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标题: [讨论帖]大家谈谈使用离子对试剂的经验 [打印本页]

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 12:51 标题: [讨论帖]大家谈谈使用离子对试剂的经验

[讨论帖]大家谈谈使用离子对试剂的经验

最近有个疑惑，就是离子对试剂的优劣对基线噪声的影响是否很大？

有经验的老师能否就您们使用离子对试剂的经验呢？

希望能够给初学者或是有疑问的色谱工作者一个借鉴，参考与学习的机会呢？谢谢大家

1、国内产的离子对试剂与国外产的离子对试剂质量对比，如何？

2、离子对试剂是否会影响基线噪声？

3、大家使用质量优异与劣质的离子对试剂配制流动相，都发生了哪些现象呢？是否会出现有的可以检测出杂质，有的检测不出呢？即是否会发生色谱选择性的变化呢？

作者: plaa 时间: 2011-11-25 12:51

昨天遇到了这样的问题,原来检测不出,换了试剂,峰位变了,多了一个杂质,正会出现有的可以检测出杂质，有的检测不出。正郁闷

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 12:52

通过两天来的调查与了解，得知加入离子对试剂的流动相的pH值非常的重要，会影响选择性！我们实验室检测同一种物质，相同条件下，不同的人配置的流动相的pH先后相差0.3~0.8，这样不同pH的流动相检样品主峰，有的分叉有的不分叉，但由于流动相pH值不同造成的多峰现象我还是不太了解原因？

作者: lagua123 时间: 2011-11-25 12:52

最近有个疑惑，就是离子对试剂的优劣对基线噪声的影响是否很大？

有经验的老师能否就您们使用离子对试剂的经验呢？

希望能够给初学者或是有疑问的色谱工作者一个借鉴，参考与学习的机会呢？谢谢大家

1、国内产的离子对试剂与国外产的离子对试剂质量对比，如何？

2、离子对试剂是否会影响基线噪声？

3、大家使用质量优异与劣质的离子对试剂配制流动相，都发生了哪些现象呢？是否会出现有的可以检测出杂质，有的检测不出呢？即是否会发生色谱选择性的变化呢？

关于离子对试剂在国外专门有人做过研究，有关离子对试剂在反相色谱中分离的机理，以及影响因素都有。

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1.关于国产和国外的离子对试剂质量，我们做过比较，国产的质量只能说一般般，在普通条件下可以使用，但是如果在极端的条件下，会出现杂质峰。进口的不存在这个问题，而且离子对试剂是很费钱的，400多一小瓶没几次就用完了

2.这个看离子对在紫外区是否有吸收了，大部分情况下在紫外末端会有吸收的，就好比某些缓冲盐在低波长不能使用（乙酸盐缓冲液）

3.关键是如果做有关物质的话，你试剂不纯的话，走空白都会出现鬼峰，这样的话你去判定结果的时候会非常的麻烦，一般等度条件很少出现这种情况，最让人头疼的是在梯度条件下出现的鬼峰。

具体你可以参考以下的文章

Knox JH, Hartwick RA. Mechanism of ion-pair liquid chromatography of amines, neutrals, zwitterions and acids using anionic hetaerons[J]. Journal of Chromatography A, 1981,204: 3-21.

而离子对试剂在试剂操作中注意的因素有

第一离子对的浓度，这个一般情况下在满足要求的前提下，越低越好

第二离子对的pH，这个是进行分离的最关键的因素，而只能在缓冲液中测定pH,千万不要混合以后测定，普通的pH是不能在有机相中测定pH的。

第三，如果使用离子对试剂，一定注意平衡时间，正常的话在60-90分钟才能达到彻底的平衡，还有在实验结束以后要冲洗超过2个小时。

第四，我的经验，用离子对的实验所用的柱子一定要和其他的非离子对的分开，不然你的柱子会不可逆的损伤！

作者: 药徒 时间: 2011-11-25 12:53

楼上
的回答已经比较全面了

其实说白了，你不用管它离子对不离子对，就当它一般试剂对待就是，纯度高的自然好些，工艺、纯度、级别等因素都会有所影响，看有无影响最重要，如果国产的进样没任何影响，就不必非得买进口的了。

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 12:54

关于离子对试剂在国外专门有人做过研究，有关离子对试剂在反相色谱中分离的机理，以及影响因素都有。

1.关于国产和国外的离子对试剂质量，我们做过比较，国产的质量只能说一般般，在普通条件下可以使用，但是如果在极端的条件下，会出现杂质峰。进口的不存在这个问题，而且离子对试剂是很费钱的，400多一小瓶没几次就用完了

2.这个看离子对在紫外区是否有吸收了，大部分情况下在紫外末端会有吸收的，就好比某些缓冲盐在低波长不能使用（乙酸盐缓冲液）

3.关键是如果做有关物质的话，你试剂不纯的话，走空白都会出现鬼峰，这样的话你去判定结果的时候会非常的麻烦，一般等度条件很少出现这种情况，最让人头疼的是在梯度条件下出现的鬼峰。

具体你可以参考以下的文章

Knox JH, Hartwick RA. Mechanism of ion-pair liquid chromatography of amines, neutrals, zwitterions and acids using anionic hetaerons[J]. Journal of Chromatography A, 1981,204: 3-21.

而离子对试剂在试剂操作中注意的因素有

第一离子对的浓度，这个一般情况下在满足要求的前提下，越低越好

第二离子对的pH，这个是进行分离的最关键的因素，而只能在缓冲液中测定pH,千万不要混合以后测定，普通的pH是不能在有机相中测定pH的。

第三，如果使用离子对试剂，一定注意平衡时间，正常的话在60-90分钟才能达到彻底的平衡，还有在实验结束以后要冲洗超过2个小时。

第四，我的经验，用离子对的实验所用的柱子一定要和其他的非离子对的分开，不然你的柱子会不可逆的损伤！

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您好老师！感谢您的回复：）

您说的第三点“平衡时间”是冲柱子的平衡时间？还是配制含有离子对试剂的缓冲盐溶液搅拌均匀后的平衡时间?问题幼稚，但我觉得有必要问明白。

作者: 木槿 时间: 2011-11-25 12:54

您好老师！感谢您的回复：）

您说的第三点“平衡时间”是冲柱子的平衡时间？还是配制含有离子对试剂的缓冲盐溶液搅拌均匀后的平衡时间?问题幼稚，但我觉得有必要问明白。

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冲柱子的平衡时间

作者: kuaizige 时间: 2011-11-25 12:55

1。加有离子对试剂的流动相很难平衡，对柱子伤害也很大！

2。PH的高低影响很明显。

3。和进口离子对试剂相比，国内的的离子对试剂分离效果不好！

个人拙见

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 12:56

1。加有离子对试剂的流动相很难平衡，对柱子伤害也很大！

2。PH的高低影响很明显。

3。和进口离子对试剂相比，国内的的离子对试剂分离效果不好！

个人拙见

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高人，几句话点醒梦中人！能够就第二条与第三条展开来讲，譬如说遇到的实验现象呢？

如第二条中pH的高低会有什么影响？第三条，是否您了解到检测某些项目时，国产的离子对试剂是分不开某些杂质的?

作者: 星星点灯 时间: 2011-11-25 12:56 标题: 回复 #9 tuuu2 的帖子

我们在做六类的某一项目用到戊烷磺酸钠，流动相要求的pH为2.10，结果由于仪器问题，pH没达到要求。峰前延很严重，拖尾因子只有0.85。后来对仪器重新校正，峰行就变得很好了。开始的时候用的国产的戊烷磺酸钠，拖尾且不理想，改用日本进口的，无论分离度还是拖尾，都非常不错。

不知道这样说，楼主明白没？呵呵

作者: 药徒 时间: 2011-11-25 12:57

我们在做六类的某一项目用到戊烷磺酸钠，流动相要求的pH为2.10，结果由于仪器问题，pH没达到要求。峰前延很严重，拖尾因子只有0.85。后来对仪器重新校正，峰行就变得很好了。开始的时候用的国产的戊烷磺酸钠，拖尾且不理想，改用日本进口的，无论分离度还是拖尾，都非常不错。

不知道这样说，楼主明白没？呵呵

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因为对仪器重新校正，还是改用进口试剂，还是别的原因，最终使得峰型、分离度变好，这是个问题！

国产试剂和进口试剂的差别对拖尾及分离度改善不大，影响更多的可能是保留时间及死体积、未知峰的增加等。

如有参考文献或直接数据，更有说服力，以上观点仅是个人据经验判断，仅供参考。

作者: 131415 时间: 2011-11-25 12:59

因为对仪器重新校正，还是改用进口试剂，还是别的原因，最终使得峰型、分离度变好，这是个问题！

国产试剂和进口试剂的差别对拖尾及分离度改善不大，影响更多的可能是保留时间及死体积、未知峰的增加等。

如有参考文献或直接数据，更有说服力，以上观点仅是个人据经验判断，仅供参考。

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工作时间尚短，请前辈见谅与包涵。同等试验条件下做，持续时间为两个周左右，因此才出结论。

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 13:00

通过两天来的调查与了解，得知加入离子对试剂的流动相的pH值非常的重要，会影响选择性！我们实验室检测同一种物质，相同条件下，不同的人配置的流动相的pH先后相差0.3~0.8，这样不同pH的流动相检样品主峰，有的分叉有的不分叉，但由于流动相pH值不同造成的多峰现象我还是不太了解原因？

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上面的情况，我咨询了一位老师，说是“由于pH的不同，可能会造成样品在流入色谱柱后与流动相相容性的改变，造成先后流出，而出现的双峰现象？”

这个事情不知是否有不同的见解呢？

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 13:00

因为对仪器重新校正，还是改用进口试剂，还是别的原因，最终使得峰型、分离度变好，这是个问题！

国产试剂和进口试剂的差别对拖尾及分离度改善不大，影响更多的可能是保留时间及死体积、未知峰的增加等。

如有参考文献或直接数据，更有说服力，以上观点仅是个人据经验判断，仅供参考。

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您好！老师，首先肯定的是您一定具有非常严谨的科学态度，这个问题我也想到过，我想您一定想表达的就是这个意思（仪器重新校正），我是理解的：）

另外，关于国产试剂与进口试剂的差别，据这两天我在不同论坛上发帖，大概得知：国产与进口的差异大，国产的基线噪音大（不代表共性）。

关于分离度的事宜，我倒是也比较感兴趣！

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 13:01

我们在做六类的某一项目用到戊烷磺酸钠，流动相要求的pH为2.10，结果由于仪器问题，pH没达到要求。峰前延很严重，拖尾因子只有0.85。后来对仪器重新校正，峰行就变得很好了。开始的时候用的国产的戊烷磺酸钠，拖尾且不理想，改用日本进口的，无论分离度还是拖尾，都非常不错。

不知道这样说，楼主明白没？呵呵

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您好！老师。很高兴，我提出的话题与您的回复能够得到大家如此热情的相应，我在这里向你们表示非常的感谢！

既然大家都如此的关心这个话题，不防请老师再讲讲看呢？其实，我想荣誉版主的意思“能否再详细说明一下，即实验有效性方面”，那么在如上引号前提下，我来向您及其他的专家提2个问题：

1、离子对试剂的优劣是否影响分离度呢？能否就使用进口与国产前后实验对比，出现的色谱峰（主峰与杂质峰）分离情况做一下详细的说明？

2、另外，峰型的改善的确与含离子对试剂的流动相的pH有关，这与我们曾经做出的现象是一致的，而且pH对峰型的影响很重要，差零点几都差异很大，原因我现在还不好说？是样品不稳定发生反应，还是流动相pH值的变化，导致样品与流动相互溶性的变化，而出现的样品先后流出色谱柱造成的峰变形甚至是多峰？

注：某一项目，有意的变化流动相比例（缓冲盐与有机相为90:10）为91:9，则主峰后面多出一个杂质峰；流动相比例改为92:8，则主峰完全分列成两个大小接近的峰。

作者: 药徒 时间: 2011-11-25 13:02

您好！老师。很高兴，我提出的话题与您的回复能够得到大家如此热情的相应，我在这里向你们表示非常的感谢！

既然大家都如此的关心这个话题，不防请老师再讲讲看呢？其实，我想荣誉版主的意思“能否再详细说明一下，即实验有效性方面”，那么在如上引号前提下，我来向您及其他的专家提2个问题：

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1、离子对试剂的优劣是否影响分离度呢？能否就使用进口与国产前后实验对比，出现的色谱峰（主峰与杂质峰）分离情况做一下详细的说明？--刚订购了一瓶进口离子对试剂（Hercules），到货周期为4-6周，届时有对比结果后发上来与大家讨论。

作者: 药徒 时间: 2011-11-25 13:03

2、另外，峰型的改善的确与含离子对试剂的流动相的pH有关，这与我们曾经做出的现象是一致的，而且pH对峰型的影响很重要，差零点几都差异很大，原因我现在还不好说？是样品不稳定发生反应，还是流动相pH值的变化，导致样品与流动相互溶性的变化，而出现的样品先后流出色谱柱造成的峰变形甚至是多峰？--pH值的不同，影响色谱峰的峰型是很有可能的，但如果pH值“差零点几都差异很大”，只能说明该色谱条件非常之苛刻，耐用性不好，甚至该色谱系统与药物会发生某种反应都是有可能的，这就需要更多的信息来判断了。

作者: 药徒 时间: 2011-11-25 13:03

注：某一项目，有意的变化流动相比例（缓冲盐与有机相为90:10）为91:9，则主峰后面多出一个杂质峰；流动相比例改为92:8，则主峰完全分列成两个大小接近的峰。--观点同“2”：流动相比例的不同，影响色谱峰的峰型、个数是很有可能的，但如果比例90:10和91:9则峰型峰个数都不同，只能说明该色谱条件非常之苛刻，耐用性不好，甚至该色谱系统与药物会发生某种反应都是有可能的，需要进一步优化完善条件，这就需要更多的信息来判断了。

作者: glass 时间: 2011-11-25 13:04

离子对试剂老是出一些鬼峰。

作者: tuuu2 时间: 2011-11-25 13:05

今日进行了Merck庚烷磺酸钠与天津禹王及天津科密欧离子对试剂的UV截止波长测试，发现相同浓度西安，MERCK的要吸收低，而天津禹王的则吸收强度大，天津科密欧的不但吸收强度大，且有2个吸收峰。

但不知为什么merck的氨水UV吸收超大的，在201nm，明日对比下国产的分析纯，拭目以待吧？

是氨水有核外电子跃迁在UV下，还是试剂不纯造成的，还未知，待查，有清楚的老师吗？

作者: zzzz 时间: 2011-11-25 13:06

最近有个疑惑，就是离子对试剂的优劣对基线噪声的影响是否很大？

有经验的老师能否就您们使用离子对试剂的经验呢？

希望能够给初学者或是有疑问的色谱工作者一个借鉴，参考与学习的机会呢？谢谢大家

1、国内产的离子对试剂与国外产的离子对试剂质量对比，如何？

2、离子对试剂是否会影响基线噪声？

3、大家使用质量优异与劣质的离子对试剂配制流动相，都发生了哪些现象呢？是否会出现有的可以检测出杂质，有的检测不出呢？即是否会发生色谱选择性的变化呢？

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第一个问题我们没有比较过国产与进口的差别，其实我觉得只要试验平行用哪的都可以，因为这个真的质量差别不大吧又不是什么特别难做的

第二个离子对试剂都会影响基线噪音包括其他盐，而且你的波长越短影响越明显。

第三其实出现那种有时能测出有时测不出杂质的情况，还是很少的，很有可能被其他峰包进去了，在我看来你固定一个通过浓度和ph值调节都能达到分离效果，当然要不断的尝试他对什么敏感。而且还有个经验就是，配置时尽量不要以浓度计算，要以质量比即百分比，那样重复性更好，还有就是ph值，其实能以%比的形式加酸有更好的重复性，毕竟每天的ph计不都随时校正

作者: 2541 时间: 2011-11-25 13:06

我们使用的国产庚烷磺酸钠出过一次问题，有些色谱峰的保留时间提前很多，一开始以为流动相不对，配了几次，后来乙腈甲醇水不换，试剂全换，正常了最后查到是庚烷磺酸钠不对，而且只有那一瓶不对，很无语

直接将厂家列为黑名单，不再购买这家的试剂

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