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标题: [求助]复方氨基酸分析 [打印本页]

作者: 笨鸟321 时间: 2011-11-11 17:36 标题: [求助]复方氨基酸分析

[求助]复方氨基酸分析

请问；各位同仁，你们在做复方氨基酸注射液时（20种左右），是采用的那个公司的分析方法，那个方法相对成本较低，且实用。

作者: 8964357 时间: 2011-11-11 17:37

Waters的ACCQ.TAG法

作者: 刘白白 时间: 2011-11-11 17:38

我建议采用戴安的AAA－Direct氨基酸分析系统，无须衍生化，近20种一起分析。
进样体积: 25µL
标准: NIST=2.5µmol/mL in 0.1 M HCl 溶液
稀释标准(用去离子水): 20nmol/mL
色谱柱: AminoPac PA10 分离柱与保护柱(2mm)
柱温: 30℃
系统操作反压: < 3,000 psi
淋洗液:
E1: 去离子水
E2: 250mM NaOH
E3: 1M 醋酸钠
淋洗液流速: 0.25mL/min
ED50操作参数: AAA Au 工作电极;pH参比电极;电位波型见表1.
梯度淋洗: 见表2.

色谱峰1- 精氨酸(Arginine); 2- 赖氨酸(Lysine); 3-丙氨酸(Alanine);4-苏氨酸(Threonine);5- 甘氨酸(Glycine);6-缬氨酸(Valine);7- 丝氨酸(serine); 8- 脯氨酸(Proline); 9- 异亮氨酸(Isoleucine);10- 亮氨酸(Leucine);11- 蛋氨酸(Methionine);12-组氨酸(Histidine);13- 苯基丙氨酸(Phenylalanine);14- 谷氨酸(Glutamate);15- 天冬氨酸(Asparate);16- 胱氨酸(Cystine); 17- 酪氨酸(Tyrosine)
表2. 梯度淋洗程序
时间(分)  %E1  %E2  %E3  曲线  Comments
Init  80  20  0  5  装样
0.0  80  20  0  5  进样
2.0  80  20  0  5
8.0  68  32  0  8
11.0  66  34  0  8
18.0  40  20  40  8
21.0  44  16  40  5
23.0  14  16  70  8
42.0  14  16  70  8
42.1  20  80  0  5
44.1  20  80  0  5
44.2  76  24  0  5
60.0  80  20  0  5
75.0  80  20  0  5  结束

作者: 刘白白 时间: 2011-11-11 17:39

表1.波型
时间(秒)  电位(V)vs pH  积分
0.000  +0.13
0.040  +0.13
0.050  +0.33
0.210  +0.33  Begin
0.220  +0.60
0.460 +0.60
0.470  +0.33
0.560  +0.33  End
0.570  -1.67
0.580  -1.67
0.590  +0.93
0.600  +0.13

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作者: 987789 时间: 2011-11-11 17:39

Waters的ACCQ.TAG法
运行一针,仅要45分钟!
双泵梯度

作者: 笨鸟321 时间: 2011-11-11 17:43

谢谢,各位给我的指导,但是waters的成本很贵的,且很费色谱柱的,还有没有其他较好的衍生方法,安捷伦的方法,如何,有那位大师用过吗

作者: 笨鸟321 时间: 2011-11-11 17:44

快求助,我在做冻干样品费休水分测定时,因为样品含的有结晶水,且特容易吸潮,最重要的是它不溶于无水甲醇,所以每次测定水分经常超出限度,但费休样品溶液的色泽看起很深了,(显紫红)请问这样合理吗,有啥办法呢,药典上不是也有样品不溶于无水甲醇,但不还是用费休法测量吗?

作者: newway 时间: 2011-11-11 17:44

PITC,比Waters的ACCQ.TAG法要容易做,且成本低

作者: minran_1980 时间: 2011-11-11 17:44

我公司用的是卫生部九八年颁发的一个标准，混合氨基酸含量（除色氨酸和乙酰半胱）采用氨基酸分析仪测定，色氨酸采用紫外测吸收度法，乙酰半胱采用HPLC

作者: 云端ing 时间: 2011-11-11 17:45

谢谢,各位给我的指导,但是waters的成本很贵的,且很费色谱柱的,还有没有其他较好的衍生方法,安捷伦的方法,如何,有那位大师用过吗

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最近刚好在做氨基酸的测定，手头上没有资料，只好凭记忆告诉你。
用的就是安捷伦的柱前衍生，是用OPA试剂和硼酸溶液柱前衍生，然后进样分析。
流动相是A:以乙酸钠为主的水相
流动相B：乙酸钠和甲醇，乙腈混合，以有机相为主。
梯度洗脱，25分钟走完。

柱子是安捷伦公司特定的做氨基酸分析的柱，2.1mm粒径。
你可以联系安捷伦公司，他们会有一个氨基酸分析包的，包括试剂和柱子还有特定的分析软件，（如果不是特殊分析，软件可以不要，试剂也可以制剂配制，）他们也有成熟的方法可以给。

作者: wsll 时间: 2011-11-11 17:46

使用的DABS Cl 柱前衍生，普通C18柱，紫外检测器，流动相A：0.1mol/L柠檬酸钠（调pH值6.55±0.05）55ml，DMF20ml，水425ml。
流动相B：流动相A60ml，4％DMF/乙腈140ml。
梯度洗脱，约30分钟走完。

作者: 张先生 时间: 2011-11-11 17:46

Waters的ACCQ.TAG法样品怎么前处理？

作者: mamamiya 时间: 2011-11-11 17:46

用过Ａgilent柱前衍生的，分离效果很好，各个氨基酸的分离度很好，也比较容易操作

作者: 小糖块 时间: 2011-11-11 17:47

Waters的ACCQ.TAG法样品怎么前处理？

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waters的ACC.TAG的样品需要用衍生试剂进行衍生化处理，然后再进样分析。Waters公司有专门的ACC.TAG试剂包及操作手册。可以和他们联系。不过ACC.TAG试剂包一套很贵的。

作者: star#room 时间: 2011-11-11 17:48

用过Ａgilent柱前衍生的，分离效果很好，各个氨基酸的分离度很好，也比较容易操作

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我们也是用Ａgilent柱前衍生的，但是有几个氨基酸分离不好（组氨酸、甘氨酸和苏氨酸，还有胱氨酸、缬氨酸和蛋氨酸），不知道是什么原因呢？请指教！谢谢

作者: u234 时间: 2011-11-12 10:38

我们的是两种方法一种是跟你们一样三氟乙酸-乙腈体系
另一种是高氯酸加磷酸-乙腈体系（流动相A:1水合高氯酸钠14g加1000ml水溶加1ml磷酸,流动相B:乙腈），但色谱柱全是苯基柱；
个人愚见：三氟乙酸作为离子对试剂，调节PH，是蛋白处于分子状态，高氯酸-磷酸体系也是这个原理吧；但是对于“偏碱”蛋白（等电点高的蛋白~~可以这样说吧，，不严谨~~~），应该用碱性离子对试剂吧例如三乙胺，但是三乙胺-跟乙腈搭配做流动相？？？？回去我给你查查书，

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谢谢了！加三氟乙酸在酸性条件下利用离子对作用增加蛋白的保留，所以我选择了三氟乙酸，且三氟乙酸的吸收波长在200nm一下，对214nm波长的检测干扰较小。我现在只有一个C18柱，没有苯基柱，不知道高氯酸钠加磷酸-乙腈体系能不能用于C18柱呢？非常感谢的解答！

作者: 66+77 时间: 2011-11-12 10:38

从你的体系看，分离度应该不是大问题，改善峰形才是关键。可以调整流动相的pH试下。

作者: vera+ 时间: 2011-11-12 10:39

可以试试丁烷基磺酸钠、辛烷基磺酸钠、SDS离子对试剂
我也是做蛋白HPLC
一起学习

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