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标题: 【求助】帮我解答一下荧光测试时倍频峰是怎么产生的 [打印本页]

作者: 燕子@ 时间: 2016-4-30 10:19 标题: 【求助】帮我解答一下荧光测试时倍频峰是怎么产生的

大家好！哪位大牛能帮我解答一下荧光测试时倍频峰是怎么产生的？能提供一些资料更好！定重谢！

作者: 双子座 时间: 2016-4-30 10:20 标题: 【回复】

应该是光栅衍射造成的。。。

作者: PP熊 时间: 2016-4-30 10:20 标题: 【回复】

那测荧光时一定会出现倍频峰吗

作者: jishiben 时间: 2016-4-30 10:20 标题: 【回复】

有这种现象，倍频，而被频，1.5倍频的都会出现，期待高手指教！

作者: zouyou 时间: 2016-4-30 10:21 标题: 【回复】

倍频应该是激发光的倍频，不会出现1.5倍的倍频。如果300激发，你的测量范围从320-580估计都可以

作者: jishiben 时间: 2016-4-30 10:21 标题: 【回复】

加滤光片后倍频峰就不会出现了

作者: dadaai 时间: 2016-4-30 10:21 标题: 【回复】

那滤光片是怎么用的，加在哪个地方，所起的作用是滤去哪些光的？

作者: 哈密瓜 时间: 2016-4-30 10:22 标题: 【回复】

加在样品到DETECTOR之间的光路中.
另外避免半频峰(不是倍频, 而是倍波长)的方法还有像上面虫友所说的, 取
lambda + 20 nm --> 2 lambda - 20 nm 这一段. lambda即你所使用的激发波长.

作者: 钻石 时间: 2016-4-30 10:22 标题: 【回复】

那为什么我做激发谱的时候，
图谱上监测波长的1/2处出现很强的峰？

作者: malong 时间: 2016-4-30 10:23 标题: 【回复】

就放在荧光测试，样品的旁边的位置的，
夹在那里的。

作者: QQ爱 时间: 2016-4-30 10:23 标题: 【回复】

谢谢你的指教，你说的半频峰所指就是激发波长的整数倍喽？另外你知道倍频峰是怎么产生的吗，谢谢！

作者: 兔子 时间: 2016-4-30 10:23 标题: 【回复】

如果你说的是激发谱中的倍频峰,
那正好是发射谱产生半频峰的逆过程.
这些都是光栅本身引起的系统峰.
之所以在发射光谱中不会见到倍频峰, 是因为
我们总是从大于激发波长的位置开始记录的.
同样, 在激发光谱中不会见到半频峰, 是因为
我们总是只记录到小于发射波长的位置.

作者: 妮子@ 时间: 2016-4-30 10:24 标题: 【回复】

)（1）选择滤光片，应该从自己的样品入手，了解的越多，选择起来就更有针对性。（2）滤波片由长通滤波片，短通（低通）滤波片，带通滤波片。因为荧光的波长比激发光长，所以用长通滤波片，使荧光透过，激发光不透过避免干扰
（3）滤光片是塑料或玻璃片再加入特种染料做成的，红色滤光片只能让红光通过，如此类推。玻璃片的折射率原本与空气差不多，所有色光都可以通过，所以是透明的，但是染了染料后，分子结构变化，折射率也发生变化，对某些色光的通过就有变化了。比如一束白光通过蓝色滤光片，射出的是一束蓝光，而绿光、红光极少，大多数被滤光片吸收了。
滤光片的作用很大。广泛用于摄影界。一些摄影大师拍摄的风景画，为什么主景总是那么突出，是怎样做到的？这就用到了滤光片。比如你想用想起拍一朵黄花，背景是蓝天、绿叶，如果按照平常拍，就不能突出“黄花”这个主题，因为黄花的形象不够突出。但是，如果在镜头前放一个黄色滤光片，阻挡一部分绿叶发出的绿光、蓝天发出的蓝光，而让黄花发出的黄光大量通过，这样，黄花就显得十分明显了，突出了“黄花”这个主题。
（4）有时候溶剂的影响还是蛮大的。如果出现的倍频峰超出你要的波长范围内，你直接就截取那段的波长段，也是不影响的。

作者: daomei 时间: 2016-4-30 10:24 标题: 【回复】

你是说，激发光谱和发射光谱中的倍频峰都是光栅本身引起的吗？

作者: qinqinai 时间: 2016-4-30 10:24 标题: 【回复】

比如我最近做了几个荧光测试，我用540nm的激发波长，在820nm左右有荧光峰，但是，我用三种不同的材料用同样的激发波长，其荧光发射波长基本相同，那是什么原因呢？

作者: hcy517 时间: 2016-4-30 10:25 标题: 【回复】

是的, 就是这个意思.
你可以用一个空白样(比如说DI H2O)验证一下.

作者: PP熊 时间: 2016-4-30 10:25 标题: 【回复】

这个有点儿像1.5 lambda的峰, 我以前在测薄膜荧光时遇到过(看下面示意图).
当激发光和发射过在样品的同一面时(左边上下两图), 就会出现1.5 lambda的峰; 而当激发光和发射过在样品的不同面时(右边上下两图)则没有. 估计可能是发射的激发光(左有进入监测器, 右则没有)和发射光发生干涉之类的作用所导致.

作者: malong 时间: 2016-4-30 10:26 标题: 【回复】

谢谢你的讲解，现在明白了很多，估计也正如你所说的一样，不然不可能三种不同的材料用同样的激发波长时其发射波长会一样。因为我所测的是固体，就放在一个圆形的样品池中，其光路图应该就是在同侧的，如果说测液体的话应该是在异侧的

作者: yayayu 时间: 2016-4-30 10:26 标题: 【回复】

那是用滤光片可以滤掉1.5倍频吗？

作者: 钻石 时间: 2016-4-30 10:26 标题: 【回复】

还是想问一下，不光是rayleigh散射的倍频峰，还有拉曼峰，一般出现在激发波长之后，想去除，测试激发约为250nm，滤光片应该用哪种呢？
另外测试激发谱时，在短波长一侧，因为氙灯最短波长只到220，在220后20-30附近会出现一个弯折，不知道是什么原因造成的

作者: p1900 时间: 2016-4-30 10:27 标题: 【回复】

你可以加滤光片试一下，应该能解决问题

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