的经过涡旋后，絮状物又溶会液体中，但10倍的很难完全溶回去，这种絮状物应该就是显色的普鲁士蓝，但为什么这么不稳定呢？

作者: 敬候佳音 时间: 2016-4-27 13:27

LZ我在测定的时候也遇到了这个问题，用Vc作对照时，Vc在60mg/L时还没有沉淀，但是一过这个浓度就开始有沉淀。但是看到一篇英文的，里面Vc浓度达到了2g/L，不知道它怎么测定的。LZ你后面是怎么解决沉淀这个问题的？

作者: 倾轻地 时间: 2016-4-27 13:30

后来我重新配制了铁氰化钾，感觉不太容易沉淀。这个东西好像是现配现用效果比较好

作者: 雨儿 时间: 2016-4-27 13:34

铁氰化钾是按以前的浓度配制还是降低浓度？后来看到还原力测定的原理就是样品还原铁氰化钾，然后还原产物与Fe3+反应生成普鲁士蓝，普鲁士蓝在水里溶解度很低，样品浓度一高就会出沉淀，我后面做的时候都是降低样品浓度，无赖之举

作者: 落叶无声 时间: 2016-4-27 13:41

同样的浓度，不过现配现用，效果的确好很多，没有之前的沉淀现象，蓝色均匀透明，其他的实验条件一样。这是个人经验，我也不知道为什么会这样

作者: 我是夜猫子 时间: 2016-4-27 13:45

我现在要测黄酮的还原性，也是按照这个方法测的，、但是我不知道PBs的ph0.2mol/l,PBS,PH6.6怎么配的，能告诉我吗？？

作者: 倾尽温柔 时间: 2016-4-27 13:48

亲！这个我做过的：首先分别配制0.2mol/L的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠溶液，再将62.5mL的磷酸二氢钠和37.5mL的磷酸氢二钠混合均匀即可！

作者: 倾尽温柔 时间: 2016-4-27 13:48

我现在也在做测定还原力的实验。但测定吸光度之前出现绿色沉淀的现象很多，我准备试一下你之后的改进方法，不过还有一个问题，就是在加入三氯化铁溶液混匀之后需不需要静置一段时间然后再测吸光度？之前学姐给我们的试验方法说是要静置10min，所以我怀疑这会不会更加促使沉淀的生成？
急切希望得到回复，谢谢啦！

作者: 舞疯 时间: 2016-4-27 13:53

我看您以前做过抗氧化的实验，我最近也在做这个，但是不明白为什么不管我的浓度如何变化，测得的吸光度要么就是-0.096要么就是3，我想问问您遇到过这种情况吗？还有用水做参比，加入上述的那些试剂以后会有颜色变化吗？希望您能回复，谢谢

作者: 翔少爷 时间: 2016-4-27 13:57

我是用同样原理做得，但是我要探究的是最佳条件，原理上加大铁氰化钾或三氯化铁的用量吸光度应该是增大然后形成平台，但是不知道为什么一直做的都是加得越多吸光度越小，求解答，无比感谢

作者: 小米粒 时间: 2016-4-27 14:03 标题: 回复 #4 孤独的渔夫的帖子

我现在也在测还原力，但是的做的时候把PH 6.6的PBS缓冲液改为了蒸馏水，这个对最后吸光度的影响大吗？样品液是0.6克的猴头菇粗粉水提取液。

作者: 小米粒 时间: 2016-4-27 14:12

不知道你的问题解决没，最近我也在做铁氰化钾还原法，可否告知以VC作为标品，制作标准曲线的步骤。谢谢！

作者: 星星…… 时间: 2016-4-27 14:15

我也是同样的结果，并且颜色不发生变化，为什么用啊求解

作者: 星星…… 时间: 2016-4-27 14:15

我也在做这个原理的实验，在最后加入氯化铁后溶液事透明蓝色，但是按文献说静置10分钟，但其后就出现浑浊现象导致无法测量吸光度！怎么解决啊？

作者: kaixinjiuhao 时间: 2016-4-27 14:19

弱弱的问一句，使用铁氰化钾时有什么注意事项吗（怕有毒），之前没做过类似实验

作者: kaixinjiuhao 时间: 2016-4-27 14:19

加三氯乙酸没沉淀，但是最后时发现Vc浓度低或者高容易产生沉淀，不知道怎么解决

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