蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术,也是目前的研究热点之一,目前我国也有不少医药研发外包服务公司提供了蛋白分离服务。美迪西生物医药是一家临床前医药研发外包服务公司,可以承接从mg到kg级的化合物纯化分离服务。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,其分离纯化应遵循以下原则:
1、总体原则
(1)纯化前对样品的来源,目的蛋白的理化性质及生物活性要做充分了解。
(2)纯化前明确纯化所要达到的目的。
(3)根据所要达到的目的在回收率,纯度,成本等之间合理取舍次要指标,把主要指标放在第一位。
2、纯化过程
纯化每一步都充分利用目标蛋白和杂质成分理化性质差异。
3、纯化方法的选择,如下表所示
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层析方法
[/td][td=1,1,114]亲和层析
[/td][td=1,1,114]凝胶过滤层析
[/td][td=1,1,114]离子交换层析
[/td][td=1,1,114]疏水层析
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]分离机制
[/td][td=1,1,114]特异性亲和
[/td][td=1,1,114]大小
[/td][td=1,1,114]电荷
[/td][td=1,1,114]疏水性
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]选择性
[/td][td=1,1,114]非常高
[/td][td=1,1,114]中等
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]高 中等
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]载量
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]低
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]高
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]纯化速度
[/td][td=1,1,114]中等
[/td][td=1,1,114]中等 低
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]高
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]生物相容性
[/td][td=1,1,114]好
[/td][td=1,1,114]非常好
[/td][td=1,1,114]好
[/td][td=1,1,114]中等 好
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]目标蛋白的得率
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]高
[/td][td=1,1,114]中等 高
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]捕获浓缩阶段
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][td=1,1,114]+
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]中间纯化阶段
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][td=1,1,114]+
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][/tr][tr][td=1,1,114]精制纯化阶段
[/td][td=1,1,114]++
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][td=1,1,114]+++
[/td][td=1,1,114]+
[/td][/tr]')
4、不同阶段突出重点。
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