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【求助】做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度
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作者:
美人鱼
时间:
2016-4-28 11:26
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【求助】做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度
最近在做western blot 的实验,做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度,但是怎么能够知道目的蛋白的质量啊?用什么方法进行测定?谢谢各位大侠了!!
作者:
yayayu
时间:
2016-4-28 11:26
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【回复】
什么叫做:“做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度”?不是先进行蛋白定量再做western blot吗?我们是这么做的,保证每个lane上样的蛋白量一致。至于怎么定量,用BSA作为标准品,先做个标准曲线呀。你买的BCA试剂盒里面应该有标准曲线的做法吧
作者:
daomei
时间:
2016-4-28 11:26
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【回复】
正常情况下是应该先做BCA ,再做WB,但是这次有点小状况就先做了WB,加样的体积是一样的,但是现在就是不知道量是多少,用法BCA法只能知道总蛋白质的量,我现在想知道的是怎么求某一蛋白质的量,例如我的目的蛋白的量。谢谢!!
作者:
n111
时间:
2016-4-28 11:27
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【回复】
用BSA不同浓度梯度做一个标准曲线,在用你的目的蛋白所测的值看在曲线中对应的浓度。BCA试剂盒里有具体的说明呢。
作者:
huali
时间:
2016-4-28 11:27
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【回复】
你的蛋白在总蛋白中的含量?通过凝胶成像软件的光密度分析去算一下吧
作者:
zouyou
时间:
2016-4-28 11:28
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【回复】
那就再用同一张膜做个内参,都进行灰度扫描后,用目的条带的灰度值除上内参的灰度值的比值,进行各组比较,WB不就是相对定量吗。以后再补个好结果。
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