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标题: [求助]关于ＭＴＴ测药物半抑制率的困惑 [打印本页]

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:19 标题: [求助]关于ＭＴＴ测药物半抑制率的困惑

[求助]关于ＭＴＴ测药物半抑制率的困惑

关于ＭＴＴ我有很多很多困惑，请各位高手解答一二
１，看文献有说490nm,又说测570nm的OD值的。经过在园子里学习，说是如果是ＤＭＳＯ溶解就是用４９０ｎｍ，但各处说法都是不一样的。是否是哪一个都可以？还是哪个更好？
２，加药后测ＩＣ５０是２４小时后测？但如果我这个细胞本身长的比较慢，２４小时对药物都没反应，怎么办？能否７２小时后测？
３，如果是测生长曲线，测个６天的。隔天换液？还要加药？
４，ＯＤ值是在２以下就很好，还是在１以下？我实验室的师姐都是做２以下就ｏｋ

作者: one 时间: 2011-12-16 17:24

1、无论你用什么溶解，要想判断自己所测波合适否，只要取部份最后的溶解液上紫外上作个扫描，自己酶标仪的波长是否在紫外吸收峰的范围中，如果在峰值，那OD值就大，如果不在峰值，则OD值就小，如果在峰谷，测不适合测OD值。
2、OD值当然需要有个范围，一般来讲，对于MTT法，OD值在0.2-1.0范围是比较好的，走出此范畴可能与细胞数就不成线性了，也就不能正确反映药物的作用了
3、IC50的测量时间由你药物对细胞的作用而定，太短太长多不好，一般药物在24-72小时间，当然也有例外的。你镜下观察一下在什么时间段不同药物浓度下细胞的差异最大，此时即为最合适的测量时间
4、细胞生长曲线其实与测IC50差不多，就是连续在五段时间内测量正常及药物作用后细胞的OD值，以OD值对时间作条曲线，至曲线平台为止。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:25

1 第一条可以详细讲讲么？能否举例讲？我比较笨，怕误解你的意思
2，如果超过1的话，是否就可能是细胞数过多或者作用时间过长？？大概有大些原因需要注意？
3，谢谢，这个我懂了
4，因为生长曲线也是要加药的，要不要隔天换液呢？不隔天换液，培养基营养被消耗了，细胞生长差，不能反应药物的作用啊。

还有一个问题：测细胞生长曲线的目的是什么？

作者: 爱老虎游tt 时间: 2011-12-16 17:25

关于MTT测量波长的问题，我以前也疑惑过。后来看了Roche一个MTT Kit的说明书，上面有一幅MTT吸收波长的图，MTT大概在500-600nm波长附近都有很高的吸收值，所以在此范围内的波长都可以用来检测。而有些酶标仪在此范围内只有490nm可以用，所以有些文献是用490nm波长检测的。我现在手头没有那张说明书所以不能说的很准确，你可以试着去Roche网站上搜一下。

关于OD值，就像fishbody战友所说，在0.2-1之间才有比较好的线性关系。如果按标准步骤在加入MTT4小时后加DMSO溶解，OD超过1就是因为活细胞过多。通常可以靠铺板时少铺些细胞来解决。

测生长曲线的目的是观察你药物的作用效果和作用时间呀

作者: glass 时间: 2011-12-16 17:25

１，看文献有说490nm,又说测570nm的OD值的。经过在园子里学习，说是如果是ＤＭＳＯ溶解就是用４９０ｎｍ，但各处说法都是不一样的。是否是哪一个都可以？还是哪个更好？

570的灵敏度会比490高，因为MTT的波长峰在这个范围

２，加药后测ＩＣ５０是２４小时后测？但如果我这个细胞本身长的比较慢，２４小时对药物都没反应，怎么办？能否７２小时后测？

药物反应慢的话肯定要延长检测时间啦，但是要考虑营养是否能跟的上（这跟你种板的细胞数量和培养基决定），我们实验室现在做的一般都是72、96h检测
３，如果是测生长曲线，测个６天的。隔天换液？还要加药？

测生长曲线就是看细胞本身的生长情况，不用加药，加药反而影响了细胞的正常生长；你可以同时做一个换液组和不换液组的对照，种板细胞数量多的话，6天应该是要换液的，换液不用太勤，会对细胞产生搅动影响，保证能提供足够的营养就可以

４，ＯＤ值是在２以下就很好，还是在１以下？我实验室的师姐都是做２以下就ｏｋ

OD值在2以下都是可以的，0.2~1.2之间的线性关系会更好一些。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:26

1、举例说，如果你用DMSO溶解的，测取此溶解液到紫外仪上进行扫描，一般取200-800nm波长范围，即可以得到该物质的吸收峰，此吸收峰中的波长即为你可以使用的波长。
2、如果OD值超过1，可能是细胞数过多，也可能是MTT作用时间过长，也有可能是MTT作用后上清吸弃不完全引起的
4、在做加药的生长曲线的同时，肯定要做个不加药的对照，这样数据才有说服力。如果要换液两者同时换喽。
5、其实生长曲线我们做得很少。它应该反映的是药物对细胞增殖能力的影响吧。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:26

谢谢大家，获益匪浅
我为新手，即将做ＭＴＴ实验，在实验思路上很多都理不清楚。
请教另外实验室做ＭＴＴ的师兄后，他们在做量效的时候，也就是做细胞加药后生长曲线变化的时候，用的是２％的血清培养基。

１，说是如果血清过高，很快１，２天细胞就长满了。绝对不可以用１０％血清。
２，在加药前要血清饥饿２４小时，使细胞达到周期同步化
３，我想问细胞计数是否一定要每次都做？保证每次都细胞铺板数差不多？太痛苦了，实验室毕业的师姐说她都没做过，每次都是细胞长满后铺３，４块９６孔板
４，铺板时，各位怎么保证每孔细胞数都差不多。我每加一行，用枪使劲的吹啊吹！！！　但是心里又怕细胞都被我吹死了。

问题越来越多，请各位见谅，我实在是啥都不知道。实验室已经没人做细胞实验了。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:27

1、不同的细胞其生长速度是不一样的，对血清的要求也可能不一样，不是有一部份细胞是要用胎牛血清的吗。
2、细胞周期同步化对于一般细胞增殖试验好象用不着吧。除非你要考察药物对某一特定周期细胞的作用。而且细胞同步化的方法有多种，如4度培养过夜。
3、每次细胞铺板当然要尽可能一样，如果连细胞读数都不想做，你还做什么细胞试验。
4、不用每加一行就吹。现在铺板可用排枪，铺一块板中间吹一次就够了，除非你的细胞沉得特快。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:27

现在又想到了一个超级重要，同时超级弱智的问题：
每个实验方法里都提到使药物终浓度为多少多少。我对这个不能理解。我的理解有两种。举例说：
1，96孔细胞培养板细胞接种，每孔200μl。空白组不加细胞，加入200μl培养液。然后药物配置终浓度为10ug/ml, 8ug/ml, 6ug/ml.4ug/ml 2ug/ml. 将各种浓度的药加入96孔板，每孔10μl。

2，还是96孔板细胞培养板细胞接种，每孔200μl。然后加药时换夜。配置培养基加药，使加药后的培养基药物浓度分别为10ug/ml, 8ug/ml, 6ug/ml.4ug/ml 2ug/ml。然后加入各孔，96孔板每孔200μl.

就是这个药物终浓度到底是什么意思？？是最后每孔的药品终浓度么？
我倾向于2，但在园子里学习时看见有的人做的是1.

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:27

4、不用每加一行就吹。现在铺板可用排枪，铺一块板中间吹一次就够了，除非你的细胞沉得特快。

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我们没有排枪。
细胞计数板也很烂，看不清楚。哦，我知道要每次都计数了。保证每次铺板的每孔细胞数不要相差太多。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:28

看来我在做时效之前，在进行MTT试验前，应该先测不同接种细胞数条件下的生长曲线？
做一个103，104，105个/mL细胞接种数下7天的生长状态？？

然后看在6天的时候哪个浓度刚达到平台期，那这个接种细胞数就是最适合的么？

有必要么？

作者: one 时间: 2011-12-16 17:29

1、一般铺板时，细胞悬液100ul，待细胞贴壁后，加200l用完全培养基预配好的不同浓度的药液(如果你的最终浓度是10ug/ml，则你的预配液的浓度为15ug/ml，依次类推)
2、至于加药时换不换液，各人爱好。一般如果你的实验在2-3天内结束的话就不用换液了，如时间长那就须换液，也有其他情况需要换液的，比如有的药物在液体中很不稳定，那可能需要常换液了
3、没有排枪，那就辛苦点了。教你一个连续加样的技巧：第1次吸液推按至2档，以后排液均推按至1档，可以保证每次液体相等且不会产生气泡
4、生长曲线做不做由你自己定。细胞数一般以每孔5000-10000个为宜，视细胞的繁殖速度及细胞个体大小而定，控制对照组OD在0.6-1.0左右即可。

作者: eric930 时间: 2011-12-16 17:29

看了上边的很受启发，MTT自己原来有些观点看来不大正确，请问一下，我测的MTTOD值都很低，在0.1以下，这样的值是不是没有应用的意义？我如何才能得到范围在0.2-1.0之间的值呢？我的细胞密度是每孔4万个，我的细胞不增值，以前师姐们也是用这个接种密度，药物时间也一致，但是酶标仪检测我都是用570nm，以前师姐们也是，但是我得出的值都是0.1以下，而我师姐们的在0.4-0.5之间，请问问题可能出在什么地方？非常感谢！！！

作者: one 时间: 2011-12-16 17:30 标题: 回复 #14 eric930 的帖子

你的MTT重新配制试试。MTT要用生理盐水配，不要用培养基配。
另外，MTT反应4小时后，显微镜下观察一下原来细胞的地方应该形成了网状的黑色颗粒。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:32 标题: 回复 #16 kent 的帖子

倒着回答你的问题
3、是可以的，而且这样数据更准，只是xinku你了。而且强烈建议你参照我在上面贴子中介绍的先做个扫描，得到最高峰的那个波长，然后在此波长下测OD，值可能会高好多。
2、建议你在加DMSO前用生理盐水洗涤2遍，注意不要把细胞洗涤下来。
1、加MTT反应4小时后，镜下应该很清晰的网状黑色颗粒，细胞形态是看不到的，但你的呈模糊状，可能原因之一是你的药物是否影响MTT与细胞线粒体间的反应，因此按2洗涤后看一下，原因之二可能是0.1MPBS配制的MTT液不等渗，会否影响细胞与MTT间的正常反应，因此还是建议你用等渗的生理盐水配制。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:32

药物影响了ＭＴＴ与细胞线粒体的反应。第二个，PBS配置的MTT与细胞不等渗，做的时候都没考虑过PBS的PH值。我是按照细胞书上ＰＢＳ的一个配方直接配的，连ＰＨ值都不知道。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:33 标题: 回复 #18 +小生怕怕+ 的帖子

凡是与细胞接触的液体尽可能考虑等渗、pH中性等。
上面分析的两个原因并不一定对，遇到问题总得找点理由吧，仅供参考，希望不是误人子弟。

作者: 911 时间: 2011-12-16 17:34

我以前做MTT时曾发生过这样情况，OD值大小不但和细胞数有关，还和所测细胞代谢状况有关，代谢能力很强的细胞数量很少时测出的OD值也会很高，反之代谢能力低的细胞数量很多时OD也会很低。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:36

1、紫外仪是指紫外分光光度仪，用于测物质的光吸收的
2、生理盐水是0.9%氯化钠，也有地方写成150mmol/L，是一样的
3、我以前没洗过。洗涤这是没有办法的办法，遇到问题总得想办法去解决喽。一般贴壁细胞这样洗涤应该影响不大。注意，洗涤用生理盐水预先37度预热好，不然给细胞额外刺激可能引起细胞脱落。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:36

不是扫描DMSO的吸收峰，而扫描DMSO溶解的MTT与细胞反应生成的那个叫甲zai的化合物的吸收峰。
至于怎么扫描，这是紫外分光光度仪的一个常规测量项目，相当于由仪器以连续波长测一系列的吸收数据，即得到吸收峰。

作者: dotaaa 时间: 2011-12-16 17:37

我刚刚开始培养细胞，所以有很多问题搞不懂，请楼上的各位前辈指点一下：一些文献上说要把细胞数控制在105/ml，但也有文献说是105/孔，所以搞不清楚到底是以孔为单位还是以ml为单位呢？

作者: one 时间: 2011-12-16 17:37

应该是把细胞数控制在105/ml，铺板时每孔100ul即104/ml。
这是指一般情况，具体铺细胞时应根据自身细胞的增殖速度、细胞个体大小等调整细胞数，有4000/孔的，也有20000/孔的，只要最后的测量数据在线性范围中就行。

作者: wu11998866 时间: 2011-12-16 17:37

MTT时一般以490nm为检测波长，570nm为参考波长，不可以通用。
原理是：
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长MTT时为490nm。
但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小，MTT时为570nm。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

作者: yychen 时间: 2011-12-16 17:38

MTT时一般以490nm为检测波长，570nm为参考波长，不可以通用。
原理是：
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长MTT时为490nm。
但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小，MTT时为570nm。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

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您说570nm时formazan（MTT被还原的产物）对光的吸收最小是错误的哦，相反，570nm时其光吸收值最大，所以用570nm做MTT的检测波长是最好的。请看我发的图片，实线为formazan的吸收光谱，虚线为MTT原液的光谱。

图片附件: 22663256.jpg (2011-12-16 17:38, 22.11 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=9961

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:39

如果仪器上只能测405，490，和550，655
这个没有570啊

是否是选择550比较合适？

作者: yychen 时间: 2011-12-16 17:39 标题: 回复 #31 +小生怕怕+ 的帖子

我觉得550比较合适，这时候测出的OD值总体会比490nm时测得的高。对于毒蛇同志提到的参照波长，应该取655nm。因为由图可见，655nm时formazan对光的吸收值小于0.1。
我找到一篇参考文献：华东理工大学学报（自然科学版）；2000 Vol.26 No.1 P.103-106；MTT法测定人表皮癌细胞的抗药性；钱江潮。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:39

其实选择波长的关键不一定是要值最高，象favoritevirus提供的扫描图中490-600间都可用作MTT测量的波长，只要在此波长下，测量值与你的测量范围中的细胞数间呈线性关系即可。所以说有时当值普遍高出测量范围显不出差异时甚至可以通过调节波长而得到较好的结果。

作者: dragonkilly 时间: 2011-12-16 17:40

其实选择波长的关键不一定是要值最高，象favoritevirus提供的扫描图中490-600间都可用作MTT测量的波长，只要在此波长下，测量值与你的测量范围中的细胞数间呈线性关系即可。所以说有时当值普遍高出测量范围显不出差异时甚至可以通过调节波长而得到较好的结果。

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是的,个人觉得这个解释是比较中肯的,所有的波长选择,不应该在乎它是峰值与否，关键能和你所设定的对照显示出差别,能说明问题就是最好的.如果在你选择的波长不能很好区别样本,可以考虑在一定范围内选择其他的波长,这样的解释才是辨证而科学的思维方式.

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:40

各位前辈，能帮我看看下面的实验数据有没有什么硬伤么？？

细胞应该是混均了的。但是
1 在稍微高一点的浓度，细胞就死得光光了。例如30，24，18ug/ml.
2 在低浓度总是测得是促进细胞增长的。这不是一次实验的结果，基本上很多很多次实验都是这样的一个问题。
呜呜呜呜，就是我找不到在低浓度6ug/ml 的时候OD值竟然比对照还高的原因。

已经做过很多此预实验了，下面的情况每次都有，大家可以提点意见么？

药物浓度 30ug/ml 24.000 18.000 12.000 6.000 对照

复孔1 0.062 0.019 0.015 0.631 1.460 1.092
复孔2 -0.011 -0.019 -0.026 0.689 1.286 0.904
复孔3 -0.020 0.017 0.013 0.701 1.373 1.038
复孔4 0.002 0.044 -0.023 0.581 1.152 0.851
复孔5 0.014 -0.022 -0.001 0.742 1.341 1.007

平均值 0.009 0.008 -0.004 0.669 1.322 0.978
抑制率 0.990 0.992 1.004 0.316 -0.352 0.000

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:41

我努力了N次，但是排好版后在这里面显示的实验数据还是乱七八糟。晕倒了

我不知道怎么能让你们看清楚点。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:41

1、在低浓度时OD值高于对照是可能的，不过你的高出了太多了。你试验中每孔的终体积是否一致？
2、建议你药物浓度设置在6-18之间，多设几个点，超出此范围好象意义不大。
GOOD LUCK!

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:45

1、在低浓度时OD值高于对照是可能的，不过你的高出了太多了。你试验中每孔的终体积是否一致？
2、建议你药物浓度设置在6-18之间，多设几个点，超出此范围好象意义不大。
GOOD LUCK!

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恩，每孔终体积都是一致的
我试试，这是在加药后24小时测值就死光光了。很多次实验都是低浓度值很奇怪，再不行我就要研究此药在低浓度时促进癌细胞增殖的机理了。

我试着将血清浓度降低

刚把血球计数板摔了，郁闷，还不知道where 可以买到

作者: one 时间: 2011-12-16 17:45

1、你的药物是用什么配的？是不是培养基？药液体积占终体积多少？
2、24小时后镜下观察一下是否细胞污染了？

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:46 标题: 回复 #39 one 的帖子

药物是用1640培养基配置的，药液体积占终体积是3/5 。按你说的，150ul药液(母液50ug/ml)加入100ug/ml前天种板的细胞中，这就是终浓度为30ug/ml 了

2，观察过，生长状态良好啊

作者: one 时间: 2011-12-16 17:46 标题: 回复 #40 +小生怕怕+ 的帖子

加药时，对照孔有没有补加培养基？

作者: 缘yuan 时间: 2011-12-16 17:46

请问one，我加的药品里面含有抗氧化剂，在加MTT测定之前，是不是需要把细胞冲洗一下？如果需要，应该怎样操作呢？我培养的细胞是半贴壁细胞。谢谢先！

作者: one 时间: 2011-12-16 17:47 标题: 回复 #42 缘yuan 的帖子

半贴壁细胞是不能洗的，也没法洗啊。
样品中的抗氧化剂是你考察的对象还是为了样品的稳定而添加的？

作者: 缘yuan 时间: 2011-12-16 17:48

准确的说应该是抗氧化成分，是考察对象。
另外，我在用过氧化氢作氧化损伤处理后，用MTT法测得的数值也不太正常。是不是因为过氧化氢的氧化作用对MTT有干扰？如果有，应该怎样设法去除这种干扰呢？

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:48

加药时，对照孔有没有补加培养基？

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补加了呀，不补加的话对照孔和加药孔液体量相差太大，这个一眼就可以看出来的

作者: one 时间: 2011-12-16 17:49

过氧化氢损伤的是细胞线粒体，而MTT法反映的也是线粒的功能。
如果条件允许你换CCK-8试试看。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:49

to +小生怕怕+

是否你的药物在低浓度时确实有促进细胞增殖的功能？有时候实验结果与预期不符甚至相反不一定是坏事，可能是创新发现的曙光呢。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:49

你的对照值较低，是否是因为你的对照组设置在96孔板的最边上一列？
96孔板在试验中经常会有边缘效应，就是在边上每孔的值与中间是不一致的，这可能是由于边上的培养基易于蒸发的缘故。因此设对照组时尽量避免在板的边上。

作者: ha111 时间: 2011-12-16 17:50

CCK-8我们也在用，测出的数值很奇怪，没有细胞对照组的吸光度竟然达到0.7多，而有细胞的实验组才0.4～0.5多。既然MTT和CCK-8都是利用线粒体脱氢酶进行反应，为何没有细胞的对照组（只添加了培养液，之后添加CCK-8）还会有如此大的吸光度呢？

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:50

你的对照值较低，是否是因为你的对照组设置在96孔板的最边上一列？
96孔板在试验中经常会有边缘效应，就是在边上每孔的值与中间是不一致的，这可能是由于边上的培养基易于蒸发的缘故。因此设对照组时尽量避免在板的边上。

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太谢谢你的建议了，很有可能。我下次做的时候在四周加上一圈ＰＢＳ试试！
太崇拜了，谢谢。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2011-12-16 17:51

你的对照值较低，是否是因为你的对照组设置在96孔板的最边上一列？
96孔板在试验中经常会有边缘效应，就是在边上每孔的值与中间是不一致的，这可能是由于边上的培养基易于蒸发的缘故。因此设对照组时尽量避免在板的边上。

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太谢谢你的建议了，很有可能。我下次做的时候在四周加上一圈ＰＢＳ试试！
太崇拜了，谢谢。

作者: one 时间: 2011-12-16 17:51

建议在四周加上一圈正常培养基

作者: 了了 时间: 2011-12-16 17:51

我来说简单说两句
MTT的测定波长不是固定的，可以做个吸收波长扫描，一般来说是490－580，不一定非得用最大吸收峰比如上面说的570来测，因为，譬如峰形很尖的话，反而是用峰肩或次波峰的波长来测比较合适，所以490是完全可以的，也不存在用DMSO融解就非得用490来测，DMSO只是一种用来融解结晶的溶剂而已，SDS,酸性异丙醇也行。
IC50没有硬性规定，根据你的实验特点，你也可以譬如在24、48、72h都测下，然后根据OD值分别计算这三个时间点的IC50。
测生长曲线一般是36小时或48小时换液，这时当然不能加药啦，只是通过MTT法来间接发映细胞的增殖变化。
OD值一般在0.7-1.5之间合适，做MTT之前是要摸索的，目的是使得OD值与细胞数量呈线性关系。

作者: windy+++ 时间: 2011-12-16 17:52

看过上面的解释后,对我帮助很大.我也有个问题想问:96孔培养板孔间差异如何避免，如何尽量减少“周边效应”？我做MTT时，选择边上的孔做对照与选择中间的孔做对照OD值能差0.1，是***作上哪儿出问题了吗？请指教！

作者: windy+++ 时间: 2011-12-16 17:52

one你好！做药物对肿瘤细胞的敏感性实验MTT时,药物与细胞一起铺板呢?还是先选择一定细胞密度铺板,置培箱过夜使细胞贴壁后再加药？如果选择第二种方式，加药前要不要先换新的培基？

作者: 克隆鱼 时间: 2011-12-16 17:52

可否请大家再讨论一下,很多人都说测490下的值,但是SIGMA公司的MTT说明书上写的Spectrophotometric reading 570 nm,这个波长是不是更好一点呢?
今天扫描450-630之间,发再550这个位置的吸收什好像是最大的,处于峰值的地方.

作者: sunnyB 时间: 2011-12-16 17:53

假如被测试的药物具有抗氧化性（即还原性）的话，也可以使MTT还原，从而增加OD值。可以设几孔作为对照组，只加培养液和药物（即相同的实验只是没有细胞），也测个OD值，然后用你的用药组OD值减去无细胞对照组OD值就可以了。
缺点是比较麻烦，特别是当你的药物有几个浓度梯度的时候；算出来的数值也不是很准确，仅供参考。

作者: nn255 时间: 2011-12-16 17:53

我也来凑个热闹。既然有人说用DMSO溶解，最大吸收波长在XX。我想问问不同溶剂溶解MTT，会对它的最大吸收波长造成影响吗？

作者: 月牙牙 时间: 2011-12-16 17:54

半致死量怎么计算啊,计算软件计算出的结果怎么那么不可思意,非常大,大的不对?这个问题大家怎么解决的,请高手出招!

作者: greenbee 时间: 2011-12-16 17:54

one你好，我想问一下，我的MTT数据总是在0.2到0.3之间，这样是不是有点低了啊

作者: bamboo16 时间: 2011-12-16 17:57

还有问题就是：1 有时候加了conA比不加的OD值还要低，到底是什么原因啊，你们做的一般只加cona刺激细胞OD值是多少啊，我做的是0.2左右，是不是conA有问题啊，我看有效期到2009年7月呢，不应该啊，还是像你说的应该用生理盐水配置conA？我们是用PBS配的。
2 我们养的是小鼠脾细胞，96孔板培养72小时后细胞就死的差不多了，初始浓度是10*6左右，但我看资料都是培养72小时啊，为什么别人就做出来了呢？

作者: ladyhuahua 时间: 2011-12-16 17:58

如果化合物有颜色，也可以加几个对照组，只加培养基，加入化合物，不加细胞，MTT也加，最后测值的时候扣除本底吸收是不是就行了？

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