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标题: [求助]我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何 [打印本页]

作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 14:56 标题: [求助]我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何

各位群友，麻烦帮我看一下培养了11天的SD大鼠原代MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何，同一培养瓶照的相片显示有的MSC细胞形态呈比较典型的梭形，有的呈不规则形，有的地方细胞相当密集，而有的地方细胞又很稀疏，因为是大鼠MSC培养新手，不知这样的细胞状态如何，能否传代？现上传部分照片求助。

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 14:57

继续上传

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 14:57

再看看这张

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 14:58

再看一下这一张

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 14:59

再帮我看一下传代完第二天的照片，怎么都成这种形态了？养了几个月细胞，每次都这样，很无助啊

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 14:59

再传一张看看

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作者: 33号 时间: 2012-2-10 15:00

第一张的形态是相符的,但是要经过一些免疫组化排除其他细胞群,骨髓间充质干细胞在生长达70%时就要传代,否则细胞会死亡,你后面的细胞图片就有死亡的细胞

作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:01

感谢群友的回答，现在我们的MSC已经传到第三代，但是同一批第二代细胞传下来的两瓶第三代细胞形态相差甚大，请各位战友帮忙看看问题出在哪里，什么原因引起的，有何对策，现在上传第三代第5天的MSC细胞图片

作者: yes4 时间: 2012-2-10 15:02

细胞状态还可以呀。建议先用简单的方法看看，如成骨诱导液诱导后，用ALP或Von Kossa染色看看。

作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:03

这是一张细胞呈集落样生长的图片，MSC呈放射状聚集在一起

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:03

下面一张MSC排列紊乱

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作者: yes4 时间: 2012-2-10 15:03

状态还可以啊！用低糖的培养液，不过到了六代以后形态就有点变了。

作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:04

这是一张细胞呈集落样生长的图片，MSC呈放射状聚集在一起

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再上传一张该瓶第三代MSC细胞长到第9天的图片

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:04

该瓶细胞当天进行传代，再请各位群友对该细胞状态给与评论

作者: utt0989 时间: 2012-2-10 15:05

总体上看，您的细胞状态还是不错的
刚开始培养时，细胞有呈聚集样生长是正常的
如果有大量圆形折光性强的死细胞，可以半量换液加以去除
msc大约经过二到三次传代会达到稳定状态，细胞呈现均匀贴壁生长，与其他种类细胞相比，折光度略低
此时如果细胞生长缓慢，可由原来低糖的培养基换成高糖培养基
传代七八次以后，由于分化等原因细胞状态可能发生变化，所以试验尽可能采用在此之前细胞完成
个人之见
祝你成功

作者: pencil菲 时间: 2012-2-10 15:06

我觉得是不错的MSC,恭喜！！

作者: tangxin_80 时间: 2012-2-10 15:06

我觉得你的细胞长得不错，传代后成为那种样子是因为细胞过少，细胞称为片状生长形态就变了。看看你传代是不是细胞过少或者死亡过多？当然，应该进行鉴定。
祝你成功。

作者: KGZ564 时间: 2012-2-10 15:07

没有养过SD大鼠的原代MSC，倒是养过人的原代MSC，也贡献出来作为参考，希望对F502战友有帮助！
1、培养基是高糖的DMEM+10%FBS，细胞形态似典型间质细胞形态，延长平铺，呈现拉丝状，透光性强。
2、考虑到其干细胞的分化潜能，故每次传代都较稀，平均1传3-4，大约4天需传代1次，第2-3代时大量冻存备后用！

这是低倍镜下拍的照片，不是很清楚，只能看到轮廓！

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作者: KGZ564 时间: 2012-2-10 15:07

这是中倍镜下的，看得比较清楚！形态也比较典型！

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作者: KGZ564 时间: 2012-2-10 15:08

这是高倍镜下的，不很清楚，但隐隐约约也能看到轮廓！

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作者: utt0989 时间: 2012-2-10 15:08

我也遇到了一样的情况
PRIMARY CULTURE 还可以 , 一旦传代细胞就变得老大 , 都不识FIBROBLASTELIKED 了 , 你现在的还好吗, /

还有你是否也注意到, RAT 的MSC培养时会出现多核的大细胞里面常包含好几个折光度略低的小细胞 ??/ 我每次都见得到, 是不是我还是那里做的不对?

都好久了, 细胞还是养不好闹心 !!! 就是不知道错在哪里 ??

作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:10

感谢以上几位群友的热心帮助和悉心指教，现在继续上传第四SD大鼠MSC第三天照片，请各位战友继续关注我们的帖子，非常感谢大家的支持！

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作者: @STAR@ 时间: 2012-2-10 15:10

我也遇到了一样的情况
PRIMARY CULTURE 还可以 , 一旦传代细胞就变得老大 , 都不识FIBROBLASTELIKED 了
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考虑可能为细胞老化的缘故，建议：
1.培养方法的选择：全骨髓贴壁法方法简便易行。
2.培养基的选择：低糖型DMEM或者低糖型DMEM-1640，胎牛血清建议使用进胎牛口血清,如Hyclone 或Gibico；浓度为10％。PH值最好在7.2左右，最好稍偏酸。培养基最好是新鲜配置的。
3.首次换液的时间：我的是48h后换液。
4..首次传代的问题：消化酶用量不要太多，特别是首次消化的时候，以免损伤细胞，影响其活力。消化的时间不能太久。另外首次传代的时间的不要求细胞都长得很满，可能只要是集落长得比较满的话可以传代，一般长满70％左右就可以传代。一般是6-10天左右，传代的时候如果细胞的浓度不够的话可以2：1传代。
5..接种细胞的密度问题：细胞接种密度以大于10的五次方为宜。

作者: orangecake 时间: 2012-2-10 15:10

你好！我最近才培养骨髓间充质干细胞，请叫一下您的SD大鼠用的是多少克的，还有您使用什么方法来分离培养骨髓干的？我是新手，之前用percoll分离的方法都没有养出来，希望您能指点一下！不胜感激

作者: pencil菲 时间: 2012-2-10 15:11

你好！我最近才培养骨髓间充质干细胞，请叫一下您的SD大鼠用的是多少克的，还有您使用什么方法来分离培养骨髓干的？我是新手，之前用percoll分离的方法都没有养出来，希望您能指点一下！不胜感激

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我们一般使用100--120g的，股骨比较容易分离，贴壁细胞也更多....你可以试试看

作者: 薄荷侠 时间: 2012-2-10 15:11

你好，请问一下楼主，你取原代细胞的时候，是一根大鼠股骨的细胞种到一个25cm^2的培养瓶里面的吗？我感觉你的细胞养的挺好的，我的里面杂细胞较多，我在想是不是我原代接种密度的问题。非常感谢你的帮助！

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