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标题: 【转载】【求助】原子荧光测硒，应该注意些什么问题 [打印本页]

作者: 风往尘香 时间: 2016-4-30 18:15 标题: 【转载】【求助】原子荧光测硒，应该注意些什么问题

最近我们领导要求我们开发测硒的方法，我用的仪器是北京科创海光的AFS-2202E双道原子荧光光度计，测饲料中的硒，由于以前没有做过，就拿国标方法对着做，但是出现了好多问题，现在想问大家几个问题：1、用湿法消解样品，称样量为2克，加入20mL硝酸：高氯酸=4:1混酸，在电热板上加热消解，但是听说不能加太高温度，我一般设210度（相当于消解液是165度左右），这样的温度消解，是否可行？大家一般用什么酸进行消解，消解温度是多少（实际的消解液温度）2、消解到2ml,冷却后再加入2.5ml浓盐酸，再消解到2ml,冷却后，加入2ml10%铁氰化钾溶液，加入8ml盐酸，用水定容到50ml容量瓶中。发现加入铁......

作者: jiushi 时间: 2016-4-30 18:16

我用土壤做的，用的是硝酸高氯酸，没加铁氰化钾

这个元素很少做，还没掌握好度，成功率不是很高

前几天用砷消解后的样品顺带试了下，结果高了近10倍，不知道什么原因

作者: adg 时间: 2016-4-30 18:16

标准物质不好替代的，不同土壤的成分不一样，消解难度也不一而足

作者: adg 时间: 2016-4-30 18:17

今天我做了两个标准物质样品，一个是灌木枝叶（GBW07603),一个是紫菜（GBW10021),分别做了加铁氰化钾和不加铁氰化钾的结果比对，所测得结果都在标准值规定范围，加铁氰化钾的标线线性较好r=0.9999，样品的相对标准偏差小，稳定性较好，不加铁氰化钾的标线r=0.9995,标准偏差先对大点。我今天加了铁氰化钾的样品发现放置时间对测定结果有影响，静置1小时测得结果在标准值范围，静置2.5小时测得结果是标准值的3倍。

作者: ass 时间: 2016-4-30 18:17

是啊，的确是，但是都买不到和所测样品基质相同或相似的样品，那只能用别的标准物质做了，至少能证明消解过程没有受到污染或损失，标准曲线做得是可以的，还有人员操作是正确的。

作者: happydream 时间: 2016-4-30 18:18

那还是别加了，线性9995和9999，测得的数据几乎没啥区别的

我做汞从来没加过重铬酸钾，一加荧光值就马上上去，偏差会很大

作者: iop 时间: 2016-4-30 18:19

你加还原剂的浓度是多少啊？我分别有1%硼氢化钾和2%硼氢化钾试过，测定标准物质一个是灌木枝叶（GBW07603),一个是紫菜（GBW10021测得结果都在标准值规定范围，有2%的硼氢化钾的荧光强度是1%硼氢化钾的荧光强度的1.5倍，所以现在我是用2%的硼氢化钾。

作者: jiankufanhan 时间: 2016-4-30 18:20

原先我是按照国标做的，国标中的方法就是用1%硼氢化钾，后来我看到资料有用2%的，我就试试看了，忙活了两天，就做了加不加铁氰化钾、硼氢化钾浓度的变化这两项，还没有来得及做方法精密度和加标回收的实验，下周再做了。好像您也是用的海光的仪器，你的是AFS-9700吗？我用的是AFS-2202E，还要优化一下仪器条件。

作者: vbnm 时间: 2016-4-30 18:20

用2%的硼氢化钠就可以做出来。

我们做的样品硒含量比较高，一般用10—50ppb的曲线。样品稀释的倍数比较多，因此没有加铁氰化钾。它的主要作用是抗干扰，一般来说，如果饲料中的硒含量比较高，多稀释一点后是不用加的，如果稀释倍数不多还是加一点好。

做硒的关键点在于样品中硒的还原，用原子荧光做，只能是4价的硒产生氢化物，因此，需要用盐酸还原。我们一般的做法是在消化完成后，向消化液中加入5ml 6mol/l的盐酸，然后加热至冒白烟，但不能干。

然后最后检测时盐酸的浓度，一般在25——30%之间，这个你可以按照国标中的算算看。国标的酸浓度也在这个范围内。

如果你需要提供控制样，我们可以为你提供1000——3000ppm范围的控制样。

作者: nmn 时间: 2016-4-30 18:21

硒很少做，只做过3,4次。而且没做过标准物质

印象最深的一次是做奶粉中的硒，检出的量在奶粉罐标示的范围中间，而且加标回收也不错。当时铁氰化钾没加。标曲1,2,4,8,10，线性也不错，反正就是做得比较顺利。

个人觉得关键点，是硒的还原，硝酸要多赶掉，赶酸后面要加盐酸煮一会。上机时盐酸浓度30%左右。保险起见，标准曲线配制时，加浓盐酸后我还几十度加热了一下。

作者: 艰苦奋斗 时间: 2016-4-30 18:21

做硒最重要的就是消解，控制好温度和酸度就OK了

作者: 风往尘香 时间: 2016-4-30 18:21

为什么放置时间长会偏高呢

作者: jiushi 时间: 2016-4-30 18:22

后来我重新做了一遍，用加了铁氰化钾的样品测试，硼氢化钾的浓度分别是1%和2%，发现用1%硼氢化钾还原剂，放置时间的长短对测试结果没有影响，但是用2%硼氢化钾做还原剂，放置时间对测试结果有影响（静置1小时测得结果在标准值范围，静置2.5小时测得结果是标准值的3倍），所以以后测试硒，如果加铁氰化钾的话，选择硼氢化钾的浓度为1%就可以了

作者: adg 时间: 2016-4-30 18:22

请专家帮忙指点一下，我是这样做的：

1、样品前处理：称取2克样品，放到100锥形瓶中，加入20ml混酸（硝酸：高氯酸=4:1），静置过夜，加盖弯颈小漏洞，在电热板上逐步加热消解，最后保持电热板温度为245摄氏度（样品消化液温度大概为200度），样品保持微沸并冒高氯酸白烟，直到消解液为2ml，样品消解液为无色透明液体，拿下冷却，加入5ml6mol/L盐酸，15ml左右的水，继续245摄氏度加热至冒白烟，最后消解液为2ml。拿下冷却，用水转移到50ml容量瓶中，加入8ml浓盐酸，定容，放置1小时后测试。

作者: ass 时间: 2016-4-30 18:23

最后要保证样品中酸度和载液酸度相当，一般载液在20%盐酸左右，消解的时候加5ml6mol/L盐酸，温度不一定要那么高，130度差不多了，水也可以不用加了

作者: happydream 时间: 2016-4-30 18:23

首先谢谢你的经验分享，我们饲料中含硒量一般在0.3~0.8mg/kg，含量还是挺低的，所以不需要您的控制样了。盐酸的浓度好像没有你说得那么高，加8ml浓盐酸到50ml定容（参考国标，饲料中硒的测定），盐酸的浓度为16%（体积比），比你说的要低。如果按照您说的，应该加酸量在12.5~15ml之间定容到50ml。不能蒸干，我这个注意到了。

其次，是不是样品的放置时间要放多久才测呢？我今天做了一个标准曲线（0、2、4、8、16、20ng/ml),放置半个小时后测试，测出荧光强度为0.000，158.325，289.274，531.762，987.365，1020.314，发现20ng/ml的标点，荧光强度（1020.314）不成比例，明显偏低，线性只有0.99那样，是不是放置的时间不够呢？以前我放置1个小时或者两个小时测出来的线性很好，能达到0.9996~0.9999之间。

作者: iop 时间: 2016-4-30 18:24

看来老师工作做得很细很精啊分享了很不错的经验值得我们学习啊

作者: jiankufanhan 时间: 2016-4-30 18:24

载液我一般用5%盐酸而已，荧光强度是否也和载液盐酸浓度有关呢？下回我在做一次分析比对，130度是消解液的温度吗？您做的是食品还是其他样品呢，我做的是饲料，是否做硒，不管什么样品消解的温度，加酸量等条件都是普遍相同的呢？

作者: nmn 时间: 2016-4-30 18:25

ning-meng，你就不要叫我老师了，以后多指导一下我啊！

作者: shuishui 时间: 2016-4-30 18:25

你太谦虚了很多荧光的问题还要多向你学习呢

作者: teddy 时间: 2016-4-30 18:26

载液酸度越高，可以保证硒还原的越好，尽量减少损失。加了5ml6mol/L盐酸，130度条件下赶酸就行了，不必要那么高，我不做食品，但是做植物样品。

作者: vbnm 时间: 2016-4-30 18:26

谢谢您的分享，我昨天晚上做了载液浓度与对应荧光强度和标准曲线的实验分析，结果发现载液的浓度对标液的荧光强度和标准曲线的线性影响很小，不过低浓度载液（3%）对应测量结果的稳定性（精密度）比高浓度载液（20%）的要差一些，但都在RSD=2%以内。

作者: 艰苦奋斗 时间: 2016-4-30 18:27

楼主的精神值得鼓励，希望能把验证的数据发来共享，这样会对以后的版友有更多的帮助。

作者: 风往尘香 时间: 2016-4-30 18:28

不同的的元素对于酸度的范围要求都不大一样的，常见的AS HG SE对酸度的要求都是比较宽的

作者: jiushi 时间: 2016-4-30 18:28

对于还原剂并不是越大越好的太大的浓度反而会降低灵敏度和稳定性的

作者: adg 时间: 2016-4-30 18:28

我用的还原剂浓度是1%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠溶液和2%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠，我发现2%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠溶液会比1%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠溶液的灵敏度和稳定性都要好,结果如下：

一、2%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠溶液做还原剂，20ng/ml硒标准溶液荧光强度为1850左右，连续七次测定8ng/ml硒标液RSD=0.84%

二、1%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠溶液做还原剂，20ng/ml硒标准溶液荧光强度为1200左右，连续七次测定8ng/ml硒标液RSD=1.35%

因为我也是初步探索这个方法，所以就没有再用高浓度的还原剂的实验了，选择还原剂的浓度为2%硼氢化钾+0.2%氢氧化钠溶液，进行后续实验的验证。

对于国标方法GB/T 13883-2008《饲料中硒的测定》，其中要加入2ml20%铁氰化钾（定容到50ml），是用来做掩蔽剂，起抗干扰的吗？但是我用标准物质来做，加与不加铁氰化钾，结果都差不多，而且都在标准值范围内，是否可以认为，样品的测定也不需要加铁氰化钾呢，这样可以减少试剂的使用和加试剂（铁氰化钾）的时间？

作者: ass 时间: 2016-4-30 18:29

我会在把实验做完，然后整理后再发上来，毕竟现在都没有整理好，而且精密度测定的时候忘记截图了，后面还要补呢！

作者: happydream 时间: 2016-4-30 18:29

您好，我也刚做，请问温度、酸度具体该如何控制呢

作者: iop 时间: 2016-4-30 18:30

您好，能不能请教是怎么做的，具体的消解过程

作者: jiankufanhan 时间: 2016-4-30 18:30

请问，铁氰化钾究竟用来掩蔽什么呢

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