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标题: [讨论帖]细胞冻存管理 [打印本页]

作者: abc816 时间: 2012-1-12 08:25 标题: [讨论帖]细胞冻存管理

[讨论帖]细胞冻存管理（转载）

与细菌相比，细胞更加脆弱，所以细胞的冻存、复苏及管理需要更加小心和严谨。
对于细胞的液氮冻存管理是一个不容忽视的问题，记得读研究生时，实验室的液氮管理混乱，学生经常找不到自己的细胞，或者即使找到了也不容易复苏成功。

如今自己负责实验室管理，对于细胞冻存也采取了一些方案（制定了制度和细胞冻存记录表），刚开始的时候，细胞种类和数量较少，比较好管理。但是随着实验室的发展，冻存的细胞种类和数量越来越多，而且不断有新的细胞放入和细胞复苏。所以现在逐渐开始发现，细胞不太容易被找到，而且冻存细胞前也要先看看液氮罐哪里有空位，这样的次数多了对细胞的影响很大。

对于细胞冻存管理请大家踊跃发言，提出你们的宝贵意见。

下图是我制定的细胞冻存和复苏登记表，供大家参考，并请各位提出改进意见。谢谢

图片附件: 62312180.snap.jpg (2012-1-12 08:25, 21.8 KB) / 该附件被下载次数 129
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10210

作者: zhezhe 时间: 2012-1-12 08:26

置顶支持！

“但是随着实验室的发展，冻存的细胞种类和数量越来越多，而且不断有新的细胞放入和细胞复苏。所以现在逐渐开始发现，细胞不太容易被找到，而且冻存细胞前也要先看看液氮罐哪里有空位，这样的次数多了对细胞的影响很大。”

很多实验室都会遇到这样的问题，值得大家交流经验~

细胞登记还需要有细胞来源（ATCC；XX细胞库；XX实验室等）

作者: hyuu 时间: 2012-1-12 08:26

把每个冻存架标上号，每个架子上的冻存盒自下而上依次编号（即使不写明，也要默认自上往上第几盒），在记录本上明确记录各人的冻存架号，每个冻存架上所冻细胞的种类，冻存管数。每次有人复苏细胞，需要登记复苏细胞名称，管数，如此，每次打开液氮罐之前先搞清细胞放在何处，打开后直接取用即可。我们一般这样操作，目前还没出现什么问题。
如果实验室人多，且冻存盒数少，那只好多人分一个冻存架，但务必标明冻存盒归属，这样在一两分钟内取出细胞，不会影响大局。
我们这里冻存细胞存在的问题：即使冻存管口多层封闭，液氮仍有可能会跑进部分冻存管，只要有液氮进入，细胞复苏时即使不炸管，也是有百分之六七十的污染率，这一直是我比较头痛的问题，因此，最近在考虑，如果可以，想买个深低温冰箱（-150度）用于冻存细胞和组织。

作者: hyuu 时间: 2012-1-12 08:26

外加每一批次的冻存数量；经手人；冻存管、冻存液、培养基、血清等厂家，批号；冻存后24h内复苏情况；

以及之后每一次的复苏情况（状态、贴壁时间、有无发现污染等）

作者: abc816 时间: 2012-1-12 08:27

请大家分享一下你们的细胞冻存和复苏登记本格式！

作者: woshituzhu 时间: 2012-1-12 08:27

有条件的实验室可以考虑一下冻存管理系统，就是将信息输入到计算机，再自动打印生成一个条形码，贴在冻存管外面，这样样品的位置和信息就非常方便查询，复苏的时候用条码枪扫描一下就可以了。

作者: 泡泡 时间: 2012-1-12 08:28

把每个冻存架标上号，每个架子上的冻存盒自下而上依次编号（即使不写明，也要默认自上往上第几盒），在记录本上明确记录各人的冻存架号，每个冻存架上所冻细胞的种类，冻存管数。每次有人复苏细胞，需要登记复苏细胞名称，管数，如此，每次打开液氮罐之前先搞清细胞放在何处，打开后直接取用即可。我们一般这样操作，目前还没出现什么问题。
如果实验室人多，且冻存盒数少，那只好多人分一个冻存架，但务必标明冻存盒归属，这样在一两分钟内取出细胞，不会影响大局。
我们这里冻存细胞存在的问题：即使冻存管口多层封闭，液氮仍有可能会跑进部分冻存管，只要有液氮进入，细胞复苏时即使不炸管，也是有百分之六七十的污染率，这一直是我比较头痛的问题，因此，最近在考虑，如果可以，想买个深低温冰箱（-150度）用于冻存细胞和组织。

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用质量好的冻存管，冻存前拧紧，在程序降温盒内-80度过夜，然后再放入液氮这样可能会解决进液氮的问题，我们这边倒是很少有进液氮这种事

作者: 831226 时间: 2012-1-12 08:28

最好手写板和电子版两套管理，手写版准确不易造假可作为原始记录资料保存，电子版便于管理使用。就是麻烦点

作者: jrwyyplt 时间: 2012-1-12 08:29

我们实验室也刚刚开始进行细胞冻存的管理，虽然进程缓慢，但还是一步一步的前进着。就我们实验室情况大体说明一下，不足之处还望各位指正。

1、登记方式：采用手写版（订装成册放在液氮灌旁边）和电子版（放在实验室的公共邮箱里）
2、登记的内容：细胞名称（中英文）、细胞编号、细胞来源、细胞特征描述（包括细胞图片）、细胞使用培养基以及冻存人、冻存支数、冻存时间和位置。
3、另外由于本实验室使用的冻存盒是抽屉式样的，所以针对相应的冻存盒做了电子版的示意图，并在毎一格子中做好细胞位置的登记。

作者: utt0989 时间: 2012-1-12 08:40

提一个建议，不要根据细胞来建立档案，要根据你的冻存位置来
企业的方法是，根据冻存的位置，来登记管号，不要根据你的细胞株来确定。
1.给液氮罐加锁，专人管理，每次开锁都有记录，谁在谁开的锁，取出来哪一只细胞
2 边上放个登记本，根据每个冻存架所保存的细胞种类来登记
3 关于进液氮污染的问题，用医用橡皮胶布围绕管子口缠一圈，上面还可以写上冻存细胞名称和批号。

作者: TAT 时间: 2012-1-12 08:45

冻存管封上封口膜就可以防止液氮进入了，
另外在北京利康达胜公司有专门做液氮冻存盒地，
很好用。查找，冻存很方便

作者: tieshazhang 时间: 2012-1-12 10:18

对于公共实验室，给液氮罐加锁，专人管理，存取均需登记，形成可追溯体系。
液氮罐定置管理。以液氮罐为管理主体。

作者: glass 时间: 2012-1-12 10:20

一定要有个经手人，保证任何人萃取细胞都要经过这个人手，而且看了一下，那个表里面应该加上细胞的描述，免得时间长了不知道那细胞经过什么处理过。

作者: glass 时间: 2012-1-12 10:21

我认为冻存和复苏细胞应该有专人负责;有此人来进行管理，包括细胞的冻存和复苏工作，和做好下面工作：

1、制定登记方式：采用手写版和电子版
2、制定登记的内容：细胞名称（中英文）、细胞编号、细胞来源、细胞特征描述（包括细胞图片）、细胞使用培养基、冻存支数、冻存时间和位置。
3、建立细胞库，细胞库分为一级、二级、三级。如果要使用细胞，先用三级细胞。
使用细胞者，先向该管理者申请，此人向你提供有关你所需细胞的一切信息，签字后方可使用。

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-1-12 10:22

存细胞除了按地址存放好找之外。很多娇贵的细胞一开始不要立即放入液氮液体中存放，如果有气相液氮罐最好先保存在气相液氮中，如果没有这种液氮罐，则放在普通液氮罐的上层部分（液氮蒸汽部分）。这样保存的细胞不容易受到伤害。
Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-1-12 10:25

冻存管封上封口膜就可以防止液氮进入了，
另外在北京利康达胜公司有专门做液氮冻存盒地，
很好用。查找，冻存很方便

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封口膜似乎不耐超低温的，但是可以用保鲜膜切成小块的来裹住管子，这样就不会进液氮了

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-1-12 10:27

存细胞除了按地址存放好找之外。很多娇贵的细胞一开始不要立即放入液氮液体中存放，如果有气相液氮罐最好先保存在气相液氮中，如果没有这种液氮罐，则放在普通液氮罐的上层部分（液氮蒸汽部分）。这样保存的细胞不容易受到伤害。
Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

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细胞冷冻最初的24小时一般放在程序冷冻盒放在-80度冰箱，这样对细胞损伤比较小。放在液氮上方（大约是-90度，温度差不多，但是没办法实现程序冷冻的，就算在外面包一层棉花也是开始时每分钟下降几度的，这样不利于细胞的）的话，对细胞损伤也还是比较大的。

作者: 爱老虎游tt 时间: 2012-1-12 10:28

我想问一下各位高手，我的细胞刚拿回来时都是好好的，就冻存了一批，等到把冻存的细胞复苏的时候，细胞状态都不是很好，传代以后死得很多，我们实验室冻在-80低温冰箱的，我的细胞冻了有四个月。

作者: yychen 时间: 2012-1-12 10:28

1，细胞冻存，建立数据库，每次冻，复苏做记录，冻存时记录位置号。
2，专人管理。
3，冻存时，最好保证细胞状态好。

作者: yychen 时间: 2012-1-12 10:29

我想问一下各位高手，我的细胞刚拿回来时都是好好的，就冻存了一批，等到把冻存的细胞复苏的时候，细胞状态都不是很好，传代以后死得很多，我们实验室冻在-80低温冰箱的，我的细胞冻了有四个月。

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细胞不宜长时间保存在-80，温度无法确保。

作者: lixi559 时间: 2012-1-12 10:30

我们实验室有专门老师管理，有个小本子，冻存与复苏都要登记时间、实验人、细胞种类、存放位置，很少出错的

作者: dog002 时间: 2012-1-12 10:31

封口膜在液氮里浸泡后就会脱落，原因不详，可能和低温以及塑料的变性有关，封口最靠谱的还是医用橡皮膏。
冻细胞缓冻速溶。
没有程序降温盒的话，用个泡沫盒子带盖子可以密封的。放到-70度冰箱里头，细胞预先降温到4度，最好能在-20度里冻一会（有降温保护的）。
把盒子盖上然后就冻吧，透过缝隙的慢慢的降温，不比程序降温盒差，顺便赞一个楼上用棉花的非常聪明的方法

作者: caihong 时间: 2012-1-12 10:32

想问一下，冻存前有杀支原体的必要吗？听说支原体能在液氮中生存

作者: 铜雀 时间: 2012-1-12 10:36

冻存前确认细胞形态以及活力，通常建库时都是买来的细胞扩增，然后建库。建好库了才是实验。
实验室的话，尤其是自己分的细胞，原代细胞，建议，在确认你所分离到的细胞是你的目标细胞时就开始建库吧。不然说不定哪天培养箱***了，实验室抽风了，熏甲醛了，培养基染菌了，n多原因可以把你所有工作都毁掉。而冻存细胞是让你重新开工最快的方法。
冻存结束后，取出3只，1只检测无菌，1只复苏，检测活力。1只检测支原体。

顺遍问一句，大家认为染了支原体的细胞还有多大的保存意义？有文献说中国貌似30%的细胞都带支原体，我们也刚经历了一次非常惨痛的支原体污染。
大家在实验室工作时，如何确定支原体污染，如何对抗支原体污染呢？
我只知道支原体可以在-80度里很好的被保存下来，液氮？没尝试过，不知道。

作者: baidukk 时间: 2012-1-12 10:40

如果是常用切单一的细胞，我们是建立三级库管理的即原始库，主库和工作库，原始库不经常动的，但主库和工作库需两年后重新建立，以保持细胞的活性。对细胞库可实行双人管理。

作者: 生物迷 时间: 2012-1-12 10:42

本人也在整理细胞库，下面是我最近一段时间通过查资料整理的一份细胞冻存复苏记录，请各位哥哥姐姐提意见：
其中Location是保存位置，如A-3-6,表示A架第3层第6孔
Remaining指剩余数，这样很容易看出还剩多少管细胞，无需将细胞提出来数
Growth Properties：贴壁、悬浮或半悬浮
Media指该细胞生长培养基
Frozen in指细胞冻存液成分

图片附件: 99601549.jpg (2012-1-12 10:42, 28.12 KB) / 该附件被下载次数 14
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10211

作者: greenbee 时间: 2012-1-12 10:43

请问一下，液氮气态层温度到底是多少啊？跟液氮里温差很大吗？不是说最好保存在气态层吗？温度可以保证，还不容易管子炸裂。

作者: ladyhuahua 时间: 2012-1-12 10:43

建议液氮也要管理，定期检查，及时加入。
条件允许的话，弄个温度报警器，毕竟存放的细胞如果应为液氮不足导致细胞挂掉，损失是无法估量和弥补的。

作者: zhezhe 时间: 2012-1-12 10:49

我目前了解到的管理方法是细胞冻存都是各自自己操作的，但是在从-20度转到-80度，最终转入液氮罐中都是专门人管理，而且细胞的复苏冻存记录也都是这个人专门管理，全部都是电子版。不过楼上有人提到用手写版，我觉得有些实验室真的很难养成，困难还是很多的，不过最近大家都想设计细胞库管理软件，不过不知道这样透明化会不会不太好？

作者: flower-201 时间: 2012-1-12 10:50

我们这边都是科室自己买液氮然后交实验中心维护这样科室或者各个老板之间都可以自己买自己管理自己的估计最好了

作者: ha111 时间: 2012-1-12 11:05

细胞冻存是目前我们培养原代细胞遇到的最大问题。由于国内快递速度慢且服务差，目前我们给客户发货一般都是送货上门或者让客户来取，而且不能距离太远，这样无形中给我们原代细胞销售和发货带来了很大的局限性。原代细胞比细胞株更娇贵，冻存后更不容易复苏。如果能够有效解决原代细胞冻存问题，保证细胞发货4-5天内能够存活复苏，这是我们一直在探索的问题！希望大家能够多多指点，谢谢！

作者: eric930 时间: 2012-1-12 11:05

企业中多数情况一个库用一个普通液氮罐即可；但是共用实验室则不同，除了使用方便外，一定要防范交叉污染。
曾有研究发现液态氮有可能成为交叉杂染之媒介（Brisko T et al., Cell Biochem Biophys. 2007;48:165-175）。

作者: HP007 时间: 2012-1-12 11:05

我也觉得根据冻存位置来编排表格比较好，因为细胞库是处于不断流动的状态的，可以对每一个位置做一排表，空格内写明冻存时间和细胞种类，然后拿出来后就划掉这个格子，再放入细胞就在这个格子后的新格子里再写明新细胞的名称，代次等信息

作者: 911 时间: 2012-1-12 11:06

与细菌相比，细胞更加脆弱，所以细胞的冻存、复苏及管理需要更加小心和严谨。
对于细胞的液氮冻存管理是一个不容忽视的问题，记得读研究生时，实验室的液氮管理混乱，学生经常找不到自己的细胞，或者即使找到了也不容易复苏成功。

如今自己负责实验室管理，对于细胞冻存也采取了一些方案（制定了制度和细胞冻存记录表），刚开始的时候，细胞种类和数量较少，比较好管理。但是随着实验室的发展，冻存的细胞种类和数量越来越多，而且不断有新的细胞放入和细胞复苏。所以现在逐渐开始发现，细胞不太容易被找到，而且冻存细胞前也要先看看液氮罐哪里有空位，这样的次数多了对细胞的影响很大。

对于细胞冻存管理请大家踊跃发言，提出你们的宝贵意见。

作者: BUK 时间: 2012-1-12 11:07

如果暂没有液氮罐，能不能将冻存细胞先存在-80度冰箱呢，对细胞有影响吗？求高手赐教

作者: 社会主义好 时间: 2012-1-12 11:07

请问国内哪有代购M2-10B4细胞株？谢谢！

作者: 四福晋 时间: 2012-1-12 11:08

细胞管理，即是给各细胞株、克隆等建立一个台账。在生产中管理一班比较简单，因为产品比较单一。研发过程就比较复杂了，涉及各种细胞系、亚克隆等。我们现有的做法是在冻存管上标明细胞株的名称、代号、冻存日期、冻存人（缩写）；在冻存盒上分区；在液氮罐中分提手；然后建立台账进行注明（包括进出库记录、细胞信息等、冻存人/管理员信息等）。

下一步可能引进NUNC的条码系统+计算机系统，这样可以直接扫条码进行管理。但是也需要明晰的记录。另外，专人进行种子库（或液氮罐）的管理也是必要的。

另外，液氮罐一般需要配有警报系统，一旦温度出现异常（如液氮泄露、液氮量不足等）则直接进行报警。报警系统可与负责人的手机或是值班室的座机联通。

从安全的角度而言，种子库需要至少存放在2个以上分隔的地点，以防止不可预料的灾害的发生，如火灾等。这些要求在FDA、WHO、ICH的法规上都有阐述。

作者: sunnyB 时间: 2012-1-12 11:08

用质量好的冻存管，冻存前拧紧，在程序降温盒内-80度过夜，然后再放入液氮这样可能会解决进液氮的问题，我们这边倒是很少有进液氮这种事，

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完全同意，冻了很多次了，从没见过进液氮的问题。

冻存管的质量是其一，-80度过夜是其二。

作者: junjie05 时间: 2012-1-12 11:20

看到好多人说用质量好的冻存管，液氮就不会进入了。我们用进口corning的，但还是会进入，使用橡皮膏和保鲜膜也都不管用，请问大家都使用什么牌子的冻存管，内旋还是外旋的，多谢高人指点

作者: qqq111 时间: 2012-1-12 11:23

目前我们实验室的液氮存储管理简直就是无序，感谢楼上诸位的方法和经验，让我受用了

作者: milkdog 时间: 2012-1-12 11:23

冻存前确认细胞形态以及活力，通常建库时都是买来的细胞扩增，然后建库。建好库了才是实验。
实验室的话，尤其是自己分的细胞，原代细胞，建议，在确认你所分离到的细胞是你的目标细胞时就开始建库吧。不然说不定哪天培养箱***了，实验室抽风了，熏甲醛了，培养基染菌了，n多原因可以把你所有工作都毁掉。而冻存细胞是让你重新开工最快的方法。
冻存结束后，取出3只，1只检测无菌，1只复苏，检测活力。1只检测支原体。

顺遍问一句，大家认为染了支原体的细胞还有多大的保存意义？有文献说中国貌似30%的细胞都带支原体，我们也刚经历了一次非常惨痛的支原体污染。
大家在实验室工作时，如何确定支原体污染，如何对抗支原体污染呢？
我只知道支原体可以在-80度里很好的被保存下来，液氮？没尝试过，不知道。

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好像我看到过罗氏有一种支原净的产品，不知道大家使用过没有，效果如何？

作者: 伊莎贝拉 时间: 2012-1-12 11:24

我是新手，想买肿瘤细胞系做实验，请问我该买原代的，还是传代的？两者有什么区别？两者价格相差很多；买回来后，我该如何分装，冻存？我现在有液氮罐，有4度、-20度冰箱，但没有-80度冰箱。

作者: abc816 时间: 2012-1-14 08:21

把每个冻存架标上号，每个架子上的冻存盒自下而上依次编号（即使不写明，也要默认自上往上第几盒），在记录本上明确记录各人的冻存架号，每个冻存架上所冻细胞的种类，冻存管数。每次有人复苏细胞，需要登记复苏细胞名称，管数，如此，每次打开液氮罐之前先搞清细胞放在何处，打开后直接取用即可。我们一般这样操作，目前还没出现什么问题。
如果实验室人多，且冻存盒数少，那只好多人分一个冻存架，但务必标明冻存盒归属，这样在一两分钟内取出细胞，不会影响大局。
我们这里冻存细胞存在的问题：即使冻存管口多层封闭，液氮仍有可能会跑进部分冻存管，只要有液氮进入，细胞复苏时即使不炸管，也是有百分之六七十的污染率，这一直是我比较头痛的问题，因此，最近在考虑，如果可以，想买个深低温冰箱（-150度）用于冻存细胞和组织。

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可以用封口膜试试，在放入液氮之前都裹上封口膜，一般就不会再渗入液氮了

作者: abc816 时间: 2012-1-14 08:22

看到好多人说用质量好的冻存管，液氮就不会进入了。我们用进口corning的，但还是会进入，使用橡皮膏和保鲜膜也都不管用，请问大家都使用什么牌子的冻存管，内旋还是外旋的，多谢高人指点

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试试封口膜吧

作者: +小生怕怕+ 时间: 2012-1-14 08:23

管理细胞是繁琐复杂的工作，最近我也开始了这个任务。管理前细胞很混乱，每次取放细胞都是随机的，有些学生有点责任心会知道自己的细胞在哪里，剩余多少，有些学生则凭借不靠谱的记忆力。

我个人认为，管理细胞不能单靠位置来记录，比如几号管的第几个提第几个盒子，第几个位置。这样一个8提每提10盒的液氮罐就需要管理大量的数据繁琐复杂，而且每次都要翻阅记录来寻找细胞，造成很多细胞的重复冻存，很多细胞剩余不多又无人管理。所以我认为如果单靠表格来管理应该以细胞为单位，这样管理的数据才几十种，而不是上万个格子。目前我就是这样管理的，细胞有40种左右。
但是这几天我一直在寻找一种软件，期待能够用软件来管理，国内有一种软件1800元，不过界面不太漂亮，叫《细胞冻存标本管理软件》，可以试着考虑一下。

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-1-14 08:26

如果暂没有液氮罐，能不能将冻存细胞先存在-80度冰箱呢，对细胞有影响吗？求高手赐教

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三四月不成问题，我们最长放过半年，只要中间没有断电等事故发生就好~~~

作者: 兔唇 时间: 2012-1-14 08:27

对于这个，值得注意的是冻存管在冻存前一定要拧紧，否则在复苏的时候会爆炸（亲身体验），可以做一个冻存掉价，做好记录，冻存可以采用程序冷冻盒，非常好用。

作者: loli 时间: 2012-1-14 08:27

我也试过几次冻存管爆开，吓得我啊~
我们是冻存和复苏都登记在表上，同时也有一个电子版的登记表
基本都是我冻存和复苏，所有人要用细胞都是经过我的，还不算混乱。不过是接手别人的来做，以前怎么放都很乱的。想整理一下又担心细胞拿出来会融，怎么办？

作者: yhz1973 时间: 2012-1-14 08:32

支原体可以抗液氮冻存啊？汗~~~支原体污染的确是个令人头疼的问题。。。。。。

作者: misswu61 时间: 2012-1-14 08:32

封口膜在液氮条件下不具有密封性了，NUNC有一款冻存管套，可封存冻存管用，耐冻，唯一的缺点是没有配套的热合机，很可惜，仍旧在寻找合适的热合装置！

作者: 铜雀 时间: 2012-1-14 08:34

把每个冻存架标上号，每个架子上的冻存盒自下而上依次编号（即使不写明，也要默认自上往上第几盒），在记录本上明确记录各人的冻存架号，每个冻存架上所冻细胞的种类，冻存管数。每次有人复苏细胞，需要登记复苏细胞名称，管数，如此，每次打开液氮罐之前先搞清细胞放在何处，打开后直接取用即可。我们一般这样操作，目前还没出现什么问题。
如果实验室人多，且冻存盒数少，那只好多人分一个冻存架，但务必标明冻存盒归属，这样在一两分钟内取出细胞，不会影响大局。
我们这里冻存细胞存在的问题：即使冻存管口多层封闭，液氮仍有可能会跑进部分冻存管，只要有液氮进入，细胞复苏时即使不炸管，也是有百分之六七十的污染率，这一直是我比较头痛的问题，因此，最近在考虑，如果可以，想买个深低温冰箱（-150度）用于冻存细胞和组织。

作者: 彼岸花opp 时间: 2012-1-14 08:35

细胞冻存一般都是程序冻存的吧，先4度30min，再-20度1h，再-80度过夜，最后放进液氮里就行了。我们一直都是这么做的，好像也没什么问题。

作者: loli 时间: 2012-1-14 08:35

我们现在的细胞冻存管理也比较乱。主要是放的时候没有孔号，常常是有空位就放进去，然后复苏的时候一个一个的找，也比较麻烦

作者: 穿越时空 时间: 2012-1-14 08:36

我也提个建议啊：我们实验室的冻存和复苏信息中有一项你们没有提到的，就是在冻存前和刚复苏后给细胞拍照，作为冻存前后的对比，就像现在的纯种犬生下来和死亡前都是拍照建立“身份证”一样，同时冻存完毕一个月后，必须做复苏实验

作者: vvmmoy 时间: 2012-1-14 08:37

管理好细胞库不仅需要这样子的登记措施，管理好库文件也相当重要。冻存记录，复苏记录，不仅仅是建立卡片的事情，还有相关的操作人员，操作步骤，操作中的异常情况记录等等。

细胞的来源，种属等信息也是非常重要的，给每支细胞配备唯一的身份代码，录入数据库进行管理。当然，需要一定的计算机数据库管理知识。不过做好了，对将来的细胞使用和申报都带来便利。

作者: 社会主义好 时间: 2012-1-14 08:54

今天师姐给了我四中皿脂肪细胞，可是发现我没有培养基了，好可悲啊，最可悲的是pbs也不多了，连冻存都没有退路了，只好把培养基一倒，做油红O了。所以冻存前可要准备齐全东西啊，我感觉实验最重要的就在于准备。

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-14 08:55

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图片附件: 82035273.jpg (2012-1-14 08:55, 22 KB) / 该附件被下载次数 31
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10214

作者: 四福晋 时间: 2012-1-14 08:56

封口膜在液氮里浸泡后就会脱落，原因不详，可能和低温以及塑料的变性有关，封口最靠谱的还是医用橡皮膏。
冻细胞缓冻速溶。
没有程序降温盒的话，用个泡沫盒子带盖子可以密封的。放到-70度冰箱里头，细胞预先降温到4度，最好能在-20度里冻一会（有降温保护的）。
把盒子盖上然后就冻吧，透过缝隙的慢慢的降温，不比程序降温盒差，顺便赞一个楼上用棉花的非常聪明的方法

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请问一下，医用橡皮膏封口冻存管的效果怎样？怎么使用呢？会不会影响到冻存管放到程序降温盒里？

作者: guagua 时间: 2012-1-14 08:58

学到了很多，但有一个不明白的地方：细胞入库之前怎么样确定有没有支原体呢？有的话怎样去除呢？谢谢

作者: 园丁## 时间: 2012-1-14 09:03

个人一点经验：

1、依据冻存位置记录

2、如果有条件的话，将保种的细胞和需要经常复苏取用的细胞分开保存

3、parafilm膜封口，以免液氮进入管内

4、在-80度不要太久，8小时以后及早移入液氮罐

作者: bamboo16 时间: 2012-1-14 09:04

建议表格中加入操作者和复合者这样出现问题好解决

作者: pengke1983 时间: 2012-1-14 09:05

个人经验，在每个位置的冻存架上系上一个卡片，上面包含责任人，冻存日期，冻存细胞名称，冻存位置，解冻日期，返还情况。

作者: @STAR@ 时间: 2012-1-14 09:05

我做过植物愈伤的冷冻，不怎么一样

作者: wu11998866 时间: 2012-1-14 09:14

封口膜和医用橡皮膏似乎都不耐超低温。只要将冻存管拧正拧紧，液氮是不会进去的。我们实验室在做好书面登记的同时，在冻存管上也做上详实的标记。

作者: 831226 时间: 2012-1-14 09:15

感觉还是画一个二维的图好，每个框对应着细胞存放的位置，一个框分成几行，每解冻一次就把上一行划掉写上复苏情况，再放细胞进去就在下一行写上。每一层记录一张

作者: TNT 时间: 2012-1-14 09:15

我天天冻细胞，罐子少，还借别人的用，由于位置少，冻的位置乱七八糟的，真烦人，找起来真的是想撞死。

作者: rxcc33 时间: 2012-1-14 09:16

哎，我们现在还是在自己的绳子上面贴纸条写名字，液氮桶外面绑的跟渔网似的绳子

作者: 小鱼鱼 时间: 2012-1-14 09:16

其实这些问题，用一款好点的软件就能很好的解决了，我们公司现在就在用上海亚迅信息技术有限公司的细胞可视化仓储管理软件，不仅操作方便了很多，而且也节约了不少人力物力，最重要的是大大降低了细胞样本变质的风险。大家如果有需要，也可以试试的

作者: tangxin_80 时间: 2012-1-14 09:17

推荐一个excel app，一般情况应该都能应付了。

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