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标题: 【求助】扫描电镜做植物样本 [打印本页]

作者: 无怨无悔 时间: 2016-4-30 14:52 标题: 【求助】扫描电镜做植物样本

扫描电镜做植物样本，根的生长区（很嫩）和嫩芽，每次都打坏样品。15KV的。请问如何能看到没有变形的照片，谢谢！

作者: 今生如此 时间: 2016-4-30 14:52 标题: 【回复】

电压降低一点应该会好一些吧，植物样品一般都很容易受到辐照损伤的。

作者: 钻石 时间: 2016-4-30 14:53 标题: 【回复】

能说得具体一点吧，比如说，用的是什么设备，工作条件是什么样的，辐照损伤到什么程度，观察的倍数之类的。
我用25KV做花瓣也没什损伤，所以很奇怪，不过电压稍微低一点表面会体现得更好一些。
给你两个照片，权作参考。

作者: 8899 时间: 2016-4-30 14:53 标题: 【回复】

样品是怎么处理的呢，用的是钨灯丝的电镜吧，好象真空度比较低。

作者: huali 时间: 2016-4-30 14:53 标题: 【回复】

曾经做过一次，按照下面的步骤做的，但是效果不好，细菌拍下来不立体。
将菌液以3000r /min转速离心10min后，弃上清液。注入 2.5%戊二醛，静置2h以上固定。固定后离心，将细菌沉积，弃上清，以蒸馏水重悬浮，重复3次，最后以蒸馏水重悬。分别用30%、50 %、70 %、80%、90%梯度浓度酒精脱水，每个梯度中静置 10min，脱水完毕，用纯酒精脱水 3次，每次30min，然后用纯叔丁醇置换酒精3次, 每次30min，最后吸取混匀的细菌-叔丁醇悬浮液滴在覆有盖玻片的样品台上，置冷冻干燥机内真空干燥。

作者: 燕子@ 时间: 2016-4-30 14:54 标题: 【回复】

有一些不明白的地方是：酒精梯度干燥的时候，静置10分钟后，是不是需要离心，然后弃上清，再加下一个梯度的酒精干燥？这个地方一直想不通，如果不离心的话，酒精中的水分不是一直都无法散去吗？

作者: 8899 时间: 2016-4-30 14:54 标题: 【回复】

补充一下：PBS也是保护细胞形态的，原理你应该懂得。

作者: 兔子 时间: 2016-4-30 14:55 标题: 【回复】

我的细菌样品如果处理好，4天后才能拍电镜的照片，会不会影响结果？如果不影响，我是放在-80℃里保存4天呢，还是放在-20℃呢？谢谢啦

作者: 跳跳哈里 时间: 2016-4-30 14:55 标题: 【回复】

处理好了就是冷冻干燥了，这才叫处理好。如果还没条件冷冻干燥那就可以现在-80放着，要冷冻干燥了再拿去干燥。如果你是冷冻干燥后，要保存，只能放在有干燥剂的地方，如果你这个也不知道就没法指导了。好像你很多都不知道啊？说得也不清不楚，我往往要两头解释。

作者: 哈密瓜 时间: 2016-4-30 14:55 标题: 【回复】

冷冻干燥的目的一是出去结合水，使电镜时不会被干扰。还有就是为了形态稳定，毕竟在处理过程中有了固定化的步骤。你还是好好理解下各个步骤的原理吧

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