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标题: [求助]脂肪干细胞的培养问题 [打印本页]

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:22 标题: [求助]脂肪干细胞的培养问题

[求助]脂肪干细胞的培养问题

各位大哥们，我是刚开始做脂肪干细胞的培养，取的是两只200g左右的大鼠，用PBS清洗后，减碎后用0.075%的胶原酶I 水浴消化60min，每隔10min用手剧烈摇晃。可见50ml离心管中成乳白色，但是无论是消化后直接离心还是先用100目的筛网过滤后再离心都看不到细胞，做了好多次感觉离心下来的都是絮状物。后来我也试了0.1%的胶原酶，还是没有细胞。不知道是大鼠的量太少还是消化还不完全，离心后总感觉中间的液体层很混。请各位大哥们指点迷津。急求啊~~

作者: loli 时间: 2012-1-6 08:23

不知道你取得是哪个部位的脂肪，离心的转速和时间又是多少？

离心后中间液体层很混那也正常，会有些未消化的结缔及碎装的脂肪组织等

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:24 标题: 回复 #2 loli 的帖子

你好我取的是大鼠附睾旁脂肪组织，离心用的是1200rpm 6min 后来我也试过1200rpm 10min 但感觉效果都不好。

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:25 标题: 回复 #2 loli 的帖子

我取的是大鼠附睾旁脂肪组织，离心是1200rpm 6min，后来试过1200rpm 10min 感觉效果都不好。不知你们用的是多少？

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:26

我们是1500rpm 8min。消化脂肪的话我们是0.1%胶原酶，摇床上消化40分钟，消化效果应该会比你的方法好，消化好后脂肪应该呈乳糜状。

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:26

我试下这个方法。摇床上消化你们需要振荡么？我之前试过振荡，但振荡之后脂肪会聚集成块状。

还有你们脂肪量大概取多少是消化后直接离心还是过滤后再离心？

作者: loli 时间: 2012-1-6 08:28 标题: 回复 #6 tangxin_80 的帖子

嗯，需要振荡，200转/min左右40分钟。振荡之后是呈糜状。

我们做的是人源脂肪，量几十毫升到几百毫升不等。消化后100目筛网先过滤再离心

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:30 标题: 回复 #7 loli 的帖子

恩，好的，谢谢。我下次试下，你们来源比我们充足多了，大鼠一般都只能取到4-5ml。

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:30

现在成功了~~而且长的也不错，已经传代两次了。这是传代之前的已经长满的。

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10147

作者: loli 时间: 2012-1-6 08:31

QUOTE:

原帖由 tangxin_80 于 2012-1-6 08:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
现在成功了~~而且长的也不错，已经传代两次了。这是传代之前的已经长满的。

找到主要原因了吗？

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:32 标题: 回复 #10 loli 的帖子

恩。。我想之前主要原因我觉得是消化那一步没做好，而且过滤的孔径过小导致的。现在养的蛮好的

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:32

我还想问下，你做过脂肪干的免疫荧光鉴定么？

作者: loli 时间: 2012-1-6 08:33 标题: 回复 #11 tangxin_80 的帖子

你后来过滤用的多少目？

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:34 标题: 回复 #13 loli 的帖子

按照你说的100目过滤~·

作者: one 时间: 2012-1-6 08:35 标题: 回复 #14 tangxin_80 的帖子

请问lz和各位高手，有没有对比过用低糖DMEM和高糖DMEM分别培养脂肪干细胞，对于细胞状态影响大么？区别大么？

有文献说脂肪干在高糖培养液中生长的状态较好

但是在人体内糖分应该达不到高糖那个水平吧，想用低糖培养，但是发现细胞分叉比较多，不知道是不是和这个有关，谢谢

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:36 标题: 回复 #15 one 的帖子

我用的低糖DMEM。感觉细胞还可以啊~~

作者: dotaaa 时间: 2012-1-6 08:37

想问一下楼主，我也做的大鼠脂肪干细胞，取的腹股沟处的脂肪，取的大概不足4ml的脂肪，现在已经第8天了，细胞数还不是很多，你们一般第几天就可以传代了呢，谢谢

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-6 08:37

想问一下楼主，我也做的大鼠脂肪干细胞，取的腹股沟处的脂肪，取的大概不足4ml的脂肪，现在已经第8天了，细胞数还不是很多，你们一般第几天就可以传代了呢，谢谢

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