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标题: [求助]如何确定某个色谱峰为单一峰？ [打印本页]

作者: october7 时间: 2011-11-15 12:47 标题: [求助]如何确定某个色谱峰为单一峰？

[求助]如何确定某个色谱峰为单一峰？

进行HPLC分析时，怎样才能知道某一个色谱峰是否是单一峰呢？特别是分析中药成分的时候？标准品加入法、DAD、还有改变流动相的组成是否能说明呢？

作者: 药徒 时间: 2011-11-15 12:47

做一个峰纯度不就知道了吗？

作者: october7 时间: 2011-11-15 12:48

如果两个化合物结构很接近，保留行为和UV吸收也一致，看纯度还可行吗？

作者: 00无名指00 时间: 2011-11-15 12:48 标题: 回复 #3 october7 的帖子

既然这样不行，是不是可以做个结构确证什么的？

作者: 药徒 时间: 2011-11-15 12:48 标题: 回复 #3 october7 的帖子

如果有已知的那两个化合物或标准品，分别进一下样，看看其峰位是否在同一时间来简单确认该样品是否为一个物质，行不行？

作者: 二子 时间: 2011-11-15 12:49

液相上有一句经典的话说得好 “出两个峰肯定不是一种物质，出一个峰不一定是一种物质”。
一般来说，至少要用两种以上方法验证，才能基本证实某种物质为单一组分。我们这里确定一个蛋白要用到电泳、凝胶色谱、反相色谱才基本确定其单一性。
就算抛开手性异构体不谈，你用一种色谱的方法也无法很确定的证明该峰物质的唯一性。

作者: october7 时间: 2011-11-15 12:50

嗯，如果是已知化合物的话，标准品加入法的确可以验证！可是中药中含有那么多复杂的成分，不可能有所有的标准品啊！

作者: october7 时间: 2011-11-15 12:50 标题: 回复 #6 二子的帖子

那么我该如何具体的确定该色谱峰的唯一性呢？

作者: ha111 时间: 2011-11-15 12:51

QUOTE:

原帖由二子于 2011-11-15 12:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
液相上有一句经典的话说得好 “出两个峰肯定不是一种物质，出一个峰不一定是一种物质”。

我感觉问题并不完全是这样子的，有时候一个纯度很好的样品在不合适的条件下可能出现两个峰，不同的解离形式可能被分开，这种情形在方法学建立的时候我已经不止一次遇到了，呵呵。

不知道又没有谁有这样的经历

作者: mamamiya 时间: 2011-11-15 12:51

楼上说的很对,分析条件不适合的条件下,本来一个单一的峰会变成一个难看的峰,象是里面包着另外的物质一样,优化条件后就会好,看到单一峰,应该用DAD来查看光谱,是否有光谱性质不一样的现象来判断

作者: damingxia0904 时间: 2011-11-15 12:52

做个液质应该可以解决问题，根据质谱给出的分子离子峰或碎片峰等信息可以判断该保留时间所对应的是否为单体化合物。

作者: 不请自来 时间: 2011-11-15 12:52

如果有二极管阵列检测器，可通过光谱图与对照品峰比较来鉴别峰的纯度。
可以在色谱峰的多作几个点来检测

作者: yueban-1147 时间: 2011-11-15 12:52

真要证明的话最好还是将其分离出来，制备少量进行验证。

作者: hulu呼噜 时间: 2011-11-15 12:53

打质谱鉴定！

作者: 8964357 时间: 2011-11-15 12:53

我觉得靠紫外DAD检测器，改变流动相极性，加样这些方法也不能完全证明一个色谱峰就是单一的化合物，在实际中，如果我们结合几种方法验证后也只能说明它是单一成分的可能性很大。

作者: 张先生 时间: 2011-11-15 12:55

是用不同保留现象的柱子来检查，比如凝胶+反相，交换+反相，如果还是一个峰，应该能确定

作者: 66+77 时间: 2011-11-15 12:55

lc-ms

作者: xue258 时间: 2011-11-15 12:56

觉得用DAD检测器应该能确定吧~！~

作者: ROSE李 时间: 2011-11-15 12:56

DAD检测的峰纯度并不可靠，还是应该做LC－MS确认

作者: 木槿 时间: 2011-11-15 12:57

这个问题实际就是峰纯度检测的问题，我来把前面战友的观点综合一下，综合的不对的还请大家指点：
1、多种不同原理的方法比较是首选。
2、其次采用DAD检测器进行光谱分析，如果提示不纯，估计有问题。纯度阈值受仪器、流动相等影响，所以只能作为参考。对于分子结构中差异有紫外吸收官能团的，dad检测器一般还是可以准确判断峰纯度的，但对于结构中无紫外吸收的那些差异，DAD检测器就无能为力了，比如某肽链中的氨基酸差异、或者一些对应异构体，dad也是无能为力的。
2、如果DAD不行，那么就需要采用质谱鉴别了，优选液质联用，如果是含盐流动相，可以采用收集不同时段的色谱流出物的方式，脱盐，进行质谱检测。
3、如果怀疑有异构体，这个就比较头疼了，非对应异构体需要二级（主要是对CID的能量有要求，可以打断侧链）的质谱才能判断侧链的区别。对应异构体的辨别目前好像只有waters的离子淌度质谱（没做过）有一定的分辨能力，但也不是万能的。
所以峰纯度判定需要结合化合物及可能杂质的结构特点，来合理选择。

作者: 二子 时间: 2011-11-15 12:57

就怕遇到异构体。其他还好说，看峰纯度，HPLC换方法检测，还有就是做LC-MS确认，都可以尝试，如果还不确定，最好分离制备一点东西，做核磁确定，看是不是一个东西。一维不行还有二唯。

作者: pencil菲 时间: 2011-11-15 12:58

我感觉问题并不完全是这样子的，有时候一个纯度很好的样品在不合适的条件下可能出现两个峰，不同的解离形式可能被分开，这种情形在方法学建立的时候我已经不止一次遇到了，呵呵。

不知道又没有谁有这样的经历

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的确不错，很多物质有互变异构，会出两个峰

作者: biabiade 时间: 2011-11-15 13:01

最省钱的方法，TLC,

作者: DDD 时间: 2011-11-15 13:02

我也觉得DAD的峰纯度不可靠，我的明明有个辅料峰包在里面，还说是单一峰

作者: qumm1985 时间: 2011-11-15 13:02

那现在出来了吗?

作者: xevin 时间: 2011-11-15 13:03

DAD、MS、C谱和H谱相结合

作者: HPLC使者 时间: 2011-11-15 13:03

如果你有标准品就好办。如果你只是单纯的想知道这个峰是不是单一峰而不是一定要确证这个峰就是单一物质的话我认为DAD的峰纯度就够用了。否者的话建议用LC-MS！

作者: 101010 时间: 2011-11-15 13:04

现在用单一的方法都不认可了，开始研究就要LC-MS，随着深入下去，需要会更多。

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