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标题: [求助]大鼠乳鼠心肌细胞培养 [打印本页]

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:27 标题: [求助]大鼠乳鼠心肌细胞培养

[求助]大鼠乳鼠心肌细胞培养

我最近刚开始做乳鼠心肌细胞培养，做了好几次都不成功，一是收获的细胞数太少，二是细胞活力太低，不能搏动，心中抑郁，不知何故，希望大家好心能帮我分析一下原因。在此多谢了！
1，取10只乳鼠
2，消化酶 “混合胶原酶+胰酶”浓度分别为0.06%，0.1%， 3，消化第一次加3ml消化液10分钟，弃上清，但发现此时上清很粘稠，难以吸取
4，第二次加消化液3ml消化8分钟，吸取上清时亦难以取出，仅少量，于是再消化，时间再缩短至5，4，3分钟，反复消化直至组织完全溶解。因为上清难取，每次都取长达2-3分钟
5，离心 1000转*10分钟，弃上清，未完全丢弃，管底预留约1ml液体。
6，收获细胞数量不多，只能养在两个50ml培养瓶中。
7，用DMEM+20%胎牛血清（国产）培养基
8，2小时差速贴壁分离
9，48，72小时后仍没有发现心肌细胞跳动，却发现很多死细胞碎片

[ 本帖最后由雪山飞鹿于 2011-12-15 16:16 编辑 ]

作者: glass 时间: 2011-12-15 15:28

没做过，等别的战友看看消化是否有问题。

作者: abc816 时间: 2011-12-15 15:29

首先十只乳鼠，不知道你杀和取心的速度，如果时间久也可以导致心肌细胞状态。
第二感觉你取心可能不是太好，把心脏根部白色的组织全剪了，而且你剪心肌可能太碎，否则不会开始就是粘稠。
胶原酶浓度太高，降到0.4%

作者: 乌贼老弟 时间: 2011-12-15 15:29

如果碰到粘稠的情况,建议你在密封的管子里面使劲摇将之摇散,不然你会损失很多细胞
10只乳鼠起码都可以养3个75的培养瓶,看来你确实浪费了不少细胞.
离心要彻底,因为胶原酶不能被血清中和,虽然胶原酶对细胞的破坏比较小,但也不要忽视,它会影响贴壁的效率.

作者: yychen 时间: 2011-12-15 15:30

混合胶原酶是什么酶和什么酶的混合？

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:31

很感谢大家！
胶原酶是买的1型和2型的混合酶，刚开始时是用的单纯2型胶原酶浓度也是0.06%，但是培养的心肌细胞贴壁不好，不跳动。所以就更换了。
我考虑是消化过度的问题，但是要组织消化完全，只能慢慢来，一般10只我用2个小时。
另外请大家帮我参考下用的胰酶的浓度高么？
离心管里离心后，要把液体都要倒掉，还是要保留1ml左右，以免细胞损失？
再次表示感谢！

作者: 乌贼老弟 时间: 2011-12-15 15:32 标题: 回复 #6 雪山飞鹿的帖子

如果是2型,就配0.08%左右就可以了
你的消化时间明显过长,还是那个问题,摇动不充分,你要充分摇动的话你会发现细胞其实很容易消化
我建议你保留1毫升左右
胰酶浓度我用的0.125%.两者1:1体积混合

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:36

好的！我照你所说方法试试！
我确实在消化过程中只是轻轻摇动。害怕细胞在摇动中损伤，可能是过于小心了才是消化时间过长。
酶的浓度就暂不更换，估计是***作的问题！
另外再问下：我用的是低糖的DMEM培养基，这是否也影响细胞生长？

作者: 乌贼老弟 时间: 2011-12-15 15:37 标题: 回复 #8 雪山飞鹿的帖子

最好用高糖,细胞初始生长阶段糖很重要
但低糖似乎也不影响,因为我两者都用过,几乎没有什么区别

作者: 爱老虎游tt 时间: 2011-12-15 15:38

您好，我现在做的也是乳鼠心肌细胞的培养，经历了半年的是失败现在我可以充满自信的说乳鼠心肌细胞培养的技术我已经掌握了。个人感觉还是你的消化吹打问题，而不是胰酶或胶原酶的问题，我一直用的都是0.08%的胰酶。就是买来的国产0.25%的胰酶。每一毫升的胰酶加两毫升的PBS，最终浓度大约为0.08%。细胞一直长的不错。关键还是你消化吹打的问题。你是用吹打管直接吹打消化心肌组织还是在恒温振荡水浴箱中消化或者用磁力搅拌器搅拌消化呢，原来我消化心肌细胞时是在青霉素小瓶中剪碎，洗干净后就直接加入胰腺酶消化。最多消化3次，且每次时间只有短短的4分钟后青霉素小瓶中的心肌细胞就变成胶冻状了，连上清都没办法吸出，得到的细胞很少。后来把磁力搅拌器用上了，情况就好了很多，首先消化次数增加了，10只乳鼠能消化10几次左右，每次的消化时间大约为8分钟。得到的细胞也很多，搏动情况也很好。个人感觉如果用吹打管吹打消化的话一个是消化液与心肌组织不能充分混匀消化，打个不太合适的比喻，就像用洗衣服时用手洗和洗衣机洗的道理是一样的，你可以试着用一下磁力搅拌器看情况能否好转，祝顺利。

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:41 标题: 回复 #10 爱老虎游tt 的帖子

谢谢！
说实在，我养心肌已经有一个多月了，养了10几次了，心中烦闷。总是消化所得的细胞数目很少，并且状态不好，贴壁差，死细胞多，不跳动，已经快丧失信心了！找不到是什么原因，觉得科研真是太难！听大家说说心里才有了点底子。
我消化心肌是不吹打，剪碎后放入青霉素瓶中，直接在37°C摇晃的。就跟你说的那样，就是4分钟消化也很粘稠，难以吸出上清。
你说的磁力搅拌器我们实验室里没有，能自己制作么？
谢谢！

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 15:42

磁力搅拌子可以自己制作，我们就是把大头针折断，然后放入离心管或带有帽的试管。磁力搅拌器是科室买的，好像也不太贵，几百元。但用处很大，配置药物时用的很多。如果是水浴振荡的话效果应该不错的啊。试着把振荡的速度加快，或者在青霉素小瓶中将心肌组织剪碎后转移至离心管中，这样的话振荡的幅度会加大，效果会不会好些呢，个人感觉青霉素小瓶的容积太小。

作者: ha111 时间: 2011-12-15 15:42

我重新配制了胶原酶，胰酶，上次配制酶用的PBS时候没有调节PH值，这次调成了7.2。培养基换成了高糖的DMEM。还是原来的消化办法，10只老鼠消化下来将近2小时。（因为实验室都是用此法消化，也没有再按楼主所说自创新法）
培养48小时后观察，心肌细胞有微弱的搏动，但细胞低倍镜下观察发黑，实验室的人说是状态不好，快死亡了，不知什么原因，希望大家给点意见。
谢谢！

作者: caihong 时间: 2011-12-15 15:43

我们配胶原酶,胰酶也没有调节PH值,但我们的培养基(高糖)跟血清都用新鲜的,就是买回的胎牛血清分装成许多小份,在做实验当天临时拿出配制,这样做的目的是为了保证培养基与血清的营养成份都不丢失.所培养的原代小鼠心肌细胞捕动还不错.
不知你说的细胞发黑是什么?

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:43

哦，我们的是先把DMEM配成1000ml，分装成200ml一瓶，余下的-20°C保存，将血清加入，配成20%FBS，不过这要很多次才用完。
我细胞发黑，自己分析是细胞濒临死亡。跳动弱。
后来我按帖子中群友所提方法，将混合胶原酶降为0.05%，胰酶仍为0.01%
再培养，细胞状态就好点了，没有明显的发黑的情况了，不过就是收获细胞太少了，我10只乳鼠心脏才养2个50ml瓶子，这样细胞密度才够大，以前养3个，细胞很稀，不会出现抱团搏动。我也不知道具体在哪里损失细胞了，最可能是离心后去细胞沉淀时，想问问你们是怎么克服的？
另外想请教下，你们向培养基中加BRDU和HEPES么？具体怎么加啊？
你们做过心肌细胞纯度分析么？具体用什么方法啊？我的问题是不是太多了，可以选择性回答，不好意思。

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 15:44

如果有条件可以加BRDU。或者先不加BRDU直接用免疫细胞化学染色法鉴别心肌细胞的纯度，如果能达到实验的要求就可以了。具体的方法就是利用心肌细胞肌节性肌动蛋白（α-sarcomeric actin）的免疫细胞化学染色法进行心肌细胞的鉴定，可以先搜索一下本版。
1在细胞接种到培养板之前将事先用多聚赖氨酸处理过的盖玻片放在培养板内，然后在培养板内接种细胞进行培养。
2细胞培养 72 小时后，将盖玻片取出，用 4℃PBS 冲洗 3 次。4%多聚甲醛室温下固定 20 分钟，PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
3 3%H2O2 孵育 10 分钟，PBS 冲洗 5 分钟×3 次，滴加封闭血清，室温孵育 15 分钟，弃去血清。
4滴加一抗（α-sarcomeric actin），阴性对照采用 PBS 代替一抗。
5 4℃湿盒过夜孵育。PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
6 滴加生物素标记二抗，37℃，反应 15 分钟，PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
7滴加辣根酶标记链霉素卵白素工作液，37℃，反应 10～15 分钟，PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
8 DAB 显色，蒸馏水充分冲洗。
9复染，脱水，透明，封片。
10 观察、拍照

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:44

楼主解说清晰，是第一人。
不过我这两次听从建议，已经能使心肌搏动了，我有后续的心得，随后慢慢道来，大家给了很多有用的建议。
将胶原酶浓度降低后，没有影响消化，一半第1次37°恒温消化10分钟弃上清，第二次就改为8分钟，后来就是3分钟，2分钟，总共就8次左右就使组织消化完全，如此养了细胞搏动起来了。

作者: DNA 时间: 2011-12-15 15:45

生物迷你好！很开心能遇上同道中人！我是新手上路，请多多指教。我刚刚做了一次原代，虽然能长出很多细胞，形态和心肌细胞相似，但是搏动的细胞不多，传代后却见不到搏动，而细胞却继续增值。现在我很惆怅，不知道这些细胞是什么？也不知道真正的心肌细胞到底长什么样？所以我想问你有没有培养的心肌细胞照片

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 15:46 标题: 回复 #18 DNA 的帖子

你好，关于心肌细胞的图片可以搜索本版。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=3168731&sty=1&tpg=1&ppg=7&age=0#3168731')
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=3168731&sty=1&tpg=1&ppg=8&age=0#3168731')
能具体说一下你的培养过程吗，用了差速贴壁吗。多长时间观察的。另一般认为成年的心肌是不能分裂的，所以心肌一般用原代培养，基本不能传代。你为何要传代培养啊。

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:47

怎样判断心肌细胞的生长状态好不好啊？我只知道细胞搏动了，不知道好不好，是否可以用于实验处理。文献上都是说3天后就用于实验分组处理了。

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 15:47

培养的心肌细胞大致分为：1、细胞悬浮期：细胞接种后至孵育23h，培养的细胞由圆形变为非圆形，并沉淀贴壁。2、贴壁期：细胞孵育24h至96h，活细胞贴住瓶壁。3、指数增生期：细胞孵育从96h开始为指数增生期。4、维持期：从第8天起进入维持期。一般对指数增生期的细胞进行处理。所以第4天可以分组处理。你可以做一下预实验，看是否有结果。

作者: 铜雀 时间: 2011-12-15 15:48

请问大家做原代的时候，一般差速贴壁几次？什么时候开始？

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:49

我做是差速贴壁1.5小时，摸索出来觉得挺好。文献报道不一，有的差速一次，这种比较多见：于培养开始第45分钟一次；还有第1小时一次；第2小时一次的；还有的差速两次：第1个45分钟，第2个45分钟：或间隔1小时。

作者: 了了 时间: 2011-12-15 15:50

请问贴壁太多次,会不会损失细胞?还有如果看不见细胞搏动是不是就说明培养出来的不是心肌细胞?

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 15:50

我觉得贴壁多次会损失细胞，因为部分心肌会贴壁的，会差速时损失掉，但是这样可能心肌会比较纯。心肌在以后会贴壁，搏动，这也是和成纤维细胞的根本差别。刚开始可以先等几天观察，3，4天一般会跳动的很好了。

作者: 月牙牙 时间: 2011-12-15 15:51

昨天刚做了次，心肌原代培养，感觉出现蛋清样黏稠物质，就说明消化过度了
还有在剪碎心肌时，不要剪的太小，组织块要均匀
心肌细胞培养的关键就在与消化。
还有想问问大家，一只乳鼠最多可以得到多少细胞？
谢谢了

作者: guagua 时间: 2011-12-15 15:51

培养的心肌细胞大致分为：1、细胞悬浮期：细胞接种后至孵育23h，培养的细胞由圆形变为非圆形，并沉淀贴壁。2、贴壁期：细胞孵育24h至96h，活细胞贴住瓶壁。3、指数增生期：细胞孵育从96h开始为指数增生期。4、维持期：从第8天起进入维持期。一般对指数增生期的细胞进行处理。所以第4天可以分组处理。你可以做一下预实验，看是否有结果。

你好！我对于你的说法有个疑问，请指教！心肌细胞没有分裂增生的能力，怎么会有指数增生期呢？

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 15:53

你好！我对于你的说法有个疑问，请指教！心肌细胞没有分裂增生的能力，怎么会有指数增生期呢？

==============================================================================================================

我们认为整体动物心肌细胞的增值能力在出生后是能保持一个短时期。例如大白鼠在出生三周后其DNA合成所需的酶的活性及细胞增值能力就明显地降低至成年鼠的最低水平。此后，收缩蛋白大量z增加，细胞增大，对某些增大心脏的刺激，仅引起心肌肥大（细胞大小增加）而没有增值（细胞数增加），生后1-10天的乳鼠心脏均可采用，但以2-4天的最好，此时心肌细胞已充分分化，适于做各种研究，而出生4天以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的细胞。

作者: utt0989 时间: 2011-12-15 16:00

我们认为整体动物心肌细胞的增值能力在出生后是能保持一个短时期。例如大白鼠在出生三周后其DNA合成所需的酶的活性及细胞增值能力就明显地降低至成年鼠的最低水平。此后，收缩蛋白大量z增加，细胞增大，对某些增大心脏的刺激，仅引起心肌肥大（细胞大小增加）而没有增值（细胞数增加），生后1-10天的乳鼠心脏均可采用，但以2-4天的最好，此时心肌细胞已充分分化，适于做各种研究，而出生4天以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的细胞。

==============================================================================================================

你好！我也养了几个月的细胞了，我取三天之内大鼠心脏培养，未见心肌细胞增殖啊。我也没有具体的镜下计数细胞的量，但是之间细胞体积增大未发现数量增多。谢谢！

作者: zhezhe 时间: 2011-12-15 16:01

等到第五天,我还是见不到细胞搏动,郁闷呀!
问题到底出在哪里呀???

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:02 标题: 回复 #30 zhezhe 的帖子

把你的做的过程详细的说说，说不定大家就能指出你的问题所在。

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:03

我最近又养了次心肌细胞，细胞是搏动了，但是却发现心肌细胞约有2/3发黑，我看了我们实验室里别人养的细胞，却没有这个现象，都比较亮。我的操作应该没有问题，唯一的可能就是我取上清时是培养基终止液：上清=1：1。不过文献报道时也是这样啊？
不知大家有碰到这种情况么？该怎么解决啊？希望给予帮助，现在正在苦恼中............

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:04 标题: 回复 #32 雪山飞鹿的帖子

你所说的细胞发黑具体是指什么，是细胞外面和细胞间有类似黑色的块状物质，还是细胞胞浆发黑。前者的话我也碰到过，个人感觉是是细胞碎片，但这种细胞碎片在换液的时候很不好去除，并且在细胞搏动成团的地方聚集的很多，有时甚至会遮盖心肌细胞，影响观察视野。后来试着在消化时将所收集到的细胞悬液暂时放于4度冰箱中，而不是一直放在超净台中，并且在将细胞悬液离心的次数改为两次，以期减少碎片类物质。情况会好些。

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:04 标题: 回复 #33 生物迷的帖子

我说的细胞发黑是细胞外面粘附一圈黑色物质，细胞之间也有黑色的小絮状团块，细胞胞浆倒没有明显的发黑。细胞绝对没有污染，因为成纤维长的很好。我照你教的方法再做。
不过就是有点搞不懂我做的为什么会这样。同实验室的人做的就没有出现这样的情况。
另外，为了解决这个问题，在操作过程中还需要注意什么吗？
再次感谢！

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:04 标题: 回复 #34 生物迷的帖子

对于这个问题我有时也很头痛，有时候也找不到原因。做三五次就会出现一次这种情况，个人分析：1、这些黑色的物质团块可能是一些活性差的细胞死亡后的碎片，在消化的过程中磁力搅拌的速度是不是有点快造成心肌细胞的损伤导致其活力差而出现，可以试着使搅拌子的速度减慢些。2、由于是用铁制的大头针做的磁力搅拌子，在高压后烤干后有时甚至会生锈，这样在消化的时候大头针就会与消化液和细胞直接接触，是否会对细胞产生影响。可以买最小规格的磁力搅拌子规格不到一厘米的。或者将大头针放在细玻璃管中，用酒精灯将烧灼试管的两端将其封闭，这样大头针就不会直接与消化液接触了。对次问题自己还是不能肯定原因，。期望其他有经验的群友能帮助你。

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:05 标题: 回复 #35 生物迷的帖子

不知怎么说感谢啦！你的分析已经够透彻了！
那我以后操作轻柔一点，再看效果，可能是有点粗暴操作了吧！

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:06

我给细胞拍了照片，你帮着给看看吧，细胞密度有点大，是六孔板，平均约2只心脏一个孔。心肌搏动很好，每分钟100次以上。就是有点黑，不知道这对细胞因子表达有影响没有？

图片附件: 62555371.snap.jpg (2011-12-15 16:06, 41.98 KB) / 该附件被下载次数 11
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9915

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:06

还有一张，

图片附件: 39136544.snap.jpg (2011-12-15 16:06, 38.95 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9916

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:07

有两个图片先参考一下，这两个图片来自建立细胞污染专区，
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=516319&sty=2')
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=516320&sty=2&age=0&tpg=1&ppg=8#516320')
你看一下是不是类似。
我的细胞也遇到过这种情况，你的细胞存在这种情况几天了，黑色的物质有没有增多。个人怀疑还是污染了，但也不能定，。看一下其他群友的意见。

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:07

第一个图片

图片附件: 73158469.jpg (2011-12-15 16:07, 38.2 KB) / 该附件被下载次数 4
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9917

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:07

高倍镜下的图片

图片附件: 84870609.jpg (2011-12-15 16:07, 30.7 KB) / 该附件被下载次数 5
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9918

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:08

对以上两张照片群友的回答是：这一张是真菌感染，看见其中的两个连在一起的花生样的东东了吗？那就是串珠样的真菌。参见帖子：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=745728&sty=2&age=0&tpg=1&ppg=9#745728')
期待其他群友能给出肯定的回答，解决共同存在的问题。

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:08

还有一张，

图片附件: 38825490.snap.jpg (2011-12-15 16:08, 40.92 KB) / 该附件被下载次数 7
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9919

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:09

我昨天很认真的又做了一次，尤其是在终止消化时加足了培养基，先取出的放4度冰箱，最后一起离心了。这次的细胞密度不大，平均0.5×10的6次方/mL.
可是，今天去观察细胞，又发黑了，就像上面照片一样，发黑的量约有1/2，一下子，我的心就凉了。
我不知道错在哪里，你帮我分析一下吧！
谢谢啦！

作者: 雪山飞鹿 时间: 2011-12-15 16:09

我今天看了，照图片的细胞，是细胞核看起来黑，但没有那种絮絮状的漂浮物。我想着应该不是污染。因为细胞没有溶解，并且搏动很好，培养基的颜色没有明显变成橙汁样颜色，现在一直养着，已经养了将近10天了，仍然是这个样子。

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:11

你先继续养着看看有何变化，我在去年冬天做的时候没出现过这种情况，但这三个月来也出现了你这样的情况，当时也分析了好多原因，至今不解，你那里的气候怎样，我在南方，这阶段是培养细胞最不好的季节，实验室培养箱的搁板不到一周就可以看到很多灰绿色的霉菌菌落，空气中的湿度也大，也只能勤擦孵箱，至少每周一次。
操作过程方面既然能培养出搏动的心肌细胞应该没有问题，要注意的还是无菌操作。尽管这么说可自己不弄不来，不知道那次就会出现。

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:11 标题: 回复 #45 雪山飞鹿的帖子

如果是这样，你可以继续你下一步的实验看看有无结果，希望不是个馊主意。

作者: toy 时间: 2011-12-15 16:12

你也碰到这情况啦！
这样想来有可能是污染了。我在湖北，这里也很热，都30多度了。
我也许是无菌操作不够规范吧！明天我再试试。
那我把东西重新更换下。
谢了！

作者: dragonkilly 时间: 2011-12-15 16:12

最近我又做了一次原代,我这一次消化得比较彻底,但是我发现不管怎样消化和吹打,都不能完全把细胞分离成单个细胞(当然大部分已消化单个细胞),我还是可以看见比较小的细胞团,它贴壁后还成圆形,但是它周围爬出来的细胞都是不规则形状的.这次培养不到24小时就可以看见那些小的细胞团已经开始搏动,但是单个细胞搏动的状态依然不是很好,不知道为什么?
各位高手帮帮忙啦!

作者: dragonkilly 时间: 2011-12-15 16:13

我还想请教一下,在心肌细胞培养过程中,哪些细胞是成纤维细胞?刚开始培养几天,细胞还挺干净,可是心肌细胞长大以后就很难辨别了,有没有高手可以结合你们培养的心肌细胞图片给我讲解一下呀!现在我见到的基本是不规则形状的双核细胞!

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:13 标题: 回复 #50 dragonkilly 的帖子

我这有关于心肌细胞和成纤维细胞的区别，忘记在那本书上看了，你看一下是否有用。
在相差纤维镜下，从细胞的搏动和形态可以区分出心肌细胞核成纤维细胞。成纤维细胞不搏动，平坦、胞浆清亮、一般比心肌细胞大，胞核也较大，有多个核仁，（可达7-8个）；而心肌细胞搏动，细胞致密，高度折光，细胞核小，常有1到2个核仁。
细胞培养24小时内，在显微镜下可观察到细胞开始贴壁生长，心肌细胞初为圆形，后成梭形，可有单个细胞开始搏动，继而细胞逐渐在瓶壁表面展开，有些细胞底部三处贴壁形成三角形，而项部突出表面，最后细胞更加张开，伸出伪足，形成不规则的星形。随着细胞不断分裂、增殖，逐渐增多，细胞伸出仍足相互接触交织成网，在培养第3、4天可形成细胞单层或细胞簇呈放射状排列的同心圆状。

作者: dragonkilly 时间: 2011-12-15 16:14

我培养的细胞单个搏动不明显,一直到细胞交织在一起,形成团状后,才看到明显搏动,不知道为什么?

作者: 生物迷 时间: 2011-12-15 16:14 标题: 回复 #52 dragonkilly 的帖子

呵呵，这正是心肌细胞的特性，交织成簇时搏动才明显

作者: dragonkilly 时间: 2011-12-15 16:15

可是我看了很多文献,其中有讲可以看见许多单个的细胞同步搏动,可惜我就很难观察到这个美丽的景象啦!!!

作者: dragonkilly 时间: 2011-12-15 16:15

我想请问一下D-hanks和pbs的区别?一般是用什么溶液来清洗组织和细胞?
还有,Ca离子和Mg离子对心肌细胞有什么影响?

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