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标题: [讨论帖] 蒸发光散射检测器和蒸发光散射检测技术的讨论 [打印本页]

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:36 标题: [讨论帖] 蒸发光散射检测器和蒸发光散射检测技术的讨论

[讨论帖] 蒸发光散射检测器和蒸发光散射检测技术的讨论

蒸发光散射检测器ELSD和蒸发光散射检测技术已经逐渐应用于药物分析领域（中药质量控制和化学药品分析）。
但是，作为一项相对较新的技术（虽然技术形成较早，但在国内药物分析中应用较晚），业内人士对其了解相对其他常用技术可能还较少。
随着中国药典2005版在高效液相色谱法中收入ELSD作为检测器，相信ELSD的销售商(美国Alltech、法国公司迪马代理、以及Waters ELSD 2020)乐开了花，但也少不了激烈的市场竞争。
但就此项技术本身，是否还存在一定的不完善之处、检测器的性能如何、HPLC-ELSD在实际应用过程中遇到的问题、ELSD和蒸发光散射技术在药物分析领域应用前景如何，期待各位同仁发表自己的看法，观点和分享自己宝贵的经验，期待中...

作者: HPLC使者 时间: 2011-11-15 16:37

我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别差。还好他又推出新的型号，据说可以提高灵敏度几个数量级。
在方法学学研究时，更是没法做。关于含量测定，精密度应该按峰面积计算，还是应给以面积的对数计算呢？
不过蒸发光自有它的优势，可以节省很多成本，另外他还可以检测柱流失。

作者: owanaka 时间: 2011-11-15 16:37

蒸发光检测器属于质量检测器，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，但对有紫外吸收的样品组份检测灵敏度比较底，重现性比较差（出厂要求重现性RSD<6%即可），现常用于检测没有紫外吸收的物质。
主要原理是，流动相及组份在蒸发室，先被雾化，流动相蒸发，组份形成气溶胶，然后进入检测室，用激光照射照射气溶胶而产生光散射，测定光散射的光强而获得信号。
组份质量（m）与散射光强（I）的关系为：lgI=b·lgm+lgk
k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。
剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题，比如流动相中不能有盐，使用前先升温给气，再进流动相，使用完后先停流动相，后降温，最后停气，光机。
最后说明一下，使用完毕后可将流动相改为水及甲醇，调节温度及气流量冲洗蒸发室，这样可以增加使用寿命，降低噪音。

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:38

楼上朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别差。在方法学学研究时，更是没法做。”

我想您指的重现性较差，可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对，含量的重现性还可以说得过去。

我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大，所以如果您使用纯净的气源，精准的气体流速控制，至少在一天内的重现性不成问题。

根据ELSD的工作原理，必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是，在实际应用过程中，如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近，直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响（尽管其不是合理的方法）。

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:38

另外，有没有朋友用过法国产的ELSD，可否谈一下看法？

作者: pencil菲 时间: 2011-11-15 16:38

比较赞成楼主的说法，ELSD很多人都说它重现性很差，其实我根据我自己的经验，重现性差一般应该是指其峰面积重现性较差（和UV比较），但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法，我曾经做过一系列的比较实验，也查询了一些资料，目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数，三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性，个人认为：不必拘泥，首先用峰面积和浓度直接做线性，如果相关系数不好，再尝试用对数关系（自然对数或常用对数）。一般都可以解决问题，不象那位同学说的方法学根本没法做，应该还是可以做的。至于楼主所说的，对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算，我不是很认同，当很接近时，可以考虑做一个比较窄的范围做线性，你如果直接用两点法做计算的话，必须得有一些数据支持，否则文章是很难发表的，也没有说服力，很容易被人质问，至于做随行对照的问题，按正规要求，不只ELSD，其他检测器的液相也应该这样做，只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做，对于ELSD当然做随行对照最好，至于是否一定要做，我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用，而且条件没有变，预热也够充分，那么不做也行，但是这只是考察了自己的一个实验而已，不敢建议大家都不做，在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好，也好心里面有底，免得造成不好的影响，呵呵。建议做随行对照。
谈到ELSE仪器的使用上，也有一些体会，但一时难以细细道来，主要就是雾化温度和气体流速的设置上，如果这两个参数设置合理，一般情况下都不会有什么问题，大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了，也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见，一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考，实际实验时很少完全和他提供的条件一致的，多比他提供的参数稍微高些，开始设置温度建议高些，如果基线没问题再慢慢调整到最佳温度流速。
再有，就是因为ELSD为质量型检测器，所以样品的预处理就相对更重要些，尽可能地分离纯化将会使你的方法学更容易建立，太多的成分在里面容易干扰正常检测。
本人只用过ALTECH 2000，其他牌子的ELSD只是在展会上见过，遗憾。见到一个内置工作站的ELSD介绍，觉得不错，但没用过，不知道可有朋友用过，感觉如何？如果不错，倒可以考虑购买，呵呵
暂时就想到这些吧，一些拙见供大家参考。

作者: zzzz 时间: 2011-11-15 16:39

法国的蒸发光散射检测器本人用过，Sedex-55型，Sedex-75型，都用过，也有五年多的历史了。主要用于中药成分的含量测定，也作过麦芽糖。感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。同时该品牌ELSD采用超地温雾化技术，蒸发室温度一般低于50摄氏度，我一般用40左右，我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合，则也充分证明其为质量型检测器，曾经做过中药注射剂的指纹图谱，在同一机器，同一牌号色谱主的情况下重现性较紫外好得多。但更换色谱柱峰形变化较大。
ALTECH 2000本人也接触过，知道其不是同一天其样品峰面积差异相当大。

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:39 标题: 回复 #7 zzzz 的帖子

这位朋友所说“感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。”

不知您指的是不是含量的日内重现性，还是峰面积的日内重现性，日间的峰面积精密度不知您是否注意过。我使用Alltech500时，有时峰面积的日间RSD会超过10%。不知道Sedex系列怎么样。

您所说的“我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合，则也充分证明其为质量型检测器，”

我个人认为：ELSD可以称作是质量型检测器，但是其并不能被称作通用型质量检测器。人参皂苷Rg1与Rb1同属于皂苷类成分，分子结构比较类似，所以在ELSD的响应上可能比较相近，但是如果被分析的两种组分分子量接近，但是分子结构相差比较大大话，根据我本人的经验，两种组分在ELSd上的响应值可能会差得比较远。并且和分子量没有明显的相关关系。

Sedex系列和Alltech2000同属可分流型ELSD，两种检测器您都接触过，不知您对ELSD的分流装置的应用有何感想，呵呵..........

作者: 粉色萤火虫 时间: 2011-11-15 16:40

前段时间，中国药品生物制品检定所抗生素室的专业网站抗生素工作网站上专门进行了有关“应用蒸发光散射检测器进行抗生素药品质量分析”的专题讨论，感兴趣的战友不妨去看看！cuturl('http://www.antibiotic.cn/dvbbs/list.asp?boardid=14')
相信对大家会有所帮助！！

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:40 标题: 回复 #9 粉色萤火虫的帖子

谢谢萤火虫战友的提醒，浙江药检所抗生素室曾经在园子里贴过他们在应用
ELSD分析抗生素时的体会：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=117&id=1862637&sty=3&keywords=%D3%A6%D3%C3%D5%F4%B7%A2%B9%E2%C9%A2%C9%E4%BC%EC%B2%E2%C6%F7%BD%F8%D0%D0%BF%B9%C9%FA%CB%D8%D2%A9%C6%B7%D6%CA%C1%BF%B7%D6%CE%F6')
好像就是您贴的：）

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:41

据说Waters也推出了自己的ELSD,好像是Waters2020 ELSD, 不知道各位战友有没有知道有关信息,

"新型2420 ELSD具有杰出的信噪比性能、低噪音电路与先进的控制特性，是可以用于梯度分离条件的通用型检测器。它既可以作为独立的检测器与任何HPLC系统配合使用，又可以在Waters Empower、MassLynx软件或FractionLynx应用平台的直接控制之下使用。2420检测器在与Waters HPLC或LC/MS系统一同使用时将会发挥其最佳性能。对喷雾及蒸发过程的严格温度控制使得2420在保持低扩散特征的同时可以实现对温度敏感型分子的测量分析。"

转自Waters网站,cuturl('http://www.waterschina.com/product/list.cfm?cid=48')

作者: langlang 时间: 2011-11-15 16:41

对于蒸发光散射检测器的分离装置，我了解也不是很多，Alltech2000采用双模式方式即在挥发性溶剂情况下，采用非分流模式；而水相或大流量情况下采用分流模式，其漂移管较短采用的是高温蒸发模式，蒸发温度90摄氏度以上，同时漂移管较短，是不锈钢材质。
Sedex-75型采用的是低温蒸发模式，由于其雾化室较大采用自然分流效果较前者好，同时其蒸发管（漂移管）长度较前者长许多，厂家工程师介绍有2m多长，且为螺旋形可以减缓漂移速度，同时其蒸发温度较低一般为40摄氏度左右，有利于被测物质形成较大结晶。从而增加测定的准确性。但Sedex的管路均为玻璃材质，易破损，但我用的有5年了，中间还搬过两次家也没出什麽问题。
以上为本人自己体会，请多多指教。

作者: ha111 时间: 2011-11-15 16:41

不同厂家的ELSD采用不同光源：激光、卤素灯、蓝色发光二极管，不同光源对测定的影响大吗？最近要买ELSD，很想听听大家的建议！到底各家的性能如何？

作者: any333 时间: 2011-11-15 16:42

ELSD好像在2002年黄芪注射液的修订标准中就成了法定标准。它可作为HPLC/HSCCC/SFS等的检测器，能很好支持梯度洗脱，没有流动相配比变化而引起的基线波动。虽是质量检测器，但其样品无法回收。ELSD在中药中应用还是前景看好，而且在指纹图谱中可完善无紫外吸收的成分，只是其测定结果的重现性和准确性也还有待提高（当然这可能是气体的纯度、流量的精度、流动相配比的准确性以及参数设置都会提供其测量的重现性和准确性）。
我们新近也购买了台Alltech ELSD 2000，用于皂苷类和萜类内脂类的测定，以前都没有接触过，使用中也碰到楼上老师们所说的情况。一般是基线不稳定（噪音大，也和修饰剂的加入有关），看了lzq老师的帖，可能是温度和流速没设置好了，以后还得在这方面下点功夫，看有没有改善。同样峰面积的重现性也成问题，曾在做一个皂苷线性时（稀释系列浓度），咋都做不好，最后改用了进样量才完成。
看来还得多向各位老师学习请教。才能进步，支持本专题的出现。谢谢各位老师。

作者: zsxan1990 时间: 2011-11-15 16:42

我用的是Soft200,即便宜又实用的一种型号.主要做的是甾体皂苷的检测.使用中遇到的最大问题也是基线不稳定.不过,现在我发现,当流动相的极性不是太大的时候,只要让蒸发光检测器先平衡一会儿再开启流动相,流动相的基线就没问题了.而且,只要基线稳定了,测定的图谱的质量也就提高了.其实,蒸发光检测的主要参数是汽化室的温度,漂移管的温度和气流速,只要一次设定好了,一般就不用总调整了吧.Soft200还有一个滤过的参数,不知其他机器有没有.

作者: 火树银花nm 时间: 2011-11-15 16:43

我用的是岛津class－vp高效仪，检测器是AlltechELSD2000。前段时间师弟曾把脏水倒吸到甲醇中而未发现继续使用，结果造成基线不好。脏东西进了管路，柱子，检测器。用了几天还好，现在已经重复不出以前的结果了。管路已用稀硝酸洗过，用别的柱子做的很好。当时用的柱子也用不同比例的甲醇水洗过，可是结果还是不好。请问是否是柱子里积压的脏东西太多了，或是有别的什么原因？急盼回复。Thank you very much！

作者: 耗子=== 时间: 2011-11-15 16:43

是柱子的问题，我用过柱子是这样的

作者: 轰轰 时间: 2011-11-15 16:43

我用的是Waters 2420 ELSD，时间还不长，在实际操作中经常会遇到样品不出峰的现象。我将认为重要的两个参数：气体流速和雾化温度作了较大范围内的改动尝试，也不一定能保证出峰。
做下来的感觉是，对条件很苛刻，有一点不对就影响检测结果，请问各位高手，在气体流速和雾化温度上有没有一个较常用的范围值呢？

作者: mamamiya 时间: 2011-11-15 16:44

我们用的Alltech2000ELSD,两年下来感觉峰面积的日内重现性还是可以做好的，但应是在一个适当的线性范围内。浓度低到一定程度时重现性是不好，本人认为任何一个检测都有它的定量限，在小于定量限时重现性肯定不符合要求。ELSD的日间峰面积精密度是比UV差，所以用随行标准曲线定量从准确。去年Alltech公司在大连开会，公司的人提出建立标准曲线后每天的随行标准曲线做3点即可，我认为可行。再者使用Alltech2000 ELSD时一定要等漂移管温度升到要求温度后在接柱子。

作者: wanglaoshi 时间: 2011-11-15 16:44

保留时间的缩短，肯定和检测器没有关系。
估计与你所使用的柱子、检测成分以及流动相有关。
比如说流动相对柱填料有损害，等等
或者所使用流动相比例发生了微弱的改变，都会引起此现象，但是和ELSD没有任何关系。

作者: u234 时间: 2011-11-15 16:44

请问用elsd可否检验峰纯度，如何检验？

作者: 木槿 时间: 2011-11-15 16:45

ELSD有其独特的地方：一般情况下，峰面积不与样品量成正比，所以用外标法的话，用外标两点法或标准曲线法，代入回归直线算出样品的量，求出百分比

作者: 00无名指00 时间: 2011-11-15 16:45

我用的sedex-75，前几天突然不出峰，换了柱子，换了流动相，也不行！后来在一高人的指导下，把几个接口用砂布檫了几下就好了，

作者: kuaizige 时间: 2011-11-15 16:45

真奇怪，难道不知道ELSD是对数曲线吗，ELSD峰面积的重现性不如UV是事实，但这是其特性决定的，在这里讨论峰面积的重现性是不合适的，如果用峰面积的对数计算，那就是很稳定的

作者: junhun 时间: 2011-11-15 16:46

Alltech ELSD 2000与Agilent 1100联用时出现信号中断的情况，是什么问题？特别是在ELSD调零的时候，一调零基线就掉下去了，还没找到什么方法可以让基线重新上来，往往只好关掉整个系统重新开始。大家有遇过这样的问题吗？怎样解决？

作者: 婴儿脸 时间: 2011-11-15 16:46

ELSD 在用0.2mol/L三氟乙酸做为流动相时，基线噪音特别大，调解温度无任何改善，求助高手支招！本人以前没用过蒸发光检测器，盼赐教

作者: 婴儿脸 时间: 2011-11-15 16:47

ELSD 在用0.2mol/L三氟乙酸做为流动相时，基线噪音特别大，调解温度无任何改善，求助高手支招！本人以前没用过蒸发光检测器，盼赐教

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提高所有溶液的纯度

作者: 8964357 时间: 2011-11-15 16:47

看排气管排气是否正常

作者: Ao7 时间: 2011-11-15 16:47

我做过softa ELSD和瓦里安的ELSD.感觉就是蒸发光检测器稳定性比较差，半天才稳定。有时基线突然掉下来了，坑爹啊！！

作者: 木槿 时间: 2011-11-15 16:48

我做过softa ELSD和瓦里安的ELSD.感觉就是蒸发光检测器稳定性比较差，半天才稳定。有时基线突然掉下来了，坑爹啊！！

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任何仪器都是需要顺毛摸，否则很难伺候

其实有时，我们人又何尝不是呢

作者: ROSE李 时间: 2011-11-15 16:48

有没有朋友用过ELSD测定的有关物质，怎样计算啊

作者: 紫烟 时间: 2011-11-15 16:49

有没有朋友用过ELSD测定的有关物质，怎样计算啊

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与含量测定相类似

药典上有含量测定的具体实例

作者: mamamiya 时间: 2011-11-15 16:49

ELSD 在用0.2mol/L三氟乙酸做为流动相时，基线噪音特别大，调解温度无任何改善，求助高手支招！本人以前没用过蒸发光检测器，盼赐教

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我也遇到这个问题

楼主说提高溶剂纯度，除了水，我用的全是色谱级的了，基线噪音还是很大

作者: 木槿 时间: 2011-11-15 16:50

我也遇到这个问题

楼主说提高溶剂纯度，除了水，我用的全是色谱级的了，基线噪音还是很大

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为什么水就不能提高纯度了？

作者: newway 时间: 2011-11-15 16:50

小弟开始就用峰面积常用对数做线性，不知道用峰面积直接做怎么也可以呢，不是质量型吗

作者: H2O 时间: 2011-11-15 16:51

影响因素很多如：检测器污染、溶剂质量（三氟乙酸）、色谱柱等逐一排除。

作者: H2O 时间: 2011-11-15 16:51

我也遇到这个问题

楼主说提高溶剂纯度，除了水，我用的全是色谱级的了，基线噪音还是很大

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可以用屈臣氏蒸馏水试一试，这个水我用过，效果很好的，不是做广告哦，呵呵。

作者: 987789 时间: 2011-11-15 16:52

我公司的ELSD为sedex-55，这几天出现一个奇怪的现象：对照的面积比以前小了好几倍，但样品面积正常，请教各位高手，这是为何？如何解决？谢谢！

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