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标题: [分享]细胞污染图片专区 [打印本页]

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 14:44 标题: [分享]细胞污染图片专区

[分享]细胞污染图片专区（转载）

建立细胞污染图片专区子板块，
欢迎大家多多交流，对抗污染。

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 14:45

如，转贴szmengjie 的图片：

图片附件: 42543789.jpg (2011-11-28 14:45, 27.21 KB) / 该附件被下载次数 15
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9161

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 14:49

革兰氏染色阳性

图片附件: 38761967.jpg (2011-11-28 14:49, 27.28 KB) / 该附件被下载次数 16
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9162

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 14:53

中间长梭型的是正在分裂的念珠菌

图片附件: 37871070.jpg (2011-11-28 14:53, 21.4 KB) / 该附件被下载次数 18
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9163

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 14:54

建议：请著名污染物的名称、染色方法以及显微镜类型、放大倍数之类的关键参数，这样才能真正起到相应的鉴别作用！请斑竹烤炉一下！

作者: 盼盼 时间: 2011-11-28 14:58

我的细胞就经常受它的污染。基本上两天就看不见贴壁的细胞了。好苦啊

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 14:59

我的细胞倒是很少污染啊
有一次打开培养瓶口，到外面走廊转了一圈，也没污染
所以感觉只要严格按照细胞培养的规则操作
一般都不会污染

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 15:00 标题: 回复 #7 园丁## 的帖子

是这样的，我有一次把培养板的盖子打开，对细胞进行观察了好长时间，结果也没有污染。

作者: BOSS2011 时间: 2011-11-28 15:01

各位的环境就是好，我的培养箱水盘几乎一个星期擦一次（因为不只一个人作实验），有的时候还能看到霉菌长出来，真是担心我的半箱细胞，如果要污染，我只有跳楼了！呵呵，各位对这个有什么办法没？

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 15:02

可以定期对孵箱进行酒精擦洗
再用三氧机消毒
如果有紫外线照射就更好了

作者: 盼盼 时间: 2011-11-28 15:02

就是，每周一次紫外照射
一次酒精擦洗

作者: @STAR@ 时间: 2011-11-28 15:03

我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。

作者: utt0989 时间: 2011-11-28 15:03 标题: 回复 #10 utt0989 的帖子

9494，预防最重要。
我们这里用的是0。2％的新吉尔灭，洗手擦桌，效果可以！

作者: 西子 时间: 2011-11-28 15:04

我的细胞最近差不多一个月都饱受该菌的骚扰！养着养着就污染了，我甚至都找不到原因。我们培养间在一个月之间停了两天电，之后我的细胞就连绵不断的污染，而这之前一点问题都没有，很好的。我怀疑是培养瓶的原因，已经完全重新消毒了，
唉，郁闷！

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 15:06

每周一次紫外照射
一次酒精擦洗
我的细胞往那儿放呀，我也想每周都照一次，看来只能多多注意啦!谢谢几位的精彩回答！

作者: BUK 时间: 2011-11-28 15:06

我们细胞培养室有24h的空气消毒装置，但我们还是做的很细，水盘里加的是灭菌水，每次开相时都时酒精擦手。当然，进室之前洗手是肯定的。每星期消毒水擦遍每一个角落。我们一直很安全。现在我已经在里面做了5、6次原代取材，也没污染过。总之，细胞培养是个很细致的事，时时小心，问题应该不大。

作者: BUK 时间: 2011-11-28 15:07

郁闷，今天我们的培养箱里被霉菌污染了，好惨呀
一共有9瓶细胞（8瓶是其他实验室暂时放的）和一个6孔板都发现霉菌了。
虽然我们的水箱底盘加的不是无菌水（双蒸水），但也是每周一次紫外线照射的，操作前酒精擦手，唉，不知道是哪个环节出了问题，真是郁闷极了。
有必要给底盘加无菌水吗？

作者: 西子 时间: 2011-11-28 15:07

实验室的老师说,霉菌污染多来自空气,所以做实验时说话聊天,或瓶口敞开时间太长,还有培养箱开关频繁是主要原因,还是多找自身原因.

作者: BUK 时间: 2011-11-28 15:08

灭菌水,是否有必要我也不太肯定。其实这一点是很容易办到的，有总比没有好。多注意一些可能的因素，对细胞总是有力的。被污染总是很麻烦的，细胞长得不好不说，还影响实验进程。
我认为有两个环节很重要，操作台及温相。我们操作前、后都要紫外杀菌30min，而且保持操作台通风设施正常。我们的温相好像从来没有用酒精擦过，更没用紫外照射。我们开温相时，先清洁剂洗手，在酒精擦手，范围与手术洗手差不多，时间一般在几秒内。另外，我自己将瓶放回相中时，还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了，吸管尽量不要深入瓶内，要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。

作者: duoduo 时间: 2011-11-28 15:09

我最近开始做细胞培养，结果先来的师兄弟和老师如临大敌，就怕我把他们给污染了。
嘿嘿，结果倒是见他们的有长菌的，我的倒是干净的很。总结起来还是无菌操作，怎么着我也先做了几年外科医生。习惯好。呵呵

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:17

HepG2细胞，荧光染色检测支原体。

图片附件: 82491650.snap.jpg (2011-11-28 15:17, 22.07 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9165

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:17

第二张：大侠们帮忙看看，鄙人没经验
有没有支原体污染啊？

图片附件: 23356879.snap.jpg (2011-11-28 15:17, 32.39 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9166

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:18

第三张支原体污染检测

图片附件: 43991659.snap.jpg (2011-11-28 15:18, 28.09 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9167

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:19

在上面的支原体检测图片里没大片的针状点，

但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体，

可是要有也不应该就这么几个啊？（细胞一共培养了40小时）

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 15:20 标题: 回复 #17 BUK 的帖子

这么大面积的污染，你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。其实我觉得在每次试验前，最好简略写一下操作步骤做到心中有数。这样可以避免实验中的忙乱。既然现在已经污染了，就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 15:23 标题: 回复 #17 BUK 的帖子

这么大面积的污染，看看有没有可能是培养基的问题。

作者: 小螺号 时间: 2011-11-28 15:25

我的细胞遭此大难！
还请高手们给我指教指教＞

图片附件: 51408218.jpg (2011-11-28 15:25, 40.42 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9168

作者: 小螺号 时间: 2011-11-28 15:25

再补一张高倍的

图片附件: 95063996.jpg (2011-11-28 15:25, 31.92 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9169

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 15:26 标题: 回复 #28 小螺号的帖子

你的细胞系念珠菌污染

处理办法：扔掉

善后办法，养成良好的无菌操作的习惯

拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口

多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

我做细胞半年了，由于有良好的无菌操作习惯，没有发生一次污染。

注意：我的所有培养基都是不加抗生素的哦^_^，相信我，没错的。

作者: 西子 时间: 2011-11-28 15:27

薰蒸是个好方法
不防试试!

作者: 蒲公英 时间: 2011-11-28 15:28

我的细胞极少污染，主要是超净台好！！操作前紫外灯照30分钟！

作者: 蒲公英 时间: 2011-11-28 15:28

大家帮我看看这是什么污染？

图片附件: 77241236.snap.jpg (2011-11-28 15:28, 41.27 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9170

作者: 一叶 时间: 2011-11-28 15:29

楼上这位战友的照片很不清楚！无法判断
不过可以告诉您判断污染的方法：如果是细菌污染，应该很快培基就浑浊了。如果是真菌感染，特别是初期感染，在低倍镜下可以看到小黑点，特别是成团的小黑点，要特别注意。如果无法确定，就换高倍镜，如果是死细胞，高倍镜下就可以分辨，而真菌高倍镜下仍然是小黑点。

作者: 阿敏 时间: 2011-11-28 15:30

各位高手，我们细胞培养室内的负压吸引器内，吸取的废液该如何处理才安全？另外，我看见连接玻璃吸管的塑胶管内已经张了很多霉斑（不能肯定是霉菌），请问管内的霉斑如何处理才好？是否会污染培养室的无菌环境？该如何处理呢？？

作者: 阿敏 时间: 2011-11-28 15:31

高手看看是何种污染

图片附件: 36087514.snap.jpg (2011-11-28 15:31, 66.31 KB) / 该附件被下载次数 11
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9171

作者: 阿敏 时间: 2011-11-28 15:32

高手看看是何污染

图片附件: 74961104.jpg (2011-11-28 15:32, 38.9 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9172

作者: 阿敏 时间: 2011-11-28 15:32

高手看看是和污染

图片附件: 86658759.snap.jpg (2011-11-28 15:32, 13.82 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9173

作者: BOSS2011 时间: 2011-11-28 15:33

培养箱水盘中放上饱和的硫酸铜溶液可以防霉菌，每半个月到一个月更换一次。

作者: @STAR@ 时间: 2011-11-28 15:33

这一张是真菌感染，看见其中的两个连在一起的花生样的东东了吗？那就是串珠样的真菌。

作者: HP007 时间: 2011-11-28 15:34

霉菌污染确实很烦，我去年暑假里做诱导，每次做到plating的时候就开始霉菌污染，前期的操作一点问题都没有，把信心打击的！这次做PC12细胞，也出现了这样的问题，酒精擦手，不说话，uv等都做过，还是不能完全避免，感觉好像不污染就象中头彩一样，ft。。。

作者: 盼盼 时间: 2011-11-28 15:35

你发的第二张图中呈串珠状的东西在倒置显微镜下可以看到运动吗？
望多多交流！

作者: 一叶 时间: 2011-11-28 15:36

看图片我个人认为就算支原体污染也不是很严重，还来得及补救。看了其他大侠放上来的图片，以上的图片不象有支原体。
温箱培养一定要加水吗？我的温箱从没加水培养细胞，我一直把它设为不加水状态。请问加水培养真的这么重要吗？

作者: 2541 时间: 2011-11-28 15:38

我是刚做细胞培养的，到目前为止一直都在和细菌、真菌、霉菌做斗争。真是伤心啊！
我知道我的操作肯定有很多不足的地方，我也一直努力改进着。可是结果就象alittle说的：好像不污染就象中头彩一样。
应该说我这里的环境还是不错的，别人的细胞就不长菌，而且生活的很快乐，而我做的细胞每次都会出现新的问题，长出不同的菌来。真是晕死了！
我想请问guagua：
有没有做过原代细胞培养啊？
还有是关于双抗的问题：
为什么有时会呈现粉红色？变色后效价是否降低了啊？

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:39

我们的方法是在水盘里加入微量的叠氮化钠,不知道大家有没有试过?从来也没发现过霉菌污染的现象.真不敢想象培养箱里出霉菌了该怎么办?
另外加水好象主要是为了保湿吧,我们还在里边放了些带盖的盘子,主要目的也是为了防止培养基快速蒸发

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:40

支原体污染电镜照片(X30k),煎蛋状和其他形状

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作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:40

支原体污染电镜照片（X30k）

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9175

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:40

支原体污染电镜照片（X12k）

图片附件: 67762670.jpg (2011-11-28 15:40, 30.58 KB) / 该附件被下载次数 6
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作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:41

支原体污染电镜照片（X12k）

图片附件: 55009887.jpg (2011-11-28 15:41, 30.07 KB) / 该附件被下载次数 2
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作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:41

支原体污染电镜照片（X12k）

图片附件: 60152815.jpg (2011-11-28 15:41, 33.28 KB) / 该附件被下载次数 3
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作者: avi317 时间: 2011-11-28 15:42

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，镜下快速运动，单个不成串。
图１：（*40, Olympus DP50）

图片附件: 87310180.snap.jpg (2011-11-28 15:42, 23.96 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9179

作者: avi317 时间: 2011-11-28 15:42

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，镜下快速运动，单个不成串。
图２：（*40, Olympus DP50）

图片附件: 16085055.snap.jpg (2011-11-28 15:42, 18.05 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9180

作者: avi317 时间: 2011-11-28 15:43

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，几小时即满布视野，镜下快速运动，单个不成串。
图３：（*40, Olympus DP50）

图片附件: 94268019.snap.jpg (2011-11-28 15:43, 23.02 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9181

作者: 园丁## 时间: 2011-11-28 15:43

你的培养液应该一两天内很快变混浊．刚开始小虫杆状成串，不怎么动，多了以后就不成串了，移动迅速，是这样吗？如果是，细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了。
洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌，因引起洋葱患病而得名，是医院感染病原菌之一。
洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中，与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌，尤其为免疫缺陷及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。它可以在无糖的培养基中生长。在医院环境中常可污染自来水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等，造成院内传播，导致多种医院感染，如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等，尤其采用导管植入进行治疗者，更容易引起感染。洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。耐药现象严重，治疗可选择复方磺胺甲繟唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。
参考文献：
洋葱伯克霍尔德菌86株的分布与耐药性尤荣开，等中国抗感染化疗杂志 2003年2月28日第3卷第1期

作者: avi317 时间: 2011-11-28 15:44

确是考虑培养基污染了，但小虫没有明显的成串状，生长很快，培养基很快变得似泥沙状混浊，移动速度非常快。

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:44

cell type: human osteoblast
medium became cloudly 1 day after contamination.

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 15:45

Cell Type: human osteoblast
Contamination: I dun know : )

图片附件: 57534630.snap.jpg (2011-11-28 15:45, 27.88 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9182

作者: dotaaa 时间: 2011-11-28 15:46

好像我的就是这个洋葱什么菌污染阿。晕

作者: 小螺号 时间: 2011-11-28 15:46

我的细胞总是有极细小的小黑点，也不见增长，好像是暗色的背景一样，但是细胞生长缓慢，想请问各位大虾，这是培养基的问题还是支原体染？

作者: windy+++ 时间: 2011-11-28 15:47

我的细胞也是无缘无故的污染，霉菌和细菌，有一瓶昨天看还好的，换了一次液，今天就有霉菌团了，郁闷！老板说会不会是培养基的问题，不过我感觉应该没有事情，因为我用相同的培养基在养着另外的细胞，一点事情都没有。感觉再小心都会出问题。

作者: dotaaa 时间: 2011-11-28 15:51

养了两个月的肿瘤细胞，真是郁闷，复苏了好几次，都是污染了。
起初细胞复苏后培养一直都长得不错，但是一到传代就过不了。总是可以看到细胞成团存在漂浮液中，然后细胞里面很多的空泡样东西。接着就是细胞变圆漂浮，培养基变得很混。老是找不到原因，曾经排除了培养瓶，培养基，胰酶，培养箱。请问哪个可以指点指点。谢谢。

作者: BUK 时间: 2011-11-28 15:51

看了图，对于我这个新手来说真是太有帮助了。现在我想我的细胞可能是霉菌污染吧。

作者: 969 时间: 2011-11-28 15:52

好烦啊，昨天细胞传代总共传了一个大培养瓶，21个Falcon的细胞培养皿，用了一个批次过滤的培养基血清，大培养瓶安全无事，培养皿中都污染了白色念珠菌，好明显的，是分了三个批次进行操作的，都是按照要求进行的，郁闷，哪位大虾指点一下啊，谢谢先了。

作者: 阿敏 时间: 2011-11-28 15:52

最近我的细胞也被污染了!
很类似于楼上的.现在也没找到好办法!

作者: duoduo 时间: 2011-11-28 15:53

我们的方法是在水盘里加入微量的叠氮化钠,不知道大家有没有试过?从来也没发现过霉菌污染的现象.真不敢想象培养箱里出霉菌了该怎么办?
另外加水好象主要是为了保湿吧,我们还在里边放了些带盖的盘子,主要目的也是为了防止培养基快速蒸发

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请问你们“微量的叠氮化钠”大约是多大量或浓度？

作者: HP007 时间: 2011-11-28 15:54

更正一下（这个是杆菌污染），其他的为支原体，

作者: yonger 时间: 2011-11-28 15:55

我污染的东西200倍下与你 2004-1-12的第二张图很象，请问你是否有结论是什么菌，可能来源何处？

作者: 中国特色 时间: 2011-11-28 17:01

以前用的是千分之零点二的叠氮化钠，由于在清洗水盘的过程中溶液飞溅出来，对实验人员是潜在的危害，叠氮化钠有毒，使用了一短时间就不在使用了。我们采样的是双蒸水中加Na2HPO4,使水饱和。因为高盐可以是细菌不能在里面生长，可以得到合适的湿度。每周补水。水多了可以补盐。《细胞实验指南》黄培堂－－译

作者: 969 时间: 2011-11-28 17:03

你的培养液应该一两天内很快变混浊．刚开始小虫杆状成串，不怎么动，多了以后就不成串了，移动迅速，是这样吗？如果是，细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了。
洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌，因引起洋葱患病而得名，是医院感染病原菌之一。
洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中，与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌，尤其为免疫缺陷及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。它可以在无糖的培养基中生长。在医院环境中常可污染自来水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等，造成院内传播，导致多种医院感染，如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等，尤其采用导管植入进行治疗者，更容易引起感染。洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。耐药现象严重，治疗可选择复方磺胺甲繟唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。
参考文献：
洋葱伯克霍尔德菌86株的分布与耐药性尤荣开，等中国抗感染化疗杂志 2003年2月28日第3卷第1期

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我的这个跟你的很相似cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1412253&sty=1&tpg=1&age=0')

作者: 泡泡 时间: 2011-11-29 14:49

前两天刚换了地方就出现了白色漂浮物
和我的很像怀疑是霉菌

作者: 泡泡 时间: 2011-11-29 14:59

今天发现培养瓶出现白色漂浮物，镜下呈乌云状周边围有一圈透亮圆珠，培养基颜色正常，细胞长势还好，请问各位高手是不是霉菌污染？

作者: hold住 时间: 2011-11-29 15:00

请问我的细胞有无污染？好像近三天隔夜就出现这种情况！但是每次换液后细胞贴壁还是挺好。

图片附件: 40489528.snap.jpg (2011-11-29 15:00, 62.17 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9225

作者: hold住 时间: 2011-11-29 15:01

换液后细胞贴壁很好。我没有再多的细胞啦，有没有什么办法？求救！

图片附件: 41356203.jpg (2011-11-29 15:01, 51.58 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9226

作者: 西子 时间: 2011-11-29 15:03

是霉菌吧？跟我的污染一样呀。哪位高手给指点一下。

作者: 西子 时间: 2011-11-29 15:03

跟我们的污染一样，你不觉得象白色念珠菌污染吗？

作者: bohe221 时间: 2011-11-29 15:04

我最近传了几块板子,用八道枪加的细胞。
加不同药物的不同浓度处理24小时后，发现每种药物的高浓度各孔均出现了团块状的物体，有点类似前面的一张图（念珠菌），我的疑问是：其他各孔均无此物体，请大家帮忙分析原因？

作者: 一叶 时间: 2011-11-29 15:05

请问我的细胞有无污染？好像近三天隔夜就出现这种情况！但是每次换液后细胞贴壁还是挺好

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我的细胞也曾有过类似污染，这里的老师说是酵母菌污染，表现为培养液表面悬浮大量的非定形的无结构样物质。也存在于细胞间。这种污染一半来自实验室。一旦发生，坚决弃之。

作者: XYZQ 时间: 2011-11-29 15:11

我看是霉菌污染
要不扔掉,或者加制霉菌素

作者: BUK 时间: 2011-11-29 15:12

这个是不是在10倍倒置显微镜下看如同网状，一团一团的啊？而且似乎对细胞的生长影响到不是很大？

作者: dotaaa 时间: 2011-11-29 15:13

请问有大虾知道“黑胶虫”的英文名称吗？

作者: 园丁## 时间: 2011-11-29 15:14

再补一张高倍的

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BODY,你那是典型个真菌污染!具体怎么菌种我有一下子查不到,但应该是属于深部真菌的有一种.如果细胞不是特别珍贵,就弃去不用了.如果还要继续北洋,可先用PBS洗4-5遍,然后按每毫升培养液加100微升的比例加入＂大扶康＂（临床常用，我们用病人用剩，瓶底残留的几毫升就足够了，不用另外购买），培养过夜，然后换成５０微升／每毫升继续培养２４小时，一般都行．
　　另外，那重真菌一般在呼吸道比较多．你们操作时戴口罩，穿隔离服吗？口罩一定要戴的哦．作为预防，可以在每毫升培养液中加２０微升大扶康，不会影响细胞生长．不过我不知道你样的是什么细胞．能预防最好不加．祝你顺利．

作者: 园丁## 时间: 2011-11-29 15:15

你那是典型的真菌污染!具体什么菌种我有一下子查不到,但应该是属于深部真菌的有一种.如果细胞不是特别珍贵,就弃去不用了.如果还要继续培养,可先用PBS洗4-5遍,然后按每毫升培养液加100微升的比例加入＂大扶康＂（临床常用，我们用病人用剩的，瓶底残留的那几毫升就足够了，不用另外购买），培养过夜，然后换成５０微升／每毫升继续培养２４小时，一般都行．
另外，那种真菌一般在呼吸道比较多．你们操作时戴口罩，穿隔离服吗？口罩一定要戴的哦．作为预防，可以在每毫升培养液中加２０微升大扶康，不会影响细胞生长．不过我不知道你样的是什么细胞．能预防最好不加．
要注意污染物处理，别形成二次污染哦．
祝你顺利．

作者: BOSS2011 时间: 2011-11-29 15:15

好像是HepG2,我也碰到过的,很是头t疼.就是不知什么原因,传代会出现.而且一加G418细胞就消融了,好像蚕食似的,原因不明!

作者: duoduo 时间: 2011-11-29 15:16

应该是血清污染了，我也碰到，换了血清后就没事了！

作者: duoduo 时间: 2011-11-29 15:17

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，镜下快速运动，单个不成串。
图２：（*40, Olympus DP50）

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应该是血清污染了，我也碰到，换了血清后就没事了！

作者: 盼盼 时间: 2011-11-29 15:17

我们用鸡胚制备成纤维细胞，结果还有像Jeffrey88 一样的虫虫，其他的材料都没问题，用别的实验室的鸡胚就没有污染。可能是支原体。国内外研究表明，95％以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii），为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，尤其是游动支原体(M.mobile)，来源于水体污染。国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。尤其是游动支原体来源于水体污染，喜欢在玻璃上游动，如果细胞密度大，它不动，因为没有玻璃空间，但一旦细胞密度小，则会自由扭转、游动，400倍光镜下看得很清楚。有这方面的问题可以请教：日本的Miyata博士，我在日本跟他见过一面。

作者: yonger 时间: 2011-11-29 15:18

看到楼上第二张图片右下角的明亮圆圈了么？我的细胞里经常会有，应该是酵母菌污染，不知道对不对

作者: tianmei001 时间: 2011-11-29 15:19

看到上面很多战友细胞都被霉菌污染了，而很多是由于培养箱污染的原故，我想说的是其实这种污染是很容易避免的，我养细胞近一年了，养过很多种细胞，还从来没发生过类似的情况，培养箱的水如上面有位战友所讲，加叠氮钠使其浓度到千分之零点二的（有剧毒，配置是小心勿沾到皮肤上）就可以防腐了，我们在第一使用培养箱或万一被污染的情况下通常的做法是在常规的用千分之一新洁尔灭和75%的酒精搽拭培养箱后，加入消毒过的水（普通的双蒸水高压即可，叠氮钠可先配成1%贮存浓度，用不着消毒因为微生物是不能成活的），在往培养箱中加水前放细胞室开紫外灯照20-30分钟，此时每500毫升的水加1毫升的贮存浓度叠氮钠，混匀，到入培养箱中即可。
上面的过程我想很多人是这么做的，应该没问题，至少你首次不会带入污染，我想提醒的是在每次从培养箱中取出细胞到显微镜下观察前，一定要打开细胞室的紫外灯照20-30分钟（手伸进培养箱前当然要用酒精棉球搽拭，不过一般都能做到），观察完将细胞放入培养箱前用酒精棉球搽拭细胞培养瓶后再放入。我经常看到有些人是一去细胞室先从培养箱中取出细胞观察，再做决定，如果需要处理则再开始打开细胞室的紫外等消毒。这样做是省事但极易带入细菌、霉菌等造成污染，因为你衣服上（哪怕你穿细胞室的工作服但没照过）以及细胞间的环境中就有细菌、霉菌等微生物，当打开培养时空气一流通这些微生物就有可能进入，而培养箱内的环境又极适合微生物的生长。所以我说宁可麻烦一点，但也值得！实验只要不因失误重做哪怕准备时间长一点做起来都算快的。

作者: 蒲公英 时间: 2011-11-29 15:22

我们的方法是在水盘里加入微量的叠氮化钠,不知道大家有没有试过?从来也没发现过霉菌污染的现象.真不敢想象培养箱里出霉菌了该怎么办?
另外加水好象主要是为了保湿吧,我们还在里边放了些带盖的盘子,主要目的也是为了防止培养基快速蒸发

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请问：叠氮钠是怎么用法？有没有具体标准？多谢！

作者: @STAR@ 时间: 2011-11-29 15:22

支原体污染在光镜下也能看到吗？具体形态是啥样的？有人说支原体污染没有可见表现。希望不吝赐教，先谢了.

作者: 小螺号 时间: 2011-11-29 15:24

我的MCF7/ADR变成这样了，双抗增至7％也无效，一半细胞脱壁、死亡，不知道是什么原因，请大侠们帮忙。（20*20倍）

作者: 园丁## 时间: 2011-11-29 15:27

霉菌污染确实很烦，我去年暑假里做诱导，每次做到plating的时候就开始霉菌污染，前期的操作一点问题都没有，把信心打击的！这次做PC12细胞，也出现了这样的问题，酒精擦手，不说话，uv等都做过，还是不能完全避免，感觉好像不污染就象中头彩一样，ft。。。

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原来我们这里也有霉菌感染的，不过后面在培养基里加上了0.5％的大福康（原来的双抗各改为0.25％的青霉素和链霉素），效果还可以！你可以试试！！！

作者: birdfish 时间: 2011-11-29 15:27

我培养的肾小管上皮细胞（HK-2），购买的细胞株。用的是DH/F12，培养前将培养基37度水浴过，培养一天，可以见上清有许多像螺旋体样的丝状物，好像从细胞分泌的，不动，但是随着培养越来越多。还有好多的黑色渣子，传代后还有，但是细胞生长的速度还可以。3天就张满T25的培养瓶。请教是什么原因，如何避免呢？

作者: 阿敏 时间: 2011-11-29 15:28

re:各位的环境就是好，我的培养箱水盘几乎一个星期擦一次（因为不只一个人作实验），有的时候还能看到霉菌长出来，真是担心我的半箱细胞，如果要污染，我只有跳楼了！呵呵，各位对这个有什么办法没？

1:不锈钢水槽倒入100%酒精，点燃。别摸哟，很热的。
2：然后用塑料槽放点（250ml）5%硫酸铜溶液。效果还行吧
我原来也有同样的问题，水槽下面有一层黄色的霉菌。

要是再不行就要大干了

把无菌间的东东全停了然后用10%福尔马林（甲醛原液也行）熏蒸，熏蒸时把你的培养箱和柜子的门打开里面的东西都拿出来。此前要搞卫生哟。这一熏，你一个星期也别想进去干活了。
然后就是前面说的两步了。
当然水槽里可以加一点防腐剂嘛（这个我没加过听别人说的）。

作者: 阿敏 时间: 2011-11-29 15:28

re:我的MCF7/ADR变成这样了，双抗增至7％也无效，一半细胞脱壁、死亡，不知道是什么原因，请大侠们帮忙。（20*20倍）

像是真菌污染，不知道是否游动，可以加两性霉素B 或制霉菌素 10倍剂量冲击用药，不要过早换液等到液体变黄再说。一般5天以后就会见效，同时可加入硫酸庆大（抗支原体）10倍剂量联合用药。
如果没有抗真菌药可以购买人用的氟康唑（片剂，非常贵3片10元）按血药浓度5ug/ml为1倍浓度计算配成100倍到10倍的治疗液，加入10%血清然后过滤除菌。一般可以起到抑制效果，但是不如两性霉素和制霉菌素效果好。
救急还是可以用的。

对了再问问是不是污染物在细胞两极附着，随着时间的延长，细胞多数发生脱壁并且发生崩解。
你可以把培养物作增菌试验，然后定性。同时可作药敏试验。

作者: 33号 时间: 2011-11-29 15:30

看这个，支原体污染

图片附件: 25725225.jpg (2011-11-29 15:30, 20.81 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9227

作者: windy+++ 时间: 2011-11-29 15:33

传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。用PBS洗洗，细胞竟然还活着。下面是20倍镜下得视野。

图片附件: 15709742.snap.jpg (2011-11-29 15:33, 10.5 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9228

作者: 969 时间: 2011-11-29 15:34

各位大侠看看这个是什么污染阿？
细胞好像不受这种东西的影响。换液后贴壁良好。

图片附件: 89669072.snap.jpg (2011-11-29 15:34, 22 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9229

作者: 泡泡 时间: 2011-11-29 15:36

给培养的水盘里加0.02％的叠氮钠可以有效的预防真菌污染，尤其是夏天气温高的时候。

作者: sunnyB 时间: 2011-11-29 15:37

我的细胞是否污染支原体?

作者: 阿敏 时间: 2011-11-29 15:48

我有同感，最重要的是无菌操作。有一次同时给两瓶细胞换液，一瓶长出真菌，一瓶安然无恙。超净台我是用前后都要用酒精消毒，感觉最深刻的一点是：进入超净台时袖口要紧，必须用酒精擦手。其他的只要不犯原则性的错误就没什么了。

作者: 8s5g 时间: 2011-11-29 15:49

我的细胞污染的动态过程,怀疑是霉菌污染：
亮的是我们最早怀疑是霉菌污染的东西：

[ 本帖最后由 8s5g 于 2011-11-29 15:50 编辑 ]

图片附件: 83877409.snap.jpg (2011-11-29 15:50, 12.04 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9230

作者: 8s5g 时间: 2011-11-29 15:50

我的细胞污染的动态过程,怀疑是霉菌污染：
1天后：

图片附件: 36115555.snap.jpg (2011-11-29 15:50, 40.16 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9231

作者: 8s5g 时间: 2011-11-29 15:51

我的细胞污染的动态过程,怀疑是霉菌污染：
2天后：

图片附件: 38296257.snap.jpg (2011-11-29 15:51, 49.18 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9232

作者: flower-201 时间: 2011-11-29 15:52

各位高手看看这是什么污染阿？

图片附件: 90894413.jpg (2011-11-29 15:52, 52.81 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9233

作者: flower-201 时间: 2011-11-29 15:52

各位高手看看这是什么污染阿？

图片附件: 44161125.snap.jpg (2011-11-29 15:52, 25.9 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9234

作者: TAT 时间: 2011-11-29 15:53

神经细胞培养的满好，是否应该加点两性两性霉素和青霉素

作者: TAT 时间: 2011-11-29 15:54

神经细胞培养的满好，是否应该加点两性两性霉素和青霉素

作者: TAT 时间: 2011-11-29 15:54

加两性霉素和青霉素，对神经细胞可能没有影响。

作者: HP007 时间: 2011-11-29 15:54

你这个像是真菌感染,

作者: HP007 时间: 2011-11-29 15:55

错了,补充一下
看起来像是真菌感染,

作者: duoduo 时间: 2011-11-29 15:56

flower-201的看起来象是衣原体感染

作者: duoduo 时间: 2011-11-29 15:56

我的细胞污染的动态过程,怀疑是霉菌污染：
1天后：

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你那个可能是霉菌污染，对于是什么就不知道了。其实霉菌污染很好判断的，在发生你那张图片之前培养液里应该有许多小黑点背景象象沙子一样的，那就是霉菌单个细胞没聚集以前的形态，等到发现成团存在是已经来不及了。

作者: duoduo 时间: 2011-11-29 16:09

我培养的肾小管上皮细胞（HK-2），购买的细胞株。用的是DH/F12，培养前将培养基37度水浴过，培养一天，可以见上清有许多像螺旋体样的丝状物，好像从细胞分泌的，不动，但是随着培养越来越多。还有好多的黑色渣子，传代后还有，但是细胞生长的速度还可以。3天就张满T25的培养瓶。请教是什么原因，如何避免呢？

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我养细胞时也发现培养液里有许多黑渣滓，但细胞也没问题。后来发现是血清质量不好，我们用的是四季青的胎牛血清，从化冻开始就发现里面有一些沉淀而且经灭活后更多。不知道你的这种是不是这种情况。

作者: duoduo 时间: 2011-11-29 16:09

今天发现培养瓶出现白色漂浮物，镜下呈乌云状周边围有一圈透亮圆珠，培养基颜色正常，细胞长势还好，请问各位高手是不是霉菌污染？

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老兄，你的培养瓶中是不是有气泡漂浮在液体上，有气泡就会出现镜下的一圈透明圆珠，自己一试就知道了。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-29 16:10

叠氮化钠 (三氮化钠)
[英]SODIUM AZIDE (AZIDE)

【编号】8-5114(3071)

【RTECS号】UY8050000

【CAS号】26628-22-8

【分子式】NA-N3

【分子量】65.02

【比重】1.846

【熔点】275℃ 分解

【急性毒性】口服-大鼠 LD50: 27 毫克/公斤; 口服-小鼠 LD50: 27 毫克/公斤

【毒性分级】剧毒

【职业标准】TWA 0.3 毫克/立方米; STEL 0.9 毫克/立方米

【爆轰气体危险特性】与重金属, 重金属盐混合易爆

【可燃性危险特性】遇酸分解易爆炸叠氮酸

【储运事项】库房通风低温干燥; 与酸, 重金属及重金属盐, 食品分开储运

【灭火剂】雾状水, 泡沫

作者: tianmei001 时间: 2011-11-29 16:10

个人认为你的细胞是污染了霉菌

作者: tianmei001 时间: 2011-11-29 16:10

再补一张高倍的
看了老兄得发得照片，才知道我养得细胞也是真菌污染，回去要好好消毒了，谢谢各位了！

作者: 中国特色 时间: 2011-11-29 16:11

大家好！
我最近想分离原代细胞！
但是我做了2次都出现了同一个问题：（和前面一位战友的情况差不多）
-----------培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，几小时即满布视野，镜下快速运动，单个不成串。而且的培养液在一两天内很快变混浊．即使换液了，第2天看时还是，培养瓶里面象铺了一层沙一样（似泥沙状混浊）。

楼上分析是洋葱佰克霍尔德菌污染。不知怎么解决？

战友说”应该是血清污染了，我也碰到，换了血清后就没事了”---但是我做第2次原代培养的时候是重新配的培养基，结果也是污染了！

更怪的是，我接种细胞的时候密度还很大（很多圆圈亮点般细胞），但到第2天看时发现细胞反而减少了，而且没有细胞贴壁（细胞依然是圆圈亮点状），有人说是我分离的时候酶消化时间过长了。
我想，酶消化时间长也好，污染也好（接种后污染），但总要有细胞贴壁的吧？？？我做了2次都没有看到教好的细胞贴壁！

作者: 蒲公英 时间: 2011-11-29 16:12

刚刚开始细胞培养，做的是原代的，但是却在培养细胞周围发现了这样的微生物（图中的分布的小亮点），一直在做振荡式运动，但运动的范围仅仅限于自身所在的领地，并不是像有些同学所说的在做布朗运动，所以请教一下大家，这是什么污染，该如何解决？

图片附件: 15070290.snap.jpg (2011-11-29 16:12, 18.19 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9235

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-29 16:14

我每次操作前不光酒精擦手，还戴手术手套！

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-29 16:15

QUOTE:

原帖由 中国特色 于 2011-11-29 16:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

大家好！
我最近想分离原代细胞！
但是我做了2次都出现了同一个问题：（和前面一位战友的情况差不多）
-----------培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，几小时即满布视野，镜下快速运动，单个不成串。而且的培养液在一两天内很快变混 ...

我也碰到了类似情况,做了N次,都没有做出来,后来只好有组织块法培养,但是第三天培养瓶底出现黑色颗粒状东西,酶消后接种到24孔板,板底第二天也出现黑色颗粒状东西,细胞不见生长,这是怎么回事呢?

作者: BUK 时间: 2011-11-29 16:16

是个典型的真菌污染，可能是你操作过程中进去的，或者是你用的培养箱不合格等原因

作者: abc816 时间: 2011-11-29 16:18

垂体瘤原代培养真菌污染，现在正从失望到绝望的路上走着......

图片附件: 76423129.snap.jpg (2011-11-29 16:18, 42.18 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9236

作者: dotaaa 时间: 2011-11-29 16:21

上面的好像是霉菌污染，第二张片子中有明显的串状生长的真菌菌丝！我的也是这样，但是他的存在好像并不防碍细胞的生长！处理此种现象我得方法是，将之消化不过要监视其消化过程，以免消化过大将细胞也消化掉。然后换液，继续培养，待细胞贴壁后再消化，经过三五次消化后，这样便可以将其除掉！方法就是土了点，但是很实用。如果有钱，当然是另换了！我的现在生长不错！！！不妨试一试！

作者: 小螺号 时间: 2011-11-29 16:22

用灭菌或许可以，但为什么不在水槽中加点硫酸铜呢。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-29 16:23

我的细胞倒是很少污染啊
有一次打开培养瓶口，到外面走廊转了一圈，也没污染
所以感觉只要严格按照细胞培养的规则操作
一般都不会污染

真是不厚道唉！在污染板块这么说，是想吃臭鸡蛋吧！
“打开培养瓶口，到外面走廊转了一圈”还是“严格按照细胞培养的规则操作”呀！！！汗

污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！但对新手来说，又满头雾水！来说说我的经验，决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！
我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）
另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！
还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！
使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-29 16:24

酶消化时间长也好，污染也好（接种后污染），但总要有细胞贴壁的吧？？？我做了2次都没有看到教好的细胞贴壁！

如果是在细胞贴壁前污染，细菌会阻止细胞贴壁的！细胞不贴壁，一定不是接种后污染！除非接种后4～6h污染，可能性不大吧！

作者: tianmei001 时间: 2011-11-29 16:34

我的细胞头两天贴壁很好，但今天突然成片脱落，但是细胞间还是紧密连接，就像卷席子一样。不知道是细胞瓶问题还是培养基问题。另外请教1640配好后是什么颜色，深红？浅紫红？
谢谢！

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 10:08

这是刚解冻的Hyclone血清中观察到的.血清中有不少这样的团块,在镜下观察明显看到大量的黑色颗粒游离出来,缓慢的移动.经过一小时左右,团块几乎成为透明状.

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作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 10:08

你的污染图片有特色，我看挺严重的污染周围居然仍有贴壁的细胞，恐怕培养瓶的外壁有问题，你培养液是不是弄到外壁上，或者你孵箱的搁板污染了.

作者: 缘yuan 时间: 2011-11-30 10:09

各位战友看看我的细胞是出什么问题？图片中是红细胞，但有一大串杆状似乎是细菌感染，我是新手不能肯定，请高手给点指教。

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图片附件: 46247115.snap.jpg (2011-11-30 10:09, 33.4 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9262

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 10:11

好贴啊，早看到我就将我的细胞污染PP穿上来了，前段时间被真菌骚扰，有念珠菌和另一种树枝状的真菌，用两性霉素B效果好

作者: 缘yuan 时间: 2011-11-30 10:12

复苏后细胞培养及传第一代后前两天还挺好，再过两天就这样了，晃一晃呈泥沙状

图片附件: 96294412.snap.jpg (2011-11-30 10:12, 67.13 KB) / 该附件被下载次数 4
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作者: HP007 时间: 2011-11-30 10:12

郁闷！我的细胞今天也发现问题。昨天把培养瓶里的细胞消化后分种于3.5cm*1.0cm的培养皿中，今天早上发现在培养皿的细胞出现了一些圆形，透亮，漂浮于培养液中的东东，但同时在培养瓶中的细胞却没有这种现象。到底是什么呢？请各位指教。

作者: 西子 时间: 2011-11-30 10:15

可能是小气泡吧，加入培养皿时混如的气泡！！

作者: 中国特色 时间: 2011-11-30 10:15

今天把图片剪切了一下，请各位帮忙看看到底是什么污染？昨天把培养液换掉以后马上观察没有见到这些圆形物（加圈的），可是今天早上再观察发现又有一些，只是比昨天少，而且似乎是从细胞中分泌出来的。

图片附件: 10141566.jpg (2011-11-30 10:15, 23.83 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9264

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 10:18

污染的真菌，霉菌之类的东西，跟一般细胞的大小差多少？我做原代培养，观察到好多圆型的东东，跟没贴壁的细胞差不多大，但是却不影响正常细胞生长，这是污染么？

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:19

看到这个贴子就像找到了救星一样啊!我在原代培养SD大鼠的乳鼠的心肌细胞,差速贴壁1.5小时后已经可以看到成纤维细胞贴壁变形,并且数量挺多的,但24小时后有大量细胞死亡,虽然有些地方能够看到心肌细胞成簇的聚集且有跳动,但除了那几簇细胞外,其他地方几乎见不到细胞了,却见到了以下图片的情况.我知道可能是消化过程中还存在问题,但我觉得差速贴壁1.5小时后细胞贴壁情况这样好,24小时内就发生了这样大的变化，我担心是有污染，我想排除一下这方面的原因，麻烦各位战友能帮我看下这张图片是怎么回事呢？先谢谢大家了！

这张图片是的圆圆的东西是没有贴壁的心肌细胞吗？那些不规则的，黑黑的东西是碎片吗？还是杂质？

图片附件: 84464681.snap.jpg (2011-11-30 10:19, 38.94 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9265

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:19

第二张：

这张一长条的是什么东西啊？难道是塞试管口棉花丝？

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作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:19

第三张：

这个好象晶状体样的东西是什么啊？同学说是水滴凝集，是这样吗？

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9267

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:20

第四张：

和第三张相似，只是形状不同．

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作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:20

第五张：

中间那两个象蝴蝶一样的东西是什么呢？

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作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:20

第六张：

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9270

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:21

第七张

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9271

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:21

第八张

那一大片围成椭圆形的东西是什么呢？

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作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:21

第九张

图片附件: 49512644.snap.jpg (2011-11-30 10:21, 31.57 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9273

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:22

第十张:

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9274

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:22

第十一

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9275

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:22

第十二

图片附件: 33808907.snap.jpg (2011-11-30 10:22, 30.53 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9276

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:23

第十三张(最后一张)

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作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 10:23

看到你的这张高倍的就差不多可以肯定是白色念珠菌污染了

作者: 盼盼 时间: 2011-11-30 10:23

在我看来你所圈上的不是污染，而象是正在分裂的细胞。如你所述，这些东东并不影响细胞的生长，所以可以排除污染。
不知道你养的是什么细胞，是不是lovo？有些贴壁细胞就在先分裂完了以后再次贴壁的。仔细看看你圈上的那些，有好几个都是两个细胞的样子吧，很可能就是正在的细胞。

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:24

请问你是说我发的照片是白色念珠菌污染吗?是指第几张呢?请赐教.

作者: 小螺号 时间: 2011-11-30 10:25

这是什么污染？

作者: 盼盼 时间: 2011-11-30 10:26 标题: 回复 #154 caihong 的帖子

指的第二张，第一张看不清的，不好肯定。

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-30 10:28 标题: 回复 #151 caihong 的帖子

第3张及后面的几张为什么看不到细胞呢？我觉得是不是观察的层面不对，很像培养瓶底突起的玻璃呢。

作者: caihong 时间: 2011-11-30 10:28 标题: 回复 #157 笑弯了腰的帖子

不好意思啊,我没有在图片中讲清楚,从第3张开始,周围就几乎没有细胞了,我是用6孔板养的,是新板呢.所有的都是在倒置显微镜下看的,倍数400到500(因为还有相机的调焦呢),所以倍数不确定的.
请教bx1018,你看出什么问题了吗?能否赐教?

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-30 10:29

我培养的海马神经细胞近期也老是出现黑色团状的东西，不像是污染因为两天培养液并不变浑浊，细胞也不大批死亡，只是长得慢，感觉像是收到抑止，郁闷！请高手门指点一下

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 10:29 标题: 回复 #151 caihong 的帖子

to caihong:
我觉得后面的几张不像是污染，很像玻璃或者是培养器皿上的突起，因
为瓶壁并不是非常光滑，会有许多的突起。如果你通过调焦看到了这一层面，那么就会有一些不规则的就像你拍的那样子的图形，还会有许多的小点等等，就像是些碎片，或者是冬天窗上的冰花一样，（不知你看到的是不是这样子），看不到细胞，因为细胞并不在这个层面上。你可以在你的培养器皿上加一些洁净无菌的液体慢慢调焦，大概就会看到这种景象了。当然，有时仅靠几张图片来看很难确定，你可以问一下你周围做这方面的老师，亲眼所见自然是最清晰明白的。
还有一张上面有条带，那个可能是你的瓶壁被吸管或者其他器械划了，就会有一串点或者小箭头样组成一条线，我做时，也经常看到，因为用组织块进行原代培养，接种时不可避免的就画上痕迹，就跟你拍得差不多，所以那张应该不是污染。
再有就是第一张吧，你说的那些圆得好像没有贴壁的细胞，我觉得有可能是没有贴壁的，就我自己的经验来看，如果细胞没有消化好，几个细胞连在一起，就比较难贴壁，但有时会沉在底部，看起来也比较亮。
这些只是看图看的，因为我做培养遇到的问题太多，经常不知什么原因就over，所以经常找老师问。你也一样，多问一下。
祝实验顺利！

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 10:30

请大家帮我看看这是什么菌污染？

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9278

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 10:31

请大家帮我看看这是什么菌污染？

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9279

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 10:31

请大家帮我看看这是什么菌污染？

图片附件: 63210955.snap.jpg (2011-11-30 10:31, 32.39 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9280

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 10:32

请大家帮我看看这是什么菌污染？

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9281

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 10:32

请大家帮我看看这是什么菌污染？

图片附件: 16419507.snap.jpg (2011-11-30 10:32, 31.04 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9282

作者: 缘yuan 时间: 2011-11-30 10:36

请问你们“微量的叠氮化钠”大约是多大量或浓度？

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我的实验室也用，大约是千分之一，就可以了，而且一直就没有发生过污染，或者可以加保和硫酸铜。

作者: 969 时间: 2011-11-30 10:36

培养箱底盘中的水可以加入叠氮钠,0.05-0.2%，我们实验室一直这样用，效果不错。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 10:37

请大家帮我看看这是什么菌污染？

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不是污染,重新调节一下焦距,你看的不是细胞层面.
楼上所列的四副图片均不是污染.
下面我提供一张以前的真菌污染图片,实验过程中,遇到过几次真菌污染,多为白色念珠菌很好辨认，但是下面这张因为以下特点，刚开始并未定污染，直至长的越来越大最后才定，并存图数张。特点如下：生长均为克隆样，很少见到念珠菌一样漂浮的小的孢子，生长缓慢，不影响细胞生长，5天左右液体仍然是清的。刚开始以为是酒精灯的芯，后来发现有生命力，定为真菌污染，弃掉。当时细胞仍生长良好。

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作者: 爬呀爬 时间: 2011-11-30 10:38

本人包装腺病毒所培养的293细胞出现污染，拿到医院检测中心检测证实为格兰氏阳性杆菌。经过摸排，认定罪魁祸首是转染试剂盒已遭污染。

图片附件: 20032449.jpg (2011-11-30 10:38, 20.65 KB) / 该附件被下载次数 2
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作者: 白白的 时间: 2011-11-30 10:39

请问真菌是长在细胞表面的吗?昨天我的细胞全都污染了,在高倍镜下可以看到细胞表面有一种很小的虫子在爬动,培养基没有变得很黄,很奇怪!真的不知道是哪里的问题.

作者: tieshazhang 时间: 2011-11-30 10:40

完了，我的细胞也是这个东西污染的！问下，抗生素能不能较好的抑制呢？

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 10:40

70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶子的口.
严格灭菌消毒，一般用灭菌锅对玻璃器皿等灭菌

本人培养基也不加抗生素，细胞也没有污染过

严格按照操作流程，一般是不会污染的

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 10:41

不知道细胞里的小黑点是不是污染，细胞外面也有些，有的会动，有增多的迹象，但细胞液还是很清，不浑浊。细胞生长良好，昨天传代了。总有小黑点觉得很不舒服，怎么除掉？谢谢！

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作者: BUK 时间: 2011-11-30 10:41

HSC-T6真菌污染

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作者: BOSS2011 时间: 2011-11-30 10:42

我的细胞遭此大难！
还请高手们给我指教指教＞

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你养的是什么细胞啊？是不是污染了纤维细胞啊。

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 10:42

"黑胶虫"污染 10×20,可以看见动

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作者: yychen 时间: 2011-11-30 10:43

我用1640 培养U937 ，镜下总是有小黑点，不知是不是污染了？

作者: yychen 时间: 2011-11-30 10:43

请大家帮忙看看我的细胞是不是支原体污染了。
用Hoechst 33342染色后拍的片子，感觉胞浆里有颗粒状的东西，跟网上描述的支原体污染很像，但又不敢确定。
谢谢！

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作者: 中国特色 时间: 2011-11-30 10:44

真菌污染,赶快扔掉,消毒,保护其他细胞.

作者: flower-201 时间: 2011-11-30 10:45

PC-12细胞
本人做实验时有时求快，在操作前都没有用紫外灯照半小时，我想污染的原因就是这吧。
特征：发现培养基中出现大量的小白点，怀疑是细菌感染，但两天内没有发现混浊（我以前细胞也受大肠杆菌感染，培养液一天内就变黄了而且混浊，打开盖子还会有***的臭味。。。）

所以请教一下各位高人，我的细胞能救活吗？这细胞对我很重要。
我已经用了正常量的30倍双抗，但今天看细胞贴壁了，但小白点还在，老师说是隐性感染。。。。
Thanks

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作者: windy+++ 时间: 2011-11-30 10:46

我也碰到和二丫头466一样的情况，有小黑点，每天换液也去不掉，细胞生长缓慢，形态不佳，培养液不变色，个别孔中有很多小亮点，用了sigma的泰乐菌素，细胞开始生长，但小黑点依然在，高倍镜下可见其活动，速度不算太快，请问这是什么东西？从哪里来的？怎么才能彻底去除？

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 10:47

请大家帮我看看这是什么菌污染？

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哈哈,这肯定是玻璃培养瓶底部的花纹,,,不是什么污染,,,再仔细调焦看看...

作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 10:53

我也碰到和二丫头466一样的情况，有小黑点，每天换液也去不掉，细胞生长缓慢，形态不佳，培养液不变色，个别孔中有很多小亮点，用了sigma的泰乐菌素，细胞开始生长，但小黑点依然在，高倍镜下可见其活动，速度不算太快，请问这是什么东西？从哪里来的？怎么才能彻底去除？

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应该是细胞状态不好，部分细胞死后的碎屑而已。
是的确可以看到动的。

作者: 克隆鱼 时间: 2011-11-30 10:56

真菌污染，树枝状的。高倍镜

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作者: 克隆鱼 时间: 2011-11-30 10:56

真菌污染，树枝状的

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作者: 一叶 时间: 2011-11-30 10:58

应该是比较典型的真菌污染。菌丝体可清楚的看到。办法只有一个，迅速去出所有已经或疑似污染的培养瓶或培养皿，加入84消毒液，浸泡2小时以上后倒掉。尽快清洗、消毒培养箱。

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 10:59

PC-12细胞
本人做实验时有时求快，在操作前都没有用紫外灯照半小时，我想污染的原因就是这吧。
特征：发现培养基中出现大量的小白点，怀疑是细菌感染，但两天内没有发现混浊（我以细胞也受大肠杆菌感染，培养液一天内就变黄了而且混浊，打开盖子还会有***的臭味。。。）

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我也碰到了一模一样的情况，不知道到底是什么细菌污染？有没有办法除掉

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 10:59

细胞污染是个很常见的问题，无论发生在哪个人身上，都很郁闷，很多意想不到的因素导致污染，我认为杜绝污染的关键是实验操作者要时刻有无菌观念，每一道工序都要认真，按要求细心操作，做到三思而后行，当然大环境也是十分重要的，但是如果条件一般，只能多多从自身找原因了，祝正在细胞培养的战友们好运！！

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 11:02

我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。

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是的另外在超净台操作过程中的过火也十分的重要

作者: one 时间: 2011-11-30 11:03

我的细胞也出现了象楼上二位所提到的情况,但是原代的时候并没有这些黑点,传代后,细胞内及细胞间就出现了这些小黑点,黑点散在分布,密度就相当于前两位战友贴图的那样,不多,是贴壁的,晃动培养板黑点都不会动,而且也没有增多的迹象,但是细胞生长很缓慢(不过我看还是有很多细胞是处于分裂象的).换液也不能将黑点去除.
我一开始怀疑是细胞碎片,但是现在很怀疑是遭到了污染.细胞生长缓慢的另一个原因是我使用的培养液已经有一个半月了,也估计其内的谷氨酸分解了,细胞的营养不够.以上是我培养的细胞的情况,想请大伙给我分析一下是不是污染了.

作者: one 时间: 2011-11-30 11:04

不知道细胞里的小黑点是不是污染，细胞外面也有些，有的会动，有增多的迹象，但细胞液还是很清，不浑浊。细胞生长良好，昨天传代了。总有小黑点觉得很不舒服，怎么除掉？谢谢！

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我的细胞里面的小黑点都会动，而且有增多的迹象，并且细胞液比较混浊。

作者: 小鱼鱼 时间: 2011-11-30 11:05

真菌污染：（倒置）

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作者: tieshazhang 时间: 2011-11-30 11:06

各味大虾，帮我看一下这是什么污染？细胞前几天状态还可以，前天细胞周围开始出现黑点，不知道是什么东西，今天背景出现大量黑点，而且细胞形态也不是很好，但培养液颜色无明显变黄，也无浑浊。并且细胞有很多脱落。我想是细胞受到污染了，但是不是很确定，而且不明白是什么污染。请各位帮忙指点一下。
40倍，右边为正常细胞，可见细胞周边有小黑点，光亮圆点为脱落细胞，左边空白区域有很多小黑点。

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作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 11:07

你染的是核不是胞浆另外亮蓝色的是染色质凝集是细胞凋亡的现象
我不知道你说的胞浆颗粒在哪里

作者: 蒲公英 时间: 2011-11-30 11:08

我的细胞也出现了类似于tieshazhang的污染,在显微镜下可看到很多黑点,培养液仍然很清澈.只是黑点没有增多的状况,似乎不影响细胞生长.不知是什么污染.
另外,我的细胞里还有很多碎片状物质,在镜下看背景很杂,细胞生长也非常慢,不知是不是污染.请各位大侠指教.
我是新手,怕极污染,我做细胞的条件也较艰苦,没有细胞室,是在做微生物的实验室做的,不知怎样才能尽量减少污染呀.

作者: dotaaa 时间: 2011-11-30 11:09

呜～
我的3T3成纤维细胞也被念珠菌污染了。昨天我又拿了一次细胞株，这次我连传代也不敢自己传了，让一位前辈帮我传的代（因为我是新手）结果今天又发现里面有，很少要很仔细才能发现。我现在还有什么挽救的方法吗？可以肯定不是培养基的问题，那又是什么原因引起的呢？请教各位高手。
唉！现在连想死的心都有呀

作者: ffooll 时间: 2011-11-30 11:11

请大家帮忙看看是什么污染？
倒置显微镜

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作者: 中国特色 时间: 2011-11-30 11:11

刚刚开始细胞培养，做的是原代的，但是却在培养细胞周围发现了这样的微生物（图中的分布的小亮点），一直在做振荡式运动，但运动的范围仅仅限于自身所在的领地，并不是像有些同学所说的在做布朗运动，所以请教一下大家，这是什么污染，该如何解决？

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这个东西是不是在培养业里面晃得？是不是凋亡细胞？

作者: dotaaa 时间: 2011-11-30 11:12

大家好，我养的Hela细胞，细胞质内有黑色颗粒状东西，培养液清澈。请问可能是什么污染！

作者: ffooll 时间: 2011-11-30 11:13

放大图

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作者: ffooll 时间: 2011-11-30 11:14

怀疑为细菌污染，请高手指教！

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 11:14

培养的是MCF-7人乳腺癌细胞（贴壁细胞），图为高倍镜，圈出的为MCF-7，其余的不知道是什么污染？

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 11:15 标题: 回复 #200 ffooll 的帖子

是不是霉菌啊？？？？？？？？？？

作者: abc816 时间: 2011-11-30 11:15

霉菌的孢子囊！

作者: hold住 时间: 2011-11-30 11:16

发几张油镜下杆菌的污染，图片经瑞氏染色，供大家参考

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作者: hold住 时间: 2011-11-30 11:17

再一张

图片附件: 99080653.jpg (2011-11-30 11:17, 52.53 KB) / 该附件被下载次数 4
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作者: hold住 时间: 2011-11-30 11:18

再一张

图片附件: 52515216.jpg (2011-11-30 11:18, 53.31 KB) / 该附件被下载次数 2
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作者: 克隆鱼 时间: 2011-11-30 11:18

有没有黑胶虫污染的照片？

作者: tianmei001 时间: 2011-11-30 11:19

请各位xdjm看看我的细胞是什么污染啊？这是293T细胞的图片，培养第3天的时候细胞生长很好，但是第4天的时候就发现培养液中有细沙状的沉淀，镜下看不到细胞，只看到圆球形的颗粒，很多，但是晃动以后就能看到细胞，细胞生长尚可。[img 800 600]http://album.hevnet.cn/upload/zehui2006/bigpic/2006119124705341.jpg[/img]

作者: HP007 时间: 2011-11-30 11:19 标题: 回复 #209 tianmei001 的帖子

好象是血清污染
你可以用"黑原虫"搜索一下
建议血清4度融化,室温融化容易出现这种现象

作者: DNA 时间: 2011-11-30 11:23

我养的是血管内皮细胞，细胞液中也有小黑点，成对分布在细胞外，有的在动。革兰染色是革兰阴性棒状杆菌。现在正用抗生素洗呢，不知能不能度过这一关？复苏一支也有这种成对的小黑点。现在没有保种了。急啊!

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 11:24

我的细胞最近也出现类似情况,不知道是什么东西,细胞群居生活时情况不明显,但是做转染时就出现这种情况了,还一团一团的,有谁知道除了"丢弃"外如何处理?细胞株是买的,很宝贵呀!

作者: abc816 时间: 2011-11-30 11:25

本人的细胞出现污染后决定加双抗，但是1640已经滤好了。只好用医院里用的注射用水配了双抗，调整浓度为1万/ml。决定每100ml1640中加入1ml。但是又担心配双抗时有污染，（污染怕了）可否把1640+双抗+血清的培养液一起检菌阿。

作者: 缘yuan 时间: 2011-11-30 11:25

霉菌污染

图片附件: 41039005.snap.jpg (2011-11-30 11:25, 17.19 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9300

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 11:26

实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行。

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我用医院用的NaHCO3的瓶子，过火时间长了就爆裂，已经两次。现在我烧这种瓶子的时候每次都是提心吊胆的。塑料的离心管多烧一会倒是不怕，最多融化而已。

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:26

很惨！我养的第五批原代神经细胞全军覆没，看了前面的帖子，可以初步判断是霉菌感染，除了前面各位说的对培养箱的补救办法，还有什么其他的好办法是针对已污染细胞的？顺便将我的污染图片传上，供后来者参考。

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:27

最初看起来还以为是长势不好的细胞，透光度高

图片附件: 10889105.snap.jpg (2011-11-30 11:27, 18.45 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9301

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:27

然后仔细看，可见细胞里面的颗粒状物，像融解的细胞器，并且40X下能看到它们的活动，同时带动整个“细胞”的振动，在其周围通常还可以看到黑色的“小碎片”翻动

图片附件: 93267701.snap.jpg (2011-11-30 11:27, 17.79 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9302

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:28

这样的情况发展下来，有的接近培养的细胞，释放其内的碎片损害细胞（具体方式不详），有的直接释放其内碎片到周围

图片附件: 61424840.snap.jpg (2011-11-30 11:28, 20.85 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9303

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:28

正在释放的图片

图片附件: 23739979.snap.jpg (2011-11-30 11:28, 25.45 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9304

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:29

以上图片均为40X相差下所摄，有时可以在高倍镜下动态观察到被感染细胞逐一鼓起黑色的泡泡，如下图红圈所指，差不多有五个泡是看着起来的，怀疑是该细菌释放物质后造成。请有相关经验的同道给予指点，非常感谢！

图片附件: 89361335.jpg (2011-11-30 11:29, 65.21 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9305

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:30

这是我养的c6胶质瘤细胞，我养了两次，都养死了，我感觉不像是污染，大家看看吧

图片附件: 96545956.snap.jpg (2011-11-30 11:30, 60.35 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9306

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:30

拜托,好明显的霉菌感染呀,大伙说呢?

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 11:30

上次发的那五张图片终于有了结果，神经原代培养第七天，发现感染征象，但不能确定为何种污染，第十天，培养基长出菌落，镜下可见树枝状分支，确定为真菌污染，因形态明显，图片欠奉。这一动态过程展示出来希望对后来者有一定参考价值，以共同探讨可能原因和防止措施，因我昨天刚养出来的胶质细胞高倍镜下又出现了前面的现象，正在郁闷中……

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 11:31

应该是细胞状态不好，部分细胞死后的碎屑而已。
是的确可以看到动的。

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不会吧,换液后是明显干净了,但过一天又老样子了,不会是死细胞吧???

作者: flower-201 时间: 2011-11-30 11:33

最近实验室培养的细胞中经常可见。请问是所谓的白色念球菌吗？

特征：似乎无处不在，而且顽固的很。长的暴快（12h就能让细胞上面密布）。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。

图片附件: 99058608.snap.jpg (2011-11-30 11:33, 50.64 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9307

作者: one 时间: 2011-11-30 11:33

还有讨厌的黑胶虫问题！给判断增加难度

作者: ffooll 时间: 2011-11-30 11:34

最近实验室培养的细胞中经常可见。请问是所谓的白色念球菌吗？

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特征：似乎无处不在，而且顽固的很。长的暴快（12h就能让细胞上面密布）。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。

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恭喜你，答对了

作者: yychen 时间: 2011-11-30 11:35

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，镜下快速运动，单个不成串。
图２：（*40, Olympus DP50）

（缩略图，点击图片链接看原图）

我的细胞也多次受到此类污染,换了血清就好了,但到底是什么东东?
望大家讨论!

作者: yychen 时间: 2011-11-30 11:37

我们实验室细胞培养的条件比较差，因此细胞培养箱很少像大家说的那样经常用酒精擦拭和更换水盘，但是平时细胞却极少发生污染，我们的经验是在关键的操作上要特别小心，例如
1.滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。
4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
5.操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。

细胞就像自己的孩子一样，只要精心照料就一定能够茁壮成长。

作者: duoduo 时间: 2011-11-30 11:37

楼主真是有心啊,很有收藏价值啊,希望了解具体的染色方法等供大家参考

作者: 小鱼鱼 时间: 2011-11-30 11:42

内皮细胞出现了污染阿~~不只是什么
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=8378795&sty=1')

作者: 盼盼 时间: 2011-11-30 11:42

你的后来怎么处理的？我的细胞现在也出现了同样的情况，很是烦人。

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 11:43

我的CHO，怀疑也是霉菌感染。
早期是亮的小圆点

图片附件: 23078023.snap.jpg (2011-11-30 11:43, 39.49 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9308

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 11:43

然后发展，出现聚集

图片附件: 36437561.snap.jpg (2011-11-30 11:43, 44.57 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9309

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 11:43

继续发展，细胞开始受到影响。它们会聚在细胞周围，把细胞包起来。

图片附件: 67467243.snap.jpg (2011-11-30 11:43, 29.4 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9310

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 11:44

最终细胞都被弄死了

图片附件: 36791222.snap.jpg (2011-11-30 11:44, 42.85 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9311

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 11:44

它们却越来越旺盛，形成黑色团块

图片附件: 55461872.snap.jpg (2011-11-30 11:44, 53.62 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9312

作者: one 时间: 2011-11-30 11:45

帮忙看看我这份细胞是被什么污染了。
细胞为U937细胞，视野大片小黑点，可小范围游动。
20倍

图片附件: 69500029.snap.jpg (2011-11-30 11:45, 59.91 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9313

作者: one 时间: 2011-11-30 11:46

这些小黑点似乎会破坏细胞，这是换液培养6小时后的一张图片，
原本刚换液后黑点很少，但是现在黑点大量增殖，而且细胞有部分
破碎，出现小黑点聚集。

图片附件: 31344864.snap.jpg (2011-11-30 11:46, 37.58 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9314

作者: one 时间: 2011-11-30 11:46

还有一张

图片附件: 98271747.jpg (2011-11-30 11:46, 97.5 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9315

作者: one 时间: 2011-11-30 11:46

高倍（40x）情况如下：

图片附件: 99506422.jpg (2011-11-30 11:46, 79.55 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9316

作者: one 时间: 2011-11-30 11:47

还有我不敢肯定这些黑点是否能污染进入细胞内，
图片里细胞内好像有同样体积的黑点。40倍

图片附件: 15096993.jpg (2011-11-30 11:47, 51.05 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9317

作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 11:48

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，几小时即满布视野，镜下快速运动，单个不成串。
图３：（*40, Olympus DP50）

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这些小虫子是什么东西，是在那个操作环节上出现问题了，Jeffrey88 现在弄清楚了吗，我最近也出现这样的问题，大量的细胞都出现这种污染，一直找不到原因
还望赐教！谢谢

作者: 西子 时间: 2011-11-30 11:49

发一张细胞细菌污染高倍镜图片（1000倍），瑞氏染色，非常清楚。

图片附件: 92453588.snap.jpg (2011-11-30 11:49, 46.63 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9318

作者: 彼岸花opp 时间: 2011-11-30 14:52

它们却越来越旺盛，形成黑色团块

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我的也是被这种黑色,葡萄状,漂浮,柔软的东西污染了,郁闷
不过我细胞长得还不错,就是容易变黄,培养液很多的漂浮物

图片附件: 55461872.snap.jpg (2011-11-30 14:52, 53.62 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9319

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:53

大家帮我看看几张照片是细胞污染吗？

图片附件: 95947014.snap.jpg (2011-11-30 14:53, 22.52 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9320

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:53

再一张

图片附件: 84446266.snap.jpg (2011-11-30 14:53, 21.31 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9321

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:54

再一张

图片附件: 65708973.snap.jpg (2011-11-30 14:54, 24.03 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9322

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:54

再一张

图片附件: 66022465.snap.jpg (2011-11-30 14:54, 27.04 KB) / 该附件被下载次数 0
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9323

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:54

再一张

图片附件: 98917171.snap.jpg (2011-11-30 14:54, 32.51 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9324

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:55

再一张

图片附件: 35818874.snap.jpg (2011-11-30 14:55, 31.45 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9325

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:55

最后一张

图片附件: 46894347.snap.jpg (2011-11-30 14:55, 23.08 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9326

作者: 西子 时间: 2011-11-30 14:56

真菌感染，这样的要赶快扔掉。
个人感觉养细胞烧口最重要

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 14:56

这几张照片都是真菌污染吗？
但它们和细胞不在一个层面上，而且细胞也有长，就是长的很慢。

作者: 969 时间: 2011-11-30 14:57

我觉得不象是污染，觉得是不是你焦距没调好，是培养容器上的东西。
另：我找不着以前有个筒子贴的真菌污染的图了（就是一串串的那种），我最近也是刚碰到过，发现加真菌霉素还是很有效的。

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 14:57

俺第一次养细胞，就污染啦，我真苦命！！大家帮帮我吧！！
培养后第三天，培养液不混，无黑点，无白毛！！图上的白点就是异物！！越长越多，细胞生长良好。

图片附件: 31310385.jpg (2011-11-30 14:57, 49.22 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9327

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 14:58

这是高倍镜下的

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 14:59

就要做单抗了，ＳＰ２０还老是污染，真急啊

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 15:03

大家帮看看这两张照片里的是什么？

图片附件: 43396293.snap.jpg (2011-11-30 15:03, 81.02 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9328

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 15:03

再一张

图片附件: 81872351.snap.jpg (2011-11-30 15:03, 95.01 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9329

作者: 盼盼 时间: 2011-11-30 15:04

【原创】
1.大鼠肺泡巨噬细胞原代培养。
2。培养时间：48小时。
3。放大倍数：×4
4。染色：未染色。
5。污染种类：真菌。
6。培养基：1640＋fbs

图片附件: 44435357.snap.jpg (2011-11-30 15:04, 59.93 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9330

作者: 盼盼 时间: 2011-11-30 15:04

上图是我用了一次别人的培养液引起的污染，除了这次，我养细胞还没污染过，感觉养细胞无菌观念很重要，好的习惯很重要。下面说一下我养细胞的做法。希望对大家有帮助。
1.注意喷酒精装置的应用：制作很简单，用过的化妆品，理发店理发前往头发上喷水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子，经过处理装上百分之75的酒精就可以了（我不知道有没有实验专用喷洒酒精的瓶子，如果有那就更好了）。我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。常常往超净台台面，手上喷洒酒精，效果很好。

2。我进入细胞培养室就戴上PE手套（一次性塑料薄膜手套），当在超净台操作时戴上一次性橡胶手套。

3。培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。换水前要用百分之75酒精消毒。水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。

4。从培养箱内取东西前手一定要喷酒精，动作要快，可以先看好了，要取的东西在那里，然后快取。显微镜下观看细胞时间也不要过久，否则会对细胞有不利影响。

5。很多人喜欢常规用抗生素，其实除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。

6。液体培养基贮存于4℃ 冰箱，实验进行前放在37℃ 水槽中温热。温热前后注意酒精消毒。

7。用离心法从动物身上取细胞时，其离心速率不要超过1000转/分钟（很多文献上都大于这个数值，但记住不要超过1000），时间一般不超过10分钟，否则会造成细胞死亡。

8。取出冷冻管后，一般是放入37 °C 水槽中快速解冻。我按着师姐的经验都是放入38°C的水中，上面一些战友提到了39和40°C，不知道效果如何，希望多多交流，希望其他战友如果也有不同于37°C的，请多多跟帖，互相交流。在水中摇动冷冻管的时候水不要浸到瓶盖。

9。在超净台内，瓶盖口应该朝下放。我们知道，用酒精灯的火烧一下，不是为了杀菌，主要是形成向上的气流，防止空气中的细菌落下，如果这样的话，那么瓶盖口向上就不对了，所以瓶盖口应该向下放，但应该注意超净台的酒精消毒。

作者: lixi559 时间: 2011-11-30 15:05

大家帮忙看看这是什么污染，我培养细胞时每当把培养液放进培养瓶中，培养液不能铺满瓶底，就像有一定的张力一样，形成一个空缺，在空缺里可以见到白色点状微生物，很小，圆形，增殖迅速，会变成直杆状或三叉状，往往一会就布满视野，不会运动，请高手指点是问题。附上图片，倒置相差显微镜，大部分已经变成黑点了。

图片附件: 40379417.jpg (2011-11-30 15:05, 21.92 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9331

作者: lixi559 时间: 2011-11-30 15:06

再来一张

图片附件: 56558549.jpg (2011-11-30 15:06, 16.95 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9332

作者: DNA 时间: 2011-11-30 15:07

给大家看一张我自己污染过的，当时很沮丧，没留照片，又看到同样的就拍下来了。典型的霉菌污染，肉眼看到白色的团块或白点，镜下呈丝状。400倍图片如下：

图片附件: 16799910.snap.jpg (2011-11-30 15:07, 82.27 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9333

作者: duoduo 时间: 2011-11-30 15:08

没有处理直接丢掉了，我也认为和自身原因有很大关系，也和超净台有关。

作者: windy+++ 时间: 2011-11-30 15:09 标题: 回复 #261 泡泡的帖子

你的是霉菌污染，只是你的图片是低倍的，建议全面清理培养相后，注意无菌操作。

作者: guagua 时间: 2011-11-30 15:10

这个泡泡是真菌污染的迹象吗

[ 本帖最后由 guagua 于 2011-11-30 15:12 编辑 ]

图片附件: 39203220.jpg (2011-11-30 15:12, 53.35 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9334

作者: guagua 时间: 2011-11-30 15:13

再来另外一张泡泡

图片附件: 46906287.snap.jpg (2011-11-30 15:13, 27.73 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9335

作者: ladyhuahua 时间: 2011-11-30 15:14

请大家帮忙，我的SGC7901又污染了，虽然不怎么珍贵，但是总出现这样的情况！没法继续实验，烦！！我没来得及拍照片，但是在帖子上找到个朋友的图片和我的比较类似，请帮我看看。——和这位朋友的很像，在200倍下就是这个形状，比细胞小很多的圆形东西然后成串状，没这个这么多，一般是10几个圆点一起，或7，8个一起，一般一端贴在瓶壁上，另一端像水草一样漂着，不知道是什么？生长速度不快，培养液清澈，有时肉眼可见白色细沙状的颗粒，看起来不像细菌污染，可能是霉菌或者真菌么？不应该是衣原体吧，在低倍下就可以看到。有机会会拍张照片上来！谢谢

图片附件: 14880961.jpg (2011-11-30 15:14, 9.76 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9336

作者: yychen 时间: 2011-11-30 15:18

大家帮我看看复苏第二天的SP2/0细胞，是不是细菌污染？细胞之间很多小的黑色碎片，但不会动。复苏第一天细胞死了很多。

图片附件: 31064175.snap.jpg (2011-11-30 15:18, 41.19 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9337

作者: yychen 时间: 2011-11-30 15:19

这个是复苏2小时后的图片

图片附件: 51677180.snap.jpg (2011-11-30 15:19, 37.84 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9338

作者: 小螺号 时间: 2011-11-30 15:20

我的细胞里有很小的半透明的圆形物体，需用高倍镜才能看到，围绕细胞做布朗运动，或贴于细胞。请问是什么东西？

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-30 15:21

请大家帮忙，我的SGC7901又污染了，虽然不怎么珍贵，但是总出现这样的情况！没法继续实验，烦！！我没来得及拍照片，但是在帖子上找到个朋友的图片和我的比较类似，请帮我看看。——和这位朋友的很像，在200倍下就是这个形状，比细胞小很多的圆形东西然后成串状，没这个这么多，一般是10几个圆点一起，或7，8个一起，一般一端贴在瓶壁上，另一端像水草一样漂着，不知道是什么？生长速度不快，培养液清澈，有时肉眼可见白色细沙状的颗粒，看起来不像细菌污染，可能是霉菌或者真菌么？不应该是衣原体吧，在低倍下就可以看到。有机会会拍张照片上来！谢谢

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这张拍的不是很清楚，但结合描述可以肯定是念珠菌污染。如果肉眼科技白色细沙颗粒，那么这盘细胞污染已经很严重了，建议丢掉。选择污染不是很严重的细胞，先用PBS清洗1-2次，换加入两性霉素的培养液，不般使用一次即可控制念珠菌的长势，但要持续用药2w观察情况。

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-30 15:21

大家帮我看看复苏第二天的SP2/0细胞，是不是细菌污染？细胞之间很多小的黑色碎片，但不会动。复苏第一天细胞死了很多。

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这张照片里黑色的碎片应该不是污染，我刚复苏的细胞里也有过，可能是因为细胞在冻存或复苏过程不合理，细胞复苏之后大量死亡产生的碎片。

作者: BUK 时间: 2011-11-30 15:22

请问高手这是什么污染？链球菌还是霉菌？培养基比较混浊，污染物都沉淀到了底部。
谢谢。

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作者: tianmei001 时间: 2011-11-30 15:23

麻烦大家帮我看看这是什么污染，谢谢啦！！

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作者: tianmei001 时间: 2011-11-30 15:25

这是400倍的图片

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作者: 蒲公英 时间: 2011-11-30 15:26

请各位高手帮忙看看这是什么污染（倒置显微镜下）？

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作者: 蒲公英 时间: 2011-11-30 15:29

图中白色丝状物，上面还粘有许多细胞，请各位帮忙看一下？

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作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 15:31

胆管癌细胞，用DMEM+胎牛血清培养三天，其中换液两次，昨天发现培养基中出现了如图所示的东西（胆管癌细胞是从别人的六孔板中移到培养瓶中的，之前是否有我现在不太确定，不过应该是没有的）

该物体比细胞体积大得多，贴壁，中间呈条索状，或点片状，周围有细沙粒状的物质包绕，整体呈团块状，有时，其四周有絮状物体（见图）
请问大侠几个问题
一．这是什么东西啊？
二．我师姐说培养基如果配的好，可以看见牛血清沉淀，请问在镜下，牛血清沉淀是什么样子啊？能给个图吗？

我是试验新手，图是用铅笔画的，不过基本反映了物体原貌，现在百思不得其解．老师要我还培几天，并注意观察其数目．我觉得有污染其他人细胞的危险，因此将培养瓶放在温箱中了．．．．．．我今天用PBS冲了一下这些东西，好像能冲掉一些．

今天晚上看了，似有增多之趋势啊，寒一个．．．．．．不过细胞生长似乎不受影响的说

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:33

各位高手,我做的大鼠神经元原代培养,这是培养第3天的情况,请鉴别一下下图是什么污染呢?该如何处理呢?

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:33

第二张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:33

第三张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:34

第四张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:34

第五张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:34

第六张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:35

第七张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:35

第八张

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作者: @STAR@ 时间: 2011-11-30 15:35

第九张

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作者: lixi559 时间: 2011-11-30 15:38

前段时间培养细胞，出现上面战友所说的黑色小虫一样的东西，可以游动，形状似蝌蚪，不知道是什么，望战友们解答

作者: hold住 时间: 2011-11-30 15:39

上皮细胞蒙难，但细胞生长不受影响，培养液浑浊！天啊，各位大虾帮忙啊！！

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作者: hold住 时间: 2011-11-30 15:39

再来一张

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作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 15:40

我说一个像似污染却不是的状况，以前碰见的，当时没及时拍下来，描述一下：当时从外地邮寄过来两瓶CHO细胞，一瓶有20%，另一瓶只有5%，对方是前两天刚从-80度冰箱取出复苏的。先倒掉大部分培养液，观察一天，见无污染，第二天换液，第三天看见一瓶疑似有霉菌生长（细胞数较多的），另一瓶有小片斑斑点点，好像是霉菌生长后破坏了细胞后残留的，为防止自己的培养液污染，赶快换别人正用的培养液，加入两性霉素，继续观察，第四、五天还是如此，但霉菌未见增加，分析各种污染因素，都不太可能。最后想到细胞传代已过50代，且是一年后复苏的，在细胞未长到对数生长期便冒然送来，细胞状态不好，营养未跟上，应该是细胞衰老导致凋亡，霉菌样是细胞凋亡后细胞器聚集在一起凝固造成，小片斑斑点点是细胞凋亡后残留的细胞器。接着继续用自己的培养液养，细胞状态逐步好转。

作者: guagua 时间: 2011-11-30 15:41

我现在进细胞培养室之前先用75%的酒精消毒超净工作台表面，之后打开紫外，房间和缓冲间的紫外也打开，废液缸先用75%酒精消毒，在放入传递窗内打开紫外消毒；消毒30-40min后，进去操作的时候在用酒精擦超净工作台表面，手套也需用酒精消毒，佩戴一次性无菌口罩和帽子，这样操作细胞一般不会轻易污染！另外，培养箱内的水可加一定的硫酸铜可防止霉菌生长。据我个人观点，养成无菌习惯是很重要的，祝大家远离细胞烦恼！

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 15:41

超净台和培养箱都无紫外灯，郁闷，最近又开始和污染做艰苦的斗争

作者: ffooll 时间: 2011-11-30 15:43

各位大虾帮帮忙，我的MRC-5第4天出现几个肉眼可见的白斑，培养基澄清，细胞也没什么问题

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作者: ffooll 时间: 2011-11-30 15:44

这是肉眼看见的，贴在细胞上

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作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 15:44

细胞太密，代数太高，也会出现这种情况。建议重新复苏低代细胞，降低浓度。

作者: one 时间: 2011-11-30 15:45

楼上前辈发的那个图，是什么真菌污染的，我的最近也出些这种情况，我的而且还特别严重，前一天在显微镜下看到很好的，第2天就是全培养瓶都是半凝胶状，一些白毛长在最上面，根本看不到培养基了。在倒置显微镜下，就看到一些类似网状的线。有谁知道，请赐教

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作者: 西子 时间: 2011-11-30 15:45 标题: 回复 #301 one 的帖子

地道的真菌污染……

感快丢掉，彻底消毒吧

惊讶于其生长之快，可见你们培养箱已经脏到一定程度了……

作者: 小鱼鱼 时间: 2011-11-30 15:46

一路看下来，鸡皮疙瘩起了一身！幸亏没亲自看见过！
第一次养细胞的时候怀疑长了菌，一怒之下，往培养皿里面加了几滴浓硫酸，大不了大家一起死！以后没再长过，可能是吓怕了！呵呵！

作者: 中国特色 时间: 2011-11-30 15:46

'大家好，我做细胞培养的事件不是很长，请大家多多指教
我养的是血管内皮细胞，最近细胞的状态一直不是很好，细胞周围还有很多黑点，我认为不是染菌，因为细胞培养基是透亮的。我发现培养瓶反复用了之后，培养瓶的壁上会有些东西耍不掉，怎么处理培养瓶呢？
请大家多多指教，谢谢！

作者: ladyhuahua 时间: 2011-11-30 15:49

泡酸不行吗？！

作者: tieshazhang 时间: 2011-11-30 15:56

转染了腺病毒4天的293细胞可能是葡萄球菌污染吧我猜得不是太清楚
100倍

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作者: lixi559 时间: 2011-11-30 15:56

我们实验室做了大半年的原代，用的都是不加双抗的培养基，也是极少出现污染。
主要还是平时注意，器材消毒，擦手，带口罩什么的都按规程来就好了。
唯一恼人的是偶尔培养箱里水盘会长霉菌。

作者: lixi559 时间: 2011-11-30 15:57

各位高手,我做的大鼠神经元原代培养,这是培养第3天的情况,请鉴别一下下图是什么污染呢?该如何处理呢?

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想问下你，你的细胞出现这种情况后生长情况怎样？这种空泡状的东西有没有张大的趋势？

作者: HP007 时间: 2011-11-30 15:59

我的内皮细胞也正在被杆菌污染困扰！之前也是由于地震断电24h，然后就是连续不断的污染，但同一个温箱内的肿瘤细胞又是好好，郁闷死了！已经把所有的用具重新消毒了。
请高手指教如何灭菌

作者: loli 时间: 2011-11-30 16:01

大家帮忙看看这个是什么污染?
褐色的,肉眼下是白色的小点,不贴壁,培养液两天之内不浑浊!
谢谢大家了!

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作者: loli 时间: 2011-11-30 16:02

还有几张

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9361

作者: loli 时间: 2011-11-30 16:02

还有几张

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9362

作者: loli 时间: 2011-11-30 16:03

还有几张

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作者: loli 时间: 2011-11-30 16:03

还有几张

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9364

作者: loli 时间: 2011-11-30 16:03

还有几张

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作者: 中国特色 时间: 2011-11-30 16:05

高手帮我看看这是什么，养了块一个月了总是有这些，细胞不爱长，培养液也不变混浊，我用的是15%的小牛血清+高糖DMEM

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作者: 克隆鱼 时间: 2011-11-30 16:08

好帖子，学到好多，我也是细胞污染的受害者，上传一张图片，供后来人学习吧。可惜污染原仍然不确定，怀疑是霉菌，培养液不变色。

图片附件: 34702456.snap.jpg (2011-11-30 16:08, 40.5 KB) / 该附件被下载次数 1
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作者: DNA 时间: 2011-11-30 16:09

这是在内皮细胞培养中发现的一个霉菌，这是上午发现的，下午的时候细胞孔中已经全部让迅速繁殖的霉菌覆盖！

图片附件: 10214512.snap.jpg (2011-11-30 16:09, 14.41 KB) / 该附件被下载次数 3
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作者: BUK 时间: 2011-11-30 16:10

我的细胞污染的动态过程,怀疑是霉菌污染：
2天后：

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确实是霉菌污染，我的细胞也招此大难

作者: windy+++ 时间: 2011-11-30 16:10

好帖子顶起来，我的细胞也是遇到霉菌了，据说是念珠菌，跟葡萄串似的，长的很快，尤其是传代后最易生长了，郁闷啊！本来想救一下，结果把另外一种细胞也污染了，建议大家遇到这种情况赶紧扔掉吧，虽然很舍不得。

作者: guagua 时间: 2011-11-30 16:10

图片一样，
养了块一个月了总是有这些，细胞不爱长，培养液也不变混浊，我用的是15%的小牛血清+高糖DMEM ，高手知道为什么么？

作者: tianmei001 时间: 2011-11-30 16:11

遇到一次细菌我就崩溃一次，从来没有战胜过他，只能躲呀

作者: tianmei001 时间: 2011-11-30 16:12

污染细胞的镜下观察，有谁能告诉我需要什么样配置的显微镜，品牌等，我们的细胞经常污染需要进行鉴别，本人是新手，请各位不吝赐教。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 16:12

75%的酒精不是消毒的吗？怎么用70%的呢？我更郁闷，培养基都折腾我好长时间了，还是有菌，请问你们用什么滤器？我们用的是直径0.22nm的滤膜，没有用一次性的滤器。很郁闷呀，前段时间石家庄下大雨，我们实验室漏雨了，做了空气培养没有事，我们的操作都和楼上的差不多，但是还是有问题，好烦好烦呀

作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 16:13

原代培养的成纤维细胞,传代后污染,培养液不浑浊,偏酸

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作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 16:13

再传两张,请高手指点

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作者: 泡泡 时间: 2011-11-30 16:14

再传两张

图片附件: 65760388.snap.jpg (2011-11-30 16:14, 32.34 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9371

作者: caihong 时间: 2011-11-30 16:15

HepG2细胞应该是类似上皮细胞的梭型，分布非常密集，抱团的时候才会像楼上的照片，你的细胞形态有点问题呀。

作者: caihong 时间: 2011-11-30 16:15

建立细胞污染图片专区子板块，
欢迎大家贴出有关细胞污染的pp照片，并且多多交流，对抗污染。

贴图方法：
点击右下角的“new reply” 按钮，按照提示就可以贴图，不过图片大小不能超过400k。

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恩，个人也觉得主要是操作问题，其次就是环境的洁净度

作者: qqq111 时间: 2011-11-30 16:16

各位高手给我看看我这是什么污染。起初在培养基内可见少量明亮的成串珠样葡萄样生长的东西漂浮着，一两天后培养基明显浑浊，葡萄样漂浮生长物愈来愈多，最后布满瓶底，呈单个生长，还可见部分黑暗的集落漂浮着。如图：

图片附件: 69914108.snap.jpg (2011-11-30 16:16, 58.57 KB) / 该附件被下载次数 2
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作者: qqq111 时间: 2011-11-30 16:16

第二张：可见明显的灰色集落漂浮，视野下全是串珠状生长物，培养基浑浊明显，仔细观察不见细菌游动，同学说可见串珠状生长物缓慢摆动，可我没看见摆动，晕~

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作者: qqq111 时间: 2011-11-30 16:17

第三张：

图片附件: 44900352.snap.jpg (2011-11-30 16:17, 72.29 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9374

作者: loli 时间: 2011-11-30 16:17

各位前辈，我做原代小鼠平滑肌细胞培养，最近两个月反复出现如图污染，无一幸免。
有几个问题想请教大家：
1、往往细胞原代长的还可以，在传代第一天看也好，可是第二三天就突然变成图片上的样子；这是因为我传代操作的问题吗？（可我五月份之前没有出现过）
2、这么说好像和上海的梅雨季有关，可是都九月分应该过去了吧？
3、是不是发现真菌污染后，培养箱就必须全面处理呢？真菌会到处飞？4、两性霉素原代培养预防性加入是抗污染的利多，还是对原代细胞影响的弊大呢？

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作者: loli 时间: 2011-11-30 16:18

还有我觉得楼上的和我看到的高倍镜下很像，应该是酵母菌污染吧！真的防不胜防，每次搞的心情都很沮丧。

作者: duoduo 时间: 2011-11-30 16:19

原代培养的成纤维细胞,传代后污染,培养液不浑浊,偏酸

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我们的细胞情况和你的很相似，胞浆中有些颗粒状的东西，培养液不浑浊，有哪位高手可以指点一下是什么原因？是黑胶虫吗？

作者: ffooll 时间: 2011-11-30 16:20

细胞周围出现很多小黑点一样的东西，成层分布，增长很快
培养基颜色没变化，瓶内出现细沙状沉淀。
下图是细胞培养72小时的照片，成团的圆的是细胞聚在一起了。

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作者: 克隆鱼 时间: 2011-11-30 16:20

请大家看看这是什么污染，12天的细胞

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作者: 蒲公英 时间: 2011-11-30 16:21

大家好！
我最近想分离原代细胞！
但是我做了2次都出现了同一个问题：（和前面一位战友的情况差不多）
-----------培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，几小时即满布视野，镜下快速运动，单个不成串。而且的培养液在一两天内很快变混浊．即使换液了，第2天看时还是，培养瓶里面象铺了一层沙一样（似泥沙状混浊）。

楼上筒子分析是洋葱佰克霍尔德菌污染。不知怎么解决？

楼上说”应该是血清污染了，我也碰到，换了血清后就没事了”---但是我做第2次原代培养的时候是重新配的培养基，结果也是污染了！

更怪的是，我接种细胞的时候密度还很大（很多圆圈亮点般细胞），但到第2天看时发现细胞反而减少了，而且没有细胞贴壁（细胞依然是圆圈亮点状），有人说是我分离的时候酶消化时间过长了。
我想，酶消化时间长也好，污染也好（接种后污染），但总要有细胞贴壁的吧？？？我做了2次都没有看到教好的细胞贴壁！

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这个到底是什么污染，我吧13张贴子都看完了，也没有找到答案?
请问是什么污染了。

作者: 969 时间: 2011-11-30 16:22

大家好:

我的细胞也有问题,想请大家帮帮忙,看看是什么污染,怎么处理.有好几株细胞都有这种情况.

(第一张,是刚消化1h,标记的感觉和我细胞的形态不一样,边界不明显,不知道是不是污染,消化后第三天为第二张图片,细胞空隙间有很多黑点,如果不处理第四天瓶内的液体就会变浑浊,看不到细胞)

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作者: hold住 时间: 2011-11-30 16:23

第一张

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作者: loli 时间: 2011-11-30 16:24

请各位专家看下我的细胞污染图片，是什么东西？大鼠椎间盘细胞，分离培养3天，细胞找不到了，出现很多棒状的东西，100倍

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作者: loli 时间: 2011-11-30 16:24

请各位专家看下我的细胞污染图片，是什么东西？大鼠椎间盘细胞，分离培养3天，细胞找不到了，出现很多棒状的东西，400倍，还有黑团。

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作者: loli 时间: 2011-11-30 16:25

请各位专家看下我的细胞污染图片，是什么东西？大鼠椎间盘细胞，分离培养3天，细胞找不到了，出现很多棒状的东西，400倍，还有黑团。培养皿刚拿出来的时候有几个浑浊团

图片附件: 23352081.snap.jpg (2011-11-30 16:25, 69.16 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9382

作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-30 16:26

我养的CHO细胞，养了半个月一点事都没有，刚长起来（我是复苏的我们实验室5年之前冻存的）打算传代呢，就污染了，不到12个小时的时间就污染的很厉害了，现象是视野变暗，倒置显微镜下观察有颗粒状的物质，大侠们给分析分析怎么回事啊，也太打击我了，刚开始养呢！

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 16:26

今天本打算细胞传代的，因为周六时八瓶细胞中，有四瓶细胞长得不好，而另四瓶长得较好。由于是2瓶传的8瓶，所以当时怀疑是2瓶原来的细胞的一瓶没消化好，所以其传出来的4瓶细胞不行。但是今天看时发现，原来长得较好的细胞中死细胞增多，培养液中有大量悬浮物，而且贴壁细胞也不透亮了，很暗淡，不透明，感觉细胞胞质内颗粒增多。所以今天没有传代，只是换液体。对其原因的考虑：1、细胞污染。2、传代晚了，细胞培养液中的营养物消耗了。3、细胞代数太多，分裂减少，凋亡增多。

不知是否是这样？各位大侠帮忙分析一下。

作者: flower-201 时间: 2011-11-30 16:28

霉菌污染，注意孔里的絮状物

图片附件: 15663422.snap.jpg (2011-11-30 16:28, 29.69 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9383

作者: zhezhe 时间: 2011-11-30 16:29

各们位大虾，帮忙看看我的7721中到底是什么？我都快郁闷死了。

图片附件: 65160820.snap.jpg (2011-11-30 16:29, 28.01 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9384

作者: ffooll 时间: 2011-11-30 16:35

还有。各位帮我看看这是什么污染？复苏一只就长这东西，都好几只了！郁闷！谢谢！

图片附件: 56039671.snap.jpg (2011-11-30 16:35, 45.96 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9385

作者: 盼盼 时间: 2011-11-30 16:36

有没有大虾知道霉菌和细胞凋亡后霉菌样的细胞器聚集怎么区分呢？

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 16:36

我也来贴一个，人结肠癌HT-29细胞，考虑可能是白色念珠菌污染。

图片附件: 55420790.snap.jpg (2011-11-30 16:36, 46.82 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9386

作者: one 时间: 2011-11-30 16:40

我的细胞培养液里面有好多悬浮的东西，透明的，感觉和细胞相差不多，刚换完液一天，不知道是不是也被污染了，望高手们指点。

作者: BOSS2011 时间: 2011-11-30 16:40

我们的实验方法：自大鼠颈动脉插管取血，PBS等倍稀释，取十余支10ml离心管，分别加入1ml室温平衡的大鼠淋巴细胞分离液（天津灏阳），然后向分离液上小心叠加1ml稀释后的血液，400g×15min（湖南湘仪水平离心机）水平离心后收集单个核细胞，PBS洗涤后接种于塑料培养瓶。
取血后即刻分离大鼠双侧股骨、胫骨，剪开骨髓腔，使用含血清的培养基冲出骨髓后，1500rpm×10min（Sigma离心机），使用培养基重悬后接种于塑料培养瓶。
出现的问题：接种后镜下即可见污染样物质，培养24h后该疑似污染物铺满瓶底，细胞数量极少（如图所示），400倍镜下可见这些棒状污染物呈布朗运动。可是培养液并没有出现明显浑浊。
分析：为寻找污染来源，我们于血液稀释后取少量血液镜下观察，未见污染物；但密度梯度离心后取单个核细胞层镜下观察即可见污染物，于是取少量分离液并加入少量培养基培养，但是24h后镜下观察未见污染物。骨髓培养与外周血培养使用的是相同的培养基及PBS，但骨髓培养未见污染物。
那么，镜下所见究竟是什么污染呢？出现的原因是什么？该如何避免呢？请老师不吝赐教！

作者: 969 时间: 2011-11-30 16:41

各位帮我看看这是什么污染？着急，复苏一只就长这东西，都好几只了！郁闷！谢谢！

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我的细胞也像你的细胞一样，高手啊，在哪儿？指点我们一下哈？
什么污染？怎么治？

作者: DNA 时间: 2011-11-30 16:41

有没有支原体污染的典型照片啊？

作者: 911 时间: 2011-11-30 16:42

大家好，
我做软骨细胞培养的,原代培养没发现有软骨细胞，培养液还是清亮的。
帮忙看一下是不是杆菌污染？还有类似方形的是什么东西啊？
先谢过!

图片附件: 92827885.jpg (2011-11-30 16:42, 11.48 KB) / 该附件被下载次数 9
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9387

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 16:43

我又来啦~
帮我看看这个是什么污染啊
谢谢

图片附件: 66491917.snap.jpg (2011-11-30 16:43, 41.59 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9388

作者: loli 时间: 2011-11-30 16:44 标题: 回复 #356 月牙牙的帖子

估计是霉菌我的也是那样的很苦恼

作者: 西子 时间: 2011-11-30 16:45

我看到前面有个图片和我差不多，说是念球菌污染，具体霉菌还有念球菌污染都是怎么判断出来的啊！除了特别明显的几个污染能够区分，其他的感觉污染的图片都差不多啊，

作者: lixi559 时间: 2011-11-30 16:45

在400倍镜下能看到污染的细菌吗？

作者: 小螺号 时间: 2011-11-30 16:46

上边方形物我认为是底物结晶析出，很符合化学结晶的外观（正八面体），但长形的很可能是杆菌了；
下边一张图好像是真菌孢子啊

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 16:46

各位前辈，我做原代小鼠平滑肌细胞培养，最近两个月反复出现如图污染，无一幸免。
有几个问题想请教大家：
1、往往细胞原代长的还可以，在传代第一天看也好，可是第二三天就突然变成图片上的样子；这是因为我传代操作的问题吗？（可我五月份之前没有出现过）
2、这么说好像和上海的梅雨季有关，可是都九月分应该过去了吧？
3、是不是发现真菌污染后，培养箱就必须全面处理呢？真菌会到处飞？4、两性霉素原代培养预防性加入是抗污染的利多，还是对原代细胞影响的弊大呢？

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我也遇见过这种问题，后来试了个法子可行，你不妨试试看：先用无菌PBS或是NS冲洗几遍，把悬浮的菌尽量洗去，然后加头孢钠哌酮抑制1天，若不变混浊，继续无菌PBS或是NS冲洗，换用夫康唑常规培养。注意一点：头孢、夫康唑、红霉素三者不能同时使用，抑菌作用会下降。而且红霉素不能拿PBS配，否则成果冻了。

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 16:47

请各位专家看下我的细胞污染图片，是什么东西？大鼠椎间盘细胞，分离培养3天，细胞找不到了，出现很多棒状的东西，400倍，还有黑团。培养皿刚拿出来的时候有几个浑浊团

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感觉你的像是LZ转帖的第一页上的那个图片啊，是白色念珠菌感染呢？你看看呢

作者: 中国特色 时间: 2011-11-30 16:47

真菌污染，镜下可以看到明显的细丝状。

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作者: 911 时间: 2011-11-30 16:49

你的细胞系念珠菌污染

处理办法：扔掉

善后办法，养成良好的无菌操作的习惯

拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口

多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

我做细胞半年了，由于有良好的无菌操作习惯，没有发生一次污染。

注意：我的所有培养基都是不加抗生素的哦^_^，相信我，没错的。

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同意。我的
注意：我的所有培养基也不加抗生素，而且细胞培养箱就是6月用酒精察一次，细胞从来没有污染过。主要是操作过程中严格无菌。

作者: dotaaa 时间: 2011-11-30 16:50

请教各位高手，我连续养了3批细胞，而且在养第3批细胞前对蓝盖瓶重新清洗消毒，重新配制培养液，清洗培养箱，并照了大紫外，但还是不同程度的出现了“小黑点”的情况，分布在细胞面上合细胞之间。现在养的结肠癌LOVO细胞，昨天复苏，今天观察，在细胞面上又出现了“小黑点”，不动的，请教各位高手这到底是什么污染？

图片附件: 16259560.snap.jpg (2011-11-30 16:50, 57.82 KB) / 该附件被下载次数 5
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作者: guagua 时间: 2011-11-30 16:50

我的细胞今天看的时候发现有很多小黑点，估计是细胞碎片。明天看了再拿片子来跟大家讨论下

作者: lixi559 时间: 2011-11-30 16:52

我养的人骨肉瘤细胞SAOS-2，其中一个孔发现图中的东西……
不知道什么微生物，活的，还会蠕动喔！震精啊……

我还录制了视频，可是论坛好像无法发视频格式。像虫子一样在游……

图片附件: 20724913.snap.jpg (2011-11-30 16:52, 50.76 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9391

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 16:53

前几天出现细菌污染，用10x的抗生素洗8遍，接着孵育1小时，然后一直用1x的抗生素孵育，每天换液，仍是杀不死，细胞状态极差，故丢弃。
细菌污染，细菌生长很快，镜下看细菌可运动（布朗运动），培养液浑浊。

图片附件: 96517264.snap.jpg (2011-11-30 16:53, 59.64 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9392

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 16:57

养细胞一年多了，没想到第一次污染就如此触目惊心。

图片附件: 96538553.snap.jpg (2011-11-30 16:57, 48.38 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9393

作者: 小螺号 时间: 2011-11-30 16:58

大家帮忙看看是什么污染

图片附件: 18691376.snap.jpg (2011-11-30 16:58, 14.61 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9394

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 16:59

似乎真菌污染，但向霉菌吗？
第一张

图片附件: 13686943.jpg (2011-11-30 16:59, 39.26 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9395

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 16:59

第二张：
最近广州老是下雨，实验室老师告诉我，潮湿的天气和长真菌关系很密切，大家也要小心点哦。

图片附件: 66028471.jpg (2011-11-30 16:59, 41.69 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9396

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 17:00

第三张：

图片附件: 49405225.jpg (2011-11-30 17:00, 42.68 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9397

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 17:00

第四张：
有的漂浮在培养基上面，有的就贴在瓶底，但培养基颜色没有很大变化。

图片附件: 86402270.jpg (2011-11-30 17:00, 40.08 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9398

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 17:00

第五张：
刚刚开始的时候，是像小树枝或者说像小松针一样，透明的，后来就开始长出触角来了。结果实验室的老师说，你养细胞怎么养出这个东西来了。

图片附件: 85232988.jpg (2011-11-30 17:00, 23.33 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9399

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 17:01

第六张：
回想下，可能是操作的问题，培养基的问题，天气的问题等等呵呵，最后，自由把东西全换！要是老板知道俺养出这么个东西来，还不被K！

图片附件: 51846533.jpg (2011-11-30 17:01, 24.25 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9400

作者: BUK 时间: 2011-11-30 17:03

我的也出现过那种黑点点漂在里面，视野很脏，不影响细胞生长的，前面也有图的，不知道是什么啊，也没人解释

作者: 一叶 时间: 2011-11-30 17:03 标题: 回复 #374 白白的的帖子

考虑霉菌污染。如细胞不珍贵，建议丢弃，查找原因，重新解冻细胞培养。

作者: 了了 时间: 2011-11-30 17:04

求助：大家看看我这个细胞是怎么回事啊？
LNCaP前列腺癌细胞。传代时还是好好的，两天后准备换液前一看，培养基浑浊了，镜检下，一小团一小团黄色的，不知道是不是死细胞飘起来的，实验室里也有人出现过这种情况，但不知道性质和原因。恳请大家帮忙判断。对了，打开瓶盖闻了闻，无异味，应该不是细菌吧。

图片附件: 85820120.snap.jpg (2011-11-30 17:04, 47.03 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9401

作者: 了了 时间: 2011-11-30 17:04

下面这个是正常细胞的样子：

图片附件: 93381045.snap.jpg (2011-11-30 17:04, 45.34 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9402

作者: 了了 时间: 2011-11-30 17:05

再发一下培养基外观：出现浑浊

图片附件: 21850230.snap.jpg (2011-11-30 17:05, 24.69 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9403

作者: 了了 时间: 2011-11-30 17:05

显微镜下的细胞：

图片附件: 77732261.snap.jpg (2011-11-30 17:05, 28.47 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9404

作者: 白白的 时间: 2011-11-30 17:06

***细胞污染解决方案:
描述:开始是一个一个的小点,小点会成片,浮在培养基中,换液可以去处,换液并用PBS清洗后细胞会很干净,看不见这种污染了.培养基不变黄,应该不是细菌.但影响细胞生长,细胞不长并慢慢死去.

图片附件: 56724921.snap.jpg (2011-11-30 17:06, 25.45 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9405

作者: TAT 时间: 2011-11-30 17:07

这是我养的鸭原代肝细胞的图片，里面发现了一些丝丝，和一些看起来不像细胞的东西，请大家帮忙看看是不是我的细胞真菌污染了啊？

图片附件: 65648604.snap.jpg (2011-11-30 17:07, 24.55 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9406

作者: TAT 时间: 2011-11-30 17:07

再发张

图片附件: 19888327.snap.jpg (2011-11-30 17:07, 26.38 KB) / 该附件被下载次数 3
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作者: 笑弯了腰 时间: 2011-11-30 17:08

这是NCI-H295A细胞，为肾上腺细胞，那些圆圈是什么东西，我不知道是不是污染，细胞生长不受影响，培养基也不变颜色，但是随着细胞的增多，这些圆圈圈也增多，有的漂浮，有的也和细胞一样贴壁，夹杂在细胞中，请教各位大侠，盼答复。
这张是200倍镜下的。

图片附件: 58933991.snap.jpg (2011-11-30 17:08, 76.61 KB) / 该附件被下载次数 4
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作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 17:08

这是NCI-H295A细胞，为肾上腺细胞，那些圆圈是什么东西，我不知道是不是污染，细胞生长不受影响，培养基也不变颜色，但是随着细胞的增多，这些圆圈圈也增多，有的漂浮，有的也和细胞一样贴壁，夹杂在细胞中，请教各位大侠，盼答复。
这张是200倍镜下的。

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貌似死亡细胞

作者: abc816 时间: 2011-11-30 17:10

我请教了了相关的老师，有人说是细胞太密集，照成，细胞挤出来了，如果如楼上所说是死亡的细胞，可是这些圆圈是贴壁的。我的细胞有一个特征就是能重叠的生长

作者: 二丫头466 时间: 2011-11-30 17:10

一旦发现有某瓶细胞污染了，是不是就该把培养箱消毒一下呢？这样工程会不会太大了啊？

作者: 911 时间: 2011-11-30 17:11

培养箱水盘中放上饱和的硫酸铜溶液可以防霉菌，每半个月到一个月更换一次。

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请问具体的方法?直接将饱和的硫酸铜溶液加入水盘中还是怎样?具体的量如何?谢谢!

作者: 缘yuan 时间: 2011-11-30 17:11

请问这个黑黑的一点一点的是什么感染啊？支原体吗？还是黑胶虫啊？

图片附件: 97967306.snap.jpg (2011-11-30 17:11, 27.53 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9409

作者: caihong 时间: 2011-11-30 17:12

我养的细胞今天污染了一瓶，细想还是自己无菌操作不够认真，所以时刻提醒自己无菌操作。

作者: tianmei001 时间: 2011-11-30 17:12

我的细胞最近一直不好，不停的死，复苏完的细胞也长得很慢，长满了传代后，第一天看着很好，第二天就开始死，然后天天往下死，最后死光光！培养液中有许多小黑点，不知是细胞碎片还是污染？
一直没有找到原因，可有高手指点迷津？

作者: HP007 时间: 2011-11-30 17:13

培养的时间太长了吧?

作者: 缘yuan 时间: 2011-11-30 17:13

有这个可能，可是，我复苏的是在-80里冻的三个月左右的细胞，冻之后养的同一批细胞近3个月还是可以的。
我还有一种细胞是复苏后头2天还好，有40-50%，一直不长，然后一点点的往下死！我那个心疼呀！这个状态估计即使长起来一传代也得完蛋吧！还找不到原因！？
我的实验该怎么继续呀！

作者: 了了 时间: 2011-11-30 17:14

我的细胞被低倍下是小黑点，高倍下是亮点的东西污染了，还有就是低倍下有比小黑点大几十倍的亮点的东西在缓慢的游动，小黑点的是快的布朗运动，请资深人士帮忙分析！谢谢！

作者: 969 时间: 2011-11-30 17:14

貌似俺滴细胞也是黑色的、还会做布朗运动的东东在污染，40页的帖都看完了，还是没有得到完整的解答呀，***各位大虾帮帮忙。。

作者: TAT 时间: 2011-11-30 17:15

我的难道也是白色念珠菌，看来要从操作入手了。

作者: loli 时间: 2011-11-30 17:15

我的、、貌似是真菌和细菌都有啊╮(╯▽╰)╭╮(╯▽╰)╭，坑爹呢，前天刚1传4的，已经自我感觉特么的小心翼翼了，还是木有躲过去啊╮(╯▽╰)╭╮(╯▽╰)╭╮(╯▽╰)╭

作者: hold住 时间: 2011-11-30 17:16

细胞污染：细胞培养了3天，培养液（添加抗生素和血清）pH值下降较快；接种病毒后约24小时细胞培养液pH值快速上升，取样400X观察培养液中有极少黑色小点在做布朗运动，静止常温放置24小时，取上清液中观察如上图（400X）布满杆状黑色污染物，并且部分污染物在做快速的直线运动。请各位大侠帮助判断是什么污。

图片附件: 11584211.snap.jpg (2011-11-30 17:16, 55.39 KB) / 该附件被下载次数 6
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作者: utt0989 时间: 2011-11-30 17:17

这就是楼上几位所说的洋葱伯克霍尔德菌，不知道“小黑虫”是不是就是该种菌，不过我们镜检了一下血清，里面绝对是不干净的，在这里附上图供大家参考

图片附件: 16737254.jpg (2011-11-30 17:17, 49.29 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9411

作者: utt0989 时间: 2011-11-30 17:17

这是400倍镜下，血清中看到的，购买的是四季青的胎牛血清。供大家参考

作者: utt0989 时间: 2011-11-30 17:18

上述没有表达清楚，附上的那篇文献是洋葱伯克霍尔德菌，不知道“小黑虫”是不是就是该种菌。

而图片我们判断是链球菌，主要是想大家可以留意一下自己的血清，可能也会发现里面有菌。

作者: utt0989 时间: 2011-11-30 17:18

我的细胞遭此大难！
还请高手们给我指教指教＞

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应该是细菌污染

作者: utt0989 时间: 2011-11-30 17:19

我的细胞遭此大难！
还请高手们给我指教指教＞

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应该是细菌污染

作者: bohe221 时间: 2011-11-30 17:19

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图片附件: 78205868.snap.jpg (2011-11-30 17:19, 53.27 KB) / 该附件被下载次数 5
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作者: ffooll 时间: 2011-11-30 17:20

请高手帮忙看看这两张图片中，细胞污染是什么污染？细胞培养液没有变色，但是变浑浊。本人培养的是原代心肌细胞，种皿后发现细胞很少贴壁，并发现如图所示的东东。

图片附件: 31027759.snap.jpg (2011-11-30 17:21, 47.23 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9413

图片附件: 34380933.snap.jpg (2011-11-30 17:21, 44.29 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9414

作者: DNA 时间: 2011-11-30 17:22

我养的是BHK-21细胞，最近半月老出现小黑点污染。当我把细胞传到24孔板中后的第二天就出现了下图中很多小的黑色杆状生物，并且运动很迅速，跟蚊子的幼虫孑孓在水中的活动及其类似，来回游来游去，有的直线运动，有的自旋运动。目前还不确定是什么污染的，将其接到LB培养基中摇床摇一晚后，液体LB已完全浑浊，初步估计是细菌污染。

图片附件: 32592273.snap.jpg (2011-11-30 17:22, 94.91 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9415

作者: caihong 时间: 2011-11-30 17:22

中间一团一团的那个是否为白色念珠菌，请大家帮忙看下，这是胃癌细胞MKN-28，它长得不快

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作者: 一叶 时间: 2011-11-30 17:23

***知道上图是否为白色念珠菌感染，为何它也不影响细胞的生长

作者: flower-201 时间: 2011-11-30 17:24

我最近养悬浮的肿瘤细胞，发现高倍镜下可以看到细胞与细胞之间或者细胞周围有很多的透亮的微小生物，运动剧烈，但是又不像普通的细菌感染，但是不影响细胞抱团生长，而且培养基也不浑浊，不知道各位高手有没有类似的情况，望高手们解惑，谢谢！

作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 17:25

请大家帮忙看看我的细胞是什么污染。培养基内有很多不停运动的小黑点，像细沙一样培养基看起来不像是浑浊，但是可看到很多白色细沙样的东西，细胞基本上还是贴壁的，在板上长了不到两天，
第一张：24孔板，100倍镜，有小黑点，会动，这些圆圆的东西不知道是什么，不是死细胞，在正常细胞中没有这个。

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作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 17:25

第二张：24孔板，200倍镜，有很多小黑点，会动，还有一团一团的亮的东西不知道是什么，确定不是死细胞，细胞基本上都还是贴壁的，时间长了细胞就会死亡

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作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 17:26

第三张：96孔板，40倍镜，有一块比较亮，小黑点也比较少，周围则长满密密麻麻的小黑点，确定不是光线原因。96孔板中有些孔是这样的，有些孔到处长满了小黑点

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作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 17:26

第四张：24孔板，40倍镜

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作者: 月牙牙 时间: 2011-11-30 17:27

我养的的原代星形胶质细胞，用塑料瓶养的，瓶里的细胞从来没污染过，就是铺到板上给药处理后才出现污染，所以细胞培养所用的试剂应该是没问题的，近一个月都是这样，操作应该也是没问题的，出现问题后全部清理过，操作也更加小心。药物也是新配的，但是没有过滤，因为以前都是这样配药的，没出现过药物污染现象，为了排除原因，接下来想将药物过滤一下看看结果如果，现在仍在一步步排除原因。希望大家帮忙分析一下，这是什么污染，该如何寻找原因。问题若不解决根本就做不了实验，所以本人非常着急，请大家帮帮忙，谢谢。

作者: one 时间: 2011-11-30 17:27

遭遇细胞污染，一夜之间细胞背景上都是黑点，高倍镜下在原地轻微运动。细胞培养液轻度浑浊。请医院细菌培养了一下，确定是G-杆菌，很可能是洋葱伯克霍尔德菌

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作者: ladyhuahua 时间: 2011-11-30 17:28

我的细胞也总是污染，但是我自己和环境的卫生没的说了，那还污染，我就没办法了，但是还得做，我该怎么办，大家再帮我想想啊~~~~~~~~~~

作者: 园丁## 时间: 2011-11-30 17:29

请问我的细胞有无污染？好像近三天隔夜就出现这种情况！但是每次换液后细胞贴壁还是挺好。

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你这细胞果断扔掉不解释啊！

作者: 阿敏 时间: 2011-11-30 17:29

其实，每种细胞多养两瓶，很多细节也说不清楚，遇到一瓶有问题，也有个补救。
另外，背景小黑点，或许是污染，或许不是，原因也很多，其中有细胞死亡碎片，培养基杂质等。一般出现在细胞生长状态不好，细胞崩解，外形尚有，但已成小碎点。

作者: zhezhe 时间: 2011-11-30 17:30

我的慢病毒侵染完成这的了肿么办啊？

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作者: 969 时间: 2011-11-30 17:30

近日细胞频遭不测，请教各位大虾是什么污染？见图：培养液中可见一类黑色小虫，生长迅速，几小时即满布视野，镜下快速运动，单个不成串。

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您现在知道是怎么回事了吗？或者怎么处理了吗？我也出现了，每次都是复苏细胞的时候，传一代到两代就爆发式的增长，对培养基，血清，胰酶都做过单独培养，没有任何问题。复苏了好几次，都没有办法养下去，严格按照无菌操作来的，我现在都不知道该怎么办！一个多月了都做不上实验！

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