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标题: 【求助】在生物分子上附着了纳米金粒子的样品的拉曼光谱 [打印本页]

作者: 钻石 时间: 2016-4-28 10:30 标题: 【求助】在生物分子上附着了纳米金粒子的样品的拉曼光谱

生物模板上组装了金纳米粒子，审稿意见是让补测个拉曼证明一下金粒子确实是在生物模板上。于是做了拉曼。
在514nm下进行的拉曼基本上没有峰，而且基线飘移的很凶。怀疑是被荧光干扰，所以换作1064nm做了傅立叶拉曼，就是上传的这个图了。
金纳米粒子的直径在10-20nm之间。
生物分子作为对照做了个拉曼还不错，
然后做了一个在生物分子上附着了纳米金粒子的样品的拉曼光谱，峰基本上都没了，这是怎么回事啊？第一次做拉曼，请高手指教，应该怎么做呢？或者应该怎么分析呢？
图如下：（红色的是生物分子本身，黑色的是附着脸纳米金粒子的拉曼）

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作者: PP熊 时间: 2016-4-28 10:31 标题: 【回复】

拉曼光谱啊拉曼光谱 :tiger26: 让人吐血的拉曼

作者: 灵魂 时间: 2016-4-28 10:31 标题: 【回复】

请问为什么作拉曼可以证明一下金粒子确实是在生物模板上？？？

作者: xgy412 时间: 2016-4-28 10:31 标题: 【回复】

这是审稿人的意见我也没有弄太明白，如果有键合的话应该会有拉曼的变化的吧。查了很多关于拉曼的文献没有看到这么做的。但因为不是太懂也不敢贸然驳回审稿人的意见，纠结。。。。

作者: n111 时间: 2016-4-28 10:32 标题: 【回复】

如果我理解正确的话，审稿人的意见是让你采用SERS的方法来证明你的纳米粒子在生物模板上面。也就是说，吸附了纳米金粒子之后得到的Raman光谱要比你由单纯的生物模板的得到的拉曼要强。这个就是说，吸附了金纳米粒子之后的生物模板的Raman峰的强度要强于没有吸附金纳米粒子的生物模板的Raman峰。
从你的光谱里面，只是看出了Raman的counts确实增强了很多，但是没有观测到你的生物模板的信息。是不是你的激光功率太高了？要不就是你的纳米粒子太多了，以至于完全盖住了你的生物模板。另外，你有没有测量一下UV-vis？你的纳米粒子的吸收峰在多少nm？然后根据这个选择一下别的波长的激光。祝你好运！

作者: 冰激凌 时间: 2016-4-28 10:32 标题: 【回复】

谢谢回贴！！终于等到有人回复啦！那个感激涕零啊！
不过有几个问题，请您赐教：
1.SERS一般不是都需要探针分子的吗？就是一些大的有机分子。不是任何有机物都可以作为SERS的探针分子的吧？
2.测试紫外可见的吸收峰位置在530nm左右，首次做拉曼选择的激光波长为514.5nm，但是非常悲哀的没有任何信息，初步怀疑是荧光所致。图上传如下。
3.1064nm下测试的功率为0.12W，不算太大了吧，装了两次样，结果都如此。
4.还有一个问题想请教：在1064nm下重复实验，液体样品（严格来说是悬浊液）应该怎么制样呢？
再次感谢，金币将在交流结束时一并奉送！

作者: jishiben 时间: 2016-4-28 10:33 标题: 【回复】

不好意思，上面那个挂了，下面这是在514.5nm下进行的拉曼测试图

作者: 双子座 时间: 2016-4-28 10:33 标题: 【回复】

不过有几个问题，请您赐教：
1.SERS一般不是都需要探针分子的吗？就是一些大的有机分子。不是任何有机物都可以作为SERS的探针分子的吧？
你说得对，是需要探针分子，但是我个人认为，那是为了证明SERS的存在。比如说可以增强多少倍。使用很灵敏的探针分子，很稀的浓度。我觉得你的生物分子也可以作为探针分子，只不过就是增强倍数的问题。
2.测试紫外可见的吸收峰位置在530nm左右，首次做拉曼选择的激光波长为514.5nm，但是非常悲哀的没有任何信息，初步怀疑是荧光所致。图上传如下。
看见了，是荧光很强。
3.1064nm下测试的功率为0.12W，不算太大了吧，装了两次样，结果都如此。
这个已经不小了。通常用的是几个mW，你这都已经120mW了。样品估计被烧焦了！不过我不清楚这个波长的激光是不是很大，没有使用过。我使用514和635的激光的时候，都是几个mW，有的时候是0点几个mW。
4.还有一个问题想请教：在1064nm下重复实验，液体样品（严格来说是悬浊液）应该怎么制样呢？
直接测量应该就可以吧，找一个玻璃管装完液体之后封闭，直接测量就行了。或者不用那么麻烦，把溶液装载烧杯或者表面皿里面，使用10x的镜头，不要让镜头接触到液面。

作者: jishiben 时间: 2016-4-28 10:33 标题: 【回复】

就楼主的问题来看，由于生物分子紫外吸收在530左右，所以荧光太强，看不见峰。但改成1064也有问题，就是1064激发光的能量太弱，再加上又无法共聚焦，同样也会测不出分子，这一点不奇怪。如果你能用1064测出生物分子，那基本上785也没问题，那你的文章就不会投这个期刊，就不会有这个审稿人了。因为要证明这个不必非得做SERS,除非你的题目就就是这方面的。
另外，为什么不做633呢，正常金都是做633的。但是象楼上所讲，光的能量不能太强，对于生物分子而言，到达样品的能量也就是100微瓦左右，否则会把样品烧掉的，就像你那上面那么大的碳化包。

作者: wwwh 时间: 2016-4-28 10:34 标题: 【回复】

回复楼上，0.12W在1064中几乎是最小的了，这个能量倒不是太大，因为它没有共聚焦。但需要积分的次数和时间很长，所以容易烧焦样品。
对于浑浊液体，如果短时间内不会沉积，你可以把样品仓里的样品杆卸了，然后用一块泡沫挖个洞，把比色皿放在里面，光滑的一面朝外，然后移动泡沫手动对焦。白光下头伸进去，看那几个光点什么位置聚在一起就是最佳位置。不知可否，楼主可以试一次，共同学习。

作者: yayayu 时间: 2016-4-28 10:34 标题: 【回复】

学习了关于1064的激光的知识了！

作者: 双子座 时间: 2016-4-28 10:35 标题: 【回复】

785也没问题？是785nm的激发波长？
然后文章投什么期刊和审稿人是怎么回事呢？额云里雾里。。。望明示。

要证明金粒子和生物模板co-location,有什么方法吗？审稿人的意见是这样的：“The claim that the "nanowires" are nucleated by the*** is
not supported by the data. If the *** is a scaffold, the authors need to
demonstrate co-location (perhaps by Raman spectroscopy) of the gold and the ***. ” 望前辈明示 :tuzi28:

作者: malong 时间: 2016-4-28 10:35 标题: 【回复】

我的意思其实是这样的，如果1064能够很简单用金基底测出生物分子，那么激发能量更大一点的785当然更能测出，而由于785 可以有便携式的拉曼仪，又有现成的金基底卖，那么你这篇文章可谓意义非凡，因为为在线检测提供了依据。文章的档次当然不是这个，虽然我不知道你现在投的是什么，仅此而已。只是想告诉你1064情况下测出生物分子没那么容易，如果你测不出来也不必灰心而已。我以为审稿人要求你一定要做拉曼才这么说。但从审稿人的意见来看他只是要求你证明生物分子和金连在一起，并没有一定要做拉曼，只是他举的个证明这种情况的例子。但看样子审稿人可能比较懂拉曼，不会单纯搞生物的，为了迎合他，还是来个拉曼吧。1064可能不靠谱，来633吧。
楼主也许不是专门做拉曼的，可能不会知道要用拉曼测生物分子还是有一定难度的。

作者: xiaoxiaojinglin 时间: 2016-4-28 10:36 标题: 【回复】

633的没有这个波长，只有514和785的两个激发波长。785的可以吗？
审稿人的意见是让作出什么呢？理想的效果是什么样子的呢？除了生物分子的峰还应该有什么其他的峰出现呢？不会分析啊。。。。。。
焦急郁闷中，tian0429可否加为QQ，方便直接交流。我的Q号：594087030

作者: danzi 时间: 2016-4-28 10:36 标题: 【回复】

原则上可以，但最好是633，785没有共振，估计测得不好，但可以试试. 这是因为金的表面等离子体振动可以和633的激发光产生共振，这样才能产生最大的电磁场增强，从而使吸附于其上的分子拉曼信号得到增强，并且相对于本体信号有一定的吸收峰位置或强度的变化或新吸收峰的出现。而这些现象只有当分子化学或物理吸附于金属表面时才会出现，（主要是金或银，当然也可以是过渡金属。但只有金或银最好。但对于生物分子，由于银会影响其活性，故一般选金）。所以审稿人要求你测增强拉曼来证明分子和金属是连接上了，因为这是一个比较直接的方法。如果你的生物分子够大，我觉得AFM应该也行吧，只要和本体不同，并且本体上有的峰在你的增强光谱上都有，再来点新的峰，或来点峰增强就差不多了。至于归属就得找文献，如果你的没人做过，就有点麻烦了。

作者: malong 时间: 2016-4-28 10:36 标题: 【回复】

在785下进行了测试，没有新增的峰，米有峰位移，峰比较宽，是一个一个的小鼓包，强度有增强但也不大。请问这样可以说明问题吗？是不是我做出来的数据不对啊？:cry::cry::cry:不会分析啊

作者: efp 时间: 2016-4-28 10:37 标题: 【回复】

中间最高的是金的包，不是你的分子。但在最高的包上驼着的可能是你分子的包，但由于你的分子和金颗粒结合的不是很牢，或是分子并没有固定在基底上，哪怕是物理吸附，或你的分子浓度很稀，导致光斑检测范围内可探测的分子数较少，所以显出了你基底的峰。如果你非得785下测，建议你可以尝试一下三明治结构，也许信号会好一点，就是不知道你的分子能否两端连接纳米粒子。

作者: malong 时间: 2016-4-28 10:38 标题: 【回复】

额是吗？我是把溶液滴在载玻片上，然后盖在盖玻片上，进行测试的，不太容易聚焦。没有测试粉末的样品。。。。。

作者: 哈密瓜 时间: 2016-4-28 10:38 标题: 【回复】

猜想一下，生物模板上要组装金纳米粒子，应该要有生物分子连接。
要看金是否组装在模板上，金上还是要有标记分子才行
是不是能这样，1.不加连接的生物分子，模板上组装带有标记分子的金，冲洗一下，测拉曼，应该是没有标记分子的信号，或很弱
2.加入连接的生物分子，模板上组装带有标记分子的金，冲洗一下，测拉曼，应该是有很强的标记分子的峰
由此说明生物模板上已经组装上金了

作者: 大花猫bb 时间: 2016-4-28 10:39 标题: 【回复】

这样的实验已经有人做过了，还就这个SERS发了一篇文章。就这个问题我可以不可以引用文献而不用自己做实验呢？
没有看明白审稿人的意见，回复的时候可以不可以咨询呢？这个回复意见怎么说呢。反正现在实验结果不好，不准备用。

作者: xgy412 时间: 2016-4-28 10:40 标题: 【回复】

金纳米颗粒的spr峰在530左右，宽度比较大，越接近峰位其sers效果越好
但是你的样品有很大的荧光，那么需要避开荧光，所以要选择能避开荧光
sers效果还比较好的激发波长。另外，样品对激发波长是有选择的，有些
波长很难激发拉曼谱。

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